VEGF-C與p27在子宮內膜癌中的表達及其相關性研究

陳燦 梁艷芳

（廣東省東莞市第五人民醫院病理科 東莞 523905）

VEGF-C與p27在子宮內膜癌中的表達及其相關性研究

陳燦 梁艷芳

（廣東省東莞市第五人民醫院病理科 東莞 523905）

目的：探討VEGF-C和p27在子宮內膜癌和增生性子宮內膜中的表達及其相關性，并分析其臨床意義。方法：采用免疫組織化學檢測51例子宮內膜癌和45例增生性子宮內膜組織中VEGF-C和p27的表達，并結合臨床病理特征進行相關性分析。結果：子宮內膜癌中VEGF-C陽性表達率明顯高于增生性宮內膜及正常子宮內膜組織（χ2=4.571，χ2=0.235，P＜0.01），差異有統計學意義；子宮內膜癌中p27陽性表達率明顯低于增生性子宮內膜及正常子宮內膜組織（χ2=10.227，χ2=2.113，P＜0.05），差異有統計學意義。在對子宮內膜癌組織的分析中，VEGF-C的陽性表達率與子宮內膜癌的病理分級呈正相關，與腫瘤分化、肌層浸潤程度和臨床分期有關（P＜0.05）；p27表達與腫瘤分化及臨床分期有關（P＜0.05），與肌層浸潤深度無關（P＞0.05）。VEGF-C表達率與p27表達率呈明顯負相關。結論：VEGF-C與p27基因在子宮內膜不同組織中存在差異表達，并且兩者具有相關性，提示兩者在子宮內膜癌發生、發展及侵襲浸潤中起重要作用，有可能成為判斷預后的重要指標之一，具有一定的臨床參考意義。

子宮內膜癌；增生性子宮內膜；VEGF-C；p27；免疫組化

越來越多的研究認為，腫瘤的發生與細胞調控機制紊亂有關，是一個長時間、多因素、多步驟和多基因改變的漫長過程。血管內皮生長因子C（VEGF-C）是血管內皮生長因子（VEGF）的一種新同源物，可刺激受體FLt4（即VEGFR-3）酪氨酸磷酸化[1]。VEGF-C可通過刺激血管內皮細胞增生、移動和增加血管通透性在腫瘤發生、發展、浸潤和轉移中發揮重要作用。p27是細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白（CDKI）家族的一個重要成員。可非特異性抑制多種Cyclin-CDK復合物的活性，促進細胞分化、介導細胞間黏附和誘導細胞凋亡等功能。新近研究表明，該兩種基因的異常表達與多種腫瘤癌變關系密切。本研究采用免疫組化方法檢測子宮內膜癌及增生性子宮內膜組織中兩者的表達情況，試探討其在子宮內膜癌發生、發展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇東莞市第五人民醫院2000～2011年手術切除的子宮內膜癌標本51例，子宮內膜增生45例及正常子宮內膜組織22例。所有子宮內膜癌組織均經病理學診斷，按FIGO進行手術-病理分期：Ⅰ期30例，Ⅱ～Ⅳ期21例；組織學分級：G1級22例，G2～G3級29例；無肌層浸潤26例，有肌層浸潤25例。患者年齡34～64歲，平均年齡53.40歲。以上標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續切片。

1.2 實驗試劑 VEGF-C和p27鼠抗人單克隆抗體、免疫組化試劑盒和DAB均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。染色步驟按試劑盒要求進行。用PBS液代替一抗作陰性對照，已知結腸癌和乳腺癌陽性切片作為陽性對照。

1.3 結果判定 VEGF-C陽性染色為位于細胞漿或細胞核的棕黃色顆粒[2]，p27陽性染色為細胞核中出現棕黃色顆粒[3]。采用雙盲法隨機選取10個高倍視野（×400），每個高倍視野計數100個腫瘤細胞。觀察陽性細胞所占的百分數及染色強度。對所占的百分數計分，陽性細胞：＜5%=0分，5%～25%=1分，26%～50%=2分，51%～75%=3分，＞75%=4分；染色強度：無色=0分，淡黃色=1分，棕黃色=2分，深棕色=3分。累積評分，累積：0分為（－），1～2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++）。

