測定復(fù)方苦參乳膏中蛇床子素的含量*

俞建芬，顧建明，張新民

江蘇省吳江市中醫(yī)醫(yī)院，吳江 215221

復(fù)方苦參乳膏是本院藥劑科會同皮膚科研制的中藥外用型乳膏制劑，主要用于治療濕疹、瘙癢、過敏性皮炎。其處方由苦參、蛇床子、白鮮皮、黃柏、土荊皮、地膚子、紫草等中藥材組成。蛇床子素作為該方中君藥之一的蛇床子的主要成分，其含量將直接影響該藥的療效。目前蛇床子素的含量測定方法有薄層掃描法[1]、分光光度法[2]、氣相色譜法[3]和高效液相色譜法[4-5]等。本課題組采用高效液相色譜法對復(fù)方苦參乳膏中蛇床子素的含量進行測定，以便對該制劑的質(zhì)量進行控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國Waters 2695-UV2489液相色譜儀；Mettler Toledo XS105電子分析天平；Q/BKYY32-2000電熱恒溫水浴鍋；HU-6150F超聲波清洗器。

1.2 試藥

復(fù)方苦參乳膏（吳江市中醫(yī)醫(yī)院吳江市第二人民醫(yī)院，規(guī)格:20g/盒，每克乳膏含生藥0.06g，批號:20101008、20110117、20110120、20110125、20110410、20110421、20110427）；蛇床子素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號:110822-200407）。乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Turner C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相:乙腈-水（65∶35）；流速:1.0 mL·min-1；柱溫:30℃；檢測波長:322 nm；進樣量:10μL。理論塔板數(shù)按蛇床子素峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取蛇床子素對照品4.9 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，濃度為 49μg·mL-1。

2.2.2 供試品溶液 取復(fù)方苦參乳膏1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，60℃水浴回流30 min使樣品溶化，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，冰箱（0～4℃）放置過夜，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性供試品溶液 按照復(fù)方苦參乳膏的處方和制法，制備不含有蛇床子的乳膏作為陰性樣品；取陰性樣品約1 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備，即得陰性供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 干擾試驗 精密吸取蛇床子素對照品溶液（1.96μg·mL-1）、供試品溶液及陰性供試品溶液各10μL，按照“2.1”色譜條件進樣測定。結(jié)果表明，陰性供試品色譜中在與蛇床子素對照品保留時間相應(yīng)的位置無色譜峰，說明處方中其他藥味對測定無干擾。見圖1。

圖1 對照品（A）、樣品（B）及陰性供試品（C）色譜圖

2.3.2 線性范圍的考察 分別精密量取上述蛇床子素儲備液 1 mL 置 10、25、50、100 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為4.9、1.96、0.98、0.49μg·mL-1的對照品溶液；精密量取上述對照品溶液系列及對照品儲備液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=3.028×104X-5.699，r=0.9999。結(jié)果表明，蛇床子素在 0.49～49μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗 在上述色譜條件下，精密吸取上述蛇床子素對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，測得蛇床子素峰面積平均值為61891，RSD為0.61%。表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一樣品溶液10μL，分別在 0、1、2、4、6、8 h 進樣，結(jié)果表明，樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，蛇床子素的峰面積平均值為85682，RSD為0.86%。

2.3.5 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液。按上述色譜條件測定，計算。結(jié)果平均含量為 48.49μg·g-1，RSD 為1.68%。表明此法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取已測知含量（48.49μg·g-1）的樣品約 0.5g，共 6 份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入蛇床子素對照品溶液（0.98μg·mL-1）25 mL，照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，外標(biāo)法計算。測得平均回收率（n=6）為96.33%，RSD為2.80%。

2.3.7 樣品含量測定 取7批復(fù)方苦參乳膏樣品，按擬定方法測定所含蛇床子素的含量，每批樣品取2份，每份溶液進樣2次，并計算平均含量。結(jié)果，7批樣品中蛇床子素的平均含量分別為79.13、48.49、61.78、65.22、50.96、43.97、43.21μg·g-1。

3 討 論

3.1 提取溶劑的選擇

本實驗比較了甲醇提取與無水乙醇提取該制劑中的蛇床子素，結(jié)果顯示，以無水乙醇作溶劑，提取不完全，去除基質(zhì)效果不佳；用甲醇提取，提取完全，去除基質(zhì)效果較好。

3.2 供試品溶液制備方法的確定

由于本品為O/W型乳膏劑，含白凡士林、脂肪酸甘油酯、羊毛脂、液體石蠟等基質(zhì)，約占樣品總量的2/3，嚴(yán)重影響高效液相色譜含量測定。為了更好地除去基質(zhì)，保證蛇床子素提取完全，采用超聲前60℃水浴回流30 min，使樣品溶化，超聲后冷藏（0～4℃）放置過夜，經(jīng)試驗考察，該提取方法能去除大量基質(zhì)，從而不影響蛇床子素的含量測定。

3.3 提取時間與方法的選擇

對甲醇超聲提取時間（30、45、60min）進行了考察，顯示甲醇提取的三個時間結(jié)果無明顯區(qū)別；另外，通過甲醇超聲處理0.5 h與加熱回流0.5 h進行比較，提取結(jié)果相近，因此采用前者進行乳膏蛇床子素的提取。

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