GC-MS法測定荊芥揮發(fā)油中薄荷酮、胡薄荷酮含量

孫文君，于 生，單鳴秋，丁安偉

南京中醫(yī)藥大學(xué)、江蘇省方劑研究重點實驗室，南京 210046

荊芥（Schizoneetae Herba.）為唇形科一年生草本植物荊芥（Schizoneeta tenuifolia Briq.）的干燥地上部分。荊芥性溫、味辛,亦有人認為其性平或涼，其生品具有祛風(fēng)解表、宣毒透疹、散瘀止血之功效，主治風(fēng)寒感冒、咽喉腫痛及多種皮膚病。荊芥的揮發(fā)油含量較高，其中主要有效成分為薄荷酮、胡薄荷酮等萜類化合物。目前對于荊芥揮發(fā)油的質(zhì)量控制報道較多的是采用GC-MS法分析其成分及做指紋圖譜研究[1-2]。為更全面地控制荊芥飲片的質(zhì)量，本文建立了GC-MS法同時測定荊芥揮發(fā)油中薄荷酮、胡薄荷酮的含量。結(jié)果表明，該法具有操作方便、準確等特點，可作為荊芥揮發(fā)油的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N-5975B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、Agilent ChemStation化學(xué)工作站軟件；B211D電子天平（d=0.01 mg，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

薄荷酮[（-）-Menthone]對照品（批號 111705-201004）、 胡薄荷酮 （R-（+）ulgone） 對照品 （批號111706-201004）均購于中國藥品生物制品檢定所（批號111706-201004）；甲醇為色譜純。

荊芥揮發(fā)油取自安徽（11批，編號 1～11）、河北（4 批，編號 12～15）、湖北（2 批，編號 16、17）、江蘇（2 批，編號 18、19）、山西（1 批，編號 20），共 20 批荊芥飲片，經(jīng)本校中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定確認。水蒸汽法提取，并經(jīng)除水后得荊芥揮發(fā)油。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油供試品溶液的制備

取收集的揮發(fā)油100 mg，精密稱定，置量瓶中，甲醇稀釋到刻度；再取適量與濃度為2.6141 mg·mL-1的萘溶液（內(nèi)標物）一起加入10 mL量瓶中，甲醇定容到刻度，為加入內(nèi)標的供試品溶液。

2.2 色譜條件

毛細管氣相色譜柱H-5MS（5%Henyl Methyl Siloxane，30.0 m×250.0 μm×0.25 μm）； 載氣為氦氣，流速:1.0 mL·min-1； 分流比:20∶1； 進樣口溫度:220℃；進樣量:1μL。

程序升溫方法:初始溫度50℃，以10℃·min-1速率升至 100℃，保持 10 min；再以 5℃·min-1速率升至200℃，保持5 min。

2.3 質(zhì)譜條件

電離方式:EI離子源，電子能量70eV；離子源溫度:230℃，四級桿溫度:150℃，接口溫度:280℃；電子倍增器電壓:1378.2V。溶劑延遲:3.5 min。取各供試溶液，過0.22 μm濾膜，以氣相色譜微量進樣器精密吸取1μL注射入氣相色譜儀，用ChemStation軟件進行峰識別，內(nèi)標法計算峰面積。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取 （-）-薄荷酮對照品 2.068 mg，（+）-胡薄荷酮對照品14.88 mg,置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度制成含薄荷酮0.2068 mg·mL-1與胡薄荷酮1.488 mg·mL-1的混合標準品儲備液。從該儲備液中各精密量取 5、2.5、1、0.5、0.25 mL，置量瓶中，加內(nèi)標物溶液，再加甲醇溶解并稀釋至刻度，分別制成含內(nèi)標物萘 0.26141 mg·mL-1，薄荷酮0.1034、0.0517、0.02068、0.01034、0.00517 mg·mL-1和胡薄荷酮 0.744、0.372、0.1488、0.0744、0.0372 mg·mL-1的系列混合對照品溶液。分別吸取上述5份溶液各1μL，注入氣相色譜儀，按內(nèi)標法以峰面積計算，以薄荷酮、胡薄荷酮與內(nèi)標峰面積比值為縱坐標（Y），對照品濃度（mg·mL-1）為橫坐標（X），繪制標準曲線，薄荷酮回歸方程:Y=13.82X-0.0043（r=0.9999）；胡薄荷酮回歸方程:Y=8.871X-0.0136（r=0.9991）。表明薄荷酮在 0.00517～0.1034 mg·mL-1之間呈良好的線性關(guān)系；胡薄荷酮在0.0372～0.744 mg·mL-1之間呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

以薄荷酮濃度為0.0517mg·mL-1、胡薄荷酮濃度為0.372mg·mL-1的混合對照品溶液為考察對象，依法測定，連續(xù)進樣6針，薄荷酮與胡薄荷酮峰面積比的RSD（%）分別為4.6與3.68，表明本法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取編號為 12 的供試品，依法處理。 在 0、2、4、6、8、12h依法測定。結(jié)果表明供試品溶液中薄荷酮與胡薄荷酮的含量在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好，薄荷酮與胡薄荷酮峰面積比的RSD（%）分別為2.75和2.15。

2.7 重復(fù)性試驗

取編號為12的供試品，依法處理樣品6份，測定。結(jié)果供試品溶液中薄荷酮的平均含量為91.362 mg·g-1，RSD為3.23%；胡薄荷酮的平均含量為112.471mg·g-1，RSD為4.18%。表明重復(fù)性比較好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取薄荷酮、胡薄荷酮對照品適量，置于量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。取編號12的供試品6份，每份各約50mg，精密稱定，加入上述混合對照品適量，依法測定。薄荷酮回收率為98.0%，RSD為1.696%；胡薄荷酮回收率為99.4%，RSD為2.469%。

2.9 測定結(jié)果

精密量取對照品溶液和供試品溶液各1μL注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，依法測定，按內(nèi)標法以相對峰面積計算薄荷酮及胡薄荷酮的含量。結(jié)果見表1。

表1 含量測定結(jié)果（mg·g-1，n=2）

由表1可知，不同產(chǎn)地荊芥揮發(fā)油中薄荷酮和胡薄荷酮的含量有所差別，同一產(chǎn)地不同生產(chǎn)企業(yè)的荊芥揮發(fā)油中含量也有差別。以安徽產(chǎn)荊芥揮發(fā)油中薄荷酮、胡薄荷酮的含量較其他產(chǎn)地的高，且薄荷酮、胡薄荷酮的含量比值大體相同，質(zhì)量較穩(wěn)定。河北產(chǎn)的次之，而山西的含量最低。由此可見市場上所售的荊芥飲片質(zhì)量不統(tǒng)一，因此有必要為荊芥飲片制定一個通用的飲片分級標準，分別對道地產(chǎn)區(qū)荊芥飲片和非道地產(chǎn)區(qū)荊芥飲片的規(guī)格進行劃分。本文采用的GC-MS法較GC法靈敏度更高，測定結(jié)果更精確，同時也可以對荊芥揮發(fā)油中的成分進行分析，可作為荊芥飲片質(zhì)量的控制方法之一。

[1]陳 勇，李曉如，曾 笑，等.荊芥揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J]. 世界科技研究與發(fā)展，2007，29（4）:43-6.

[2]方明月，康文藝，姬志強，等.荊芥揮發(fā)油化學(xué)成分研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2007，18（7）:1551-5.