S100A12在強直性脊柱炎患者血清中的表達和臨床意義

S100A12在強直性脊柱炎患者血清中的表達和臨床意義

劉歡1，楊曉平2， 楊曉凌1*

(1.上海市長寧區光華中西醫結合醫院，上海200052；2.第二軍醫大學附屬上海長征醫院 風濕免疫科)

強直性脊柱炎是一種以中軸關節慢性炎癥反應為主要特征的全身性疾病[1]，在我國發病率約為0.26%，主要癥狀是反復發作的頑固性腰痛、腰骶部僵硬感，晚期可發生脊柱強直、畸形甚至嚴重的功能障礙，強直性脊柱炎起病比較隱匿，病程較長，具有很高的誤診率[2]，由于其發病機制尚不明確，目前臨床上尚缺乏特效性的藥物，因此早期明確診斷對于強直性脊柱炎的治療具有重要的臨床意義，本文通過測定強直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表達水平的變化，以期為臨床上強直性脊柱炎的早期診斷及治療提供指導。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2010年2月至2013年10月在我院接受治療的強直性脊柱炎患者32例，其中男19例，女13例，年齡22-49歲，平均體重指數22.1±3.9，病程1-19天。對照組為我院體檢健康者32例，兩組之間一般資料均無顯著差異(P均>0.05)。

本研究均經患者知情和同意，該試驗方案均經過我院倫理委員會批準。

1.2疾病活動性和生存質量的評估

使用強直性脊柱炎疾病活動指數(Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index ，BASDAI)進行疾病活動性的評估，強直性脊柱炎功能指數(Bath Ankylosing Spondylitis Functional Index,BASFI)法進行患者運動功能的評估，使用強直性脊柱炎的生活質量問卷調查法(Ankylosing Spondylitis Quality of Life，ASQoL)進行患者生存質量的評估，具體方法參考相關文獻報道[3]。

1.3方法

兩組患者均于清晨空腹抽取肘靜脈血10 ml于肝素抗凝管中，3 000 r/min離心10 min，分離血清于-80℃冰箱中保存待檢。患者血清中S100A12蛋白的檢測采用western blot法測定三組對象血清中的S100A12蛋白的表達，取蛋白樣品35微克，電泳后轉膜，5%的脫脂奶粉封閉1 h，GAPDH和S100A12抗體用5%牛奶稀釋(1∶200)，4℃過夜，TBST洗膜，5%的牛奶稀釋的辣根過氧化物酶標記的兔抗羊二抗，洗膜后，按照ECL說明書，1∶1配置發光工作液，凝膠成像儀成像，Image J軟件進行灰度分析。血清中ESR和CRP表達量檢測采用免疫比濁法測定C反應蛋白(CRP)與魏氏法測定血沉(ESR)。

1.4統計學方法

2結果

2.1血清中S100A12的蛋白水平變化

與正常對照組相比(圖1和表1)，強直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表達水平明顯升高，兩組相比有顯著統計學差異(P>0.05)。

圖1　western blot檢測S100A12的蛋白表達水平

正常(32例)強直性脊柱炎患者(32例)P值S100A12(S100A12/GAPDH)0.55±0.290.82±0.41*0.003ESR(mm/h)10.91±6.0222.52±12.35*<0.001CRP(mg/dl)0.45±0.212.12±0.32*<0.001

*與正常組相比P<0.05;

2.3血清中S100A12、ESR和CRP的表達及與臨床病理參數之間的關系

與正常對照組相比(表2)，強直性脊柱炎患者血清中的CRP和ESR水平明顯增加(P<0.05);S100A12的表達水平與CRP和ESR的水平無明顯相關性(P>0.05)，與BASDAI、BASFI和ASQoL無顯著相關性(P>0.05)。

表3　臨床實驗室檢查和病理參數之間的相關性分析

*P<0.05

3討論

S100A12是一種具有手型EF結構的鈣結合蛋白，主要由中性粒細胞合成和分泌，最早是在牛肺組織液中被發現，S100A12由92個氨基酸組成，其相對分子量大小為10.575 KD，以二聚體及六聚體形式存在[4]。研究表明S100A12是晚期糖基化終末產物受體RAGE最穩定的典型配體，S100A12與RAGE結合后激活MAPK和NF-κB信號通路，導致大量炎性因子TNF-α，IL-1β和IL-6的產生[5]，強直性脊柱炎患者的骶髂關節及周圍關節滑膜在局部產生的大量細胞因子，通過直接或間接途徑促進破骨細胞的分化和成熟，增強破骨細胞的功能，參與了骨質破壞，它們都是延緩或阻斷強直性脊柱炎骨質侵蝕作用的治療靶點[6]，此外，研究發現，TNF-α、IL-1β和IL-6在強直性脊柱炎患者血清中的表達水平明顯增加，目前臨床上針對TNF-α等炎性因子的靶樣抑制已成為治療強直性脊柱炎新興的治療手段[7]，提示阻斷炎癥因子的產生對于強直性脊柱炎的治療具有重要意義。

最近研究表明S100A12不僅在川崎病[9]、在類風濕性關節炎[10]等自身性免疫疾病中表達增加，還在糖尿病血管并發癥、炎癥性腸病以及哮喘等一系列免疫相關性疾病患者病變部位也存在異常表達。研究還發現S100A12的異常表達不僅局限于病變部位，在腫瘤性疾病、神經變性性疾病和代謝障礙等疾病患者的血清中的也存在異常表達，這為通過血清學檢查來判斷患者的病情變化提供了重大便利。綜合以上文獻報道，我們在本研究中通過檢測強直性脊柱炎患者血清中S100A12的表達，并與患者疾病活動程度和生活質量做一個相關性的分析，本研究結果發現，與正常對照組相比，強直性脊柱炎患者的ESR和CRP水平顯著增加，S100A12在強直性脊柱炎患者的血清中表達也明顯升高，但是其表達量與患者疾病的活動程度和生活質量無相關性，由于本組研究中病例量較少，因此結果可能與實際情況存在一定誤差，尚不足以證實其與臨床病理特征的真實關系，今后需要進一步行大樣本、多中心的研究來進一步探討S100A12異常表達的臨床意義。

綜上所述，S100A12在強直性脊柱炎患者的血清中存在異常表達，可能在強直性脊柱炎疾病的發生發展中發揮重要的作用，未來需要進一步行體內和體外實驗研究S100A12作為強直性脊柱炎治療靶點的可能性。

參考文獻：

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[5]Goyette J,Geczy CL.Inflammation-associated S100 proteins:new mechanisms that regulate function[J].Amino Acids,2011,41(4):821.

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[9]Foell D,Ichida F,Vogl T,et al.S100A12 (EN-RAGE) in monitoring Kawasaki disease[J].Lancet,2003,361(9365):1270.

[10]Baillet A,Trocme C,Berthier S,et al.Synovial fluid proteomic fingerprint:S100A8,S100A9 and S100A12 proteins discriminate rheumatoid arthritis from other inflammatory joint diseases[J].Rheumatology (Oxford),2010,49(4):671.

收稿日期：(2014-03-22)

作者簡介：劉歡(1978-)，女，江蘇人，碩士，主治醫師，研究方向：風濕病學；楊曉凌(1969-)，女，上海人，本科，副主任醫師， 研究方向：風濕病學。

文章編號：1007-4287(2015)03-0466-02

通訊作者*