1.4 統計學處理 數據處理采用SPSS15.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF-C和p27在子宮內膜癌中的表達VEGF-C在子宮內膜癌中的表達率為70.6%，明顯高于正常子宮內膜組的9.1%（χ2=4.571，P＜0.01）和子宮內膜增生組的28.9%（χ2=0.235，P＜0.01），差異有統計學意義；p27在子宮內膜癌中的表達率為37.2%，明顯低于正常子宮內膜組的86.4%（χ2=10.227，P＜0.01）和子宮內膜增生組的57.8%（χ2=2.113，P＜0.05），差異有統計學意義。見表1。

表1 增生性子宮內膜和子宮內膜癌中VEGF-C和p27的表達

2.2 VEGF-C和p27在子宮內膜癌患者不同病理分化、臨床分期和肌層浸潤中的表達 子宮內膜癌組織中，VEGF-C的陽性表達率與子宮內膜癌的病理分級呈正相關，隨著子宮內膜癌病理分級增加而顯著增加，χ2＝4.79，P＜0.05；隨臨床分期的進展表達增強，χ2＝3.93，P＜0.05，差異有統計學意義。VEGF-C陽性表達與子宮內膜癌肌層浸潤深度有關，χ2＝7.18，P＜0.01；p27的陽性表達率與子宮內膜癌的病理分級呈負相關，隨著內膜癌病理分級的增加而顯著降低，χ2＝4.95，P＜0.05，隨臨床分期的進展表達減低，χ2＝8.04，P＜0.01，差異有統計學意義。p27蛋白陽性過表達率與內膜癌肌層浸潤深度無關，χ2＝0.16，P＞0.05。見表2。

表2 VEGF-C和p27在子宮內膜癌患者不同病理分化，臨床分期和肌層浸潤中的表達

2.3 VEGF-C和p27表達相關性分析 子宮內膜癌組織中，36例VEGF-C染色陽性組織中p27染色陽性率為16.7%（6/36），15例VEGF-C染色陰性中p27染色陽性率為73.3%（11/15）。VEGF-C與p27呈負相關，P＜0.05。

3 討論

子宮內膜癌（Endometrial carcinoma）是婦科腫瘤中的常見病、多發病，近年來全球發病率有升高的趨勢。由于子宮內膜癌缺乏特異的臨床表現，漏診率較高，且子宮內膜癌的預后與腫瘤生物學惡性程度的多種因素相關，因此，如何早期診斷以及正確判斷預后成為目前子宮內膜癌臨床研究的熱點之一。近年來研究發現，細胞周期失控是癌變的重要原因，細胞正常的生長和發育平衡被打破后，細胞就會發生增值失控而導致癌變。p27作為一個重要的候選抑癌基因，是細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白家族的重要成員，能阻止細胞通過G/S轉換關卡而抑制細胞增殖。p27表達降低后，使其對細胞周期調控、誘導細胞凋亡和促細胞間粘附作用等能力降低，導致腫瘤細胞跨過G/S檢查點從而誘導細胞惡性增殖。p27低表達被認為與腫瘤不良預后及高侵襲性密切相關[4]。Bamberger等[5]發現p27可調控正常子宮內膜增生，其低或缺失表達可能是子宮內膜癌發生的重要步驟。本研究結果表明，p27表達水平隨著子宮內膜癌惡性程度的增加而下降，并與病理分化和臨床分期相關。

VEGF是目前發現的最重要的促血管形成因子，可通過與內皮細胞表面VEGF受體結合，刺激內皮細胞增殖、增加微血管通透性和促進血漿纖維蛋白外滲，為血管形成提供一個纖維網絡。多數研究證實，VEGF表達與腫瘤微血管密度有明顯相關性[6]。VEGF-C又稱為VEGF相關蛋白（VRP），于1996年在前列腺癌細胞中發現，具有與VEGF-D相似的氨基末端和羧基末端，其前體蛋白包括1個N端信號肽、1個VEGF同源區和1個C端前肽，C端前肽包括4個重復的富含半胱氨酸的結構。大多數分泌的VEGF-C通過蛋白分解作用形成前肽，VEGF-C在胚胎及成熟組織中都有表達，在腫瘤細胞中高表達。本研究也表明，VEGF-C表達水平隨著腫瘤惡性程度的增加而增加，并與病理分化和臨床分期相關。早年國內也有相關研究報道了腫瘤中VEGF與p27表達與腫瘤發生發展的關系，認為原發性肝癌組織中VEGF表達隨著病理分級、臨床分期的增高而增高，p27表達隨著病理分級和臨床分期的增高而減低，且兩者呈負相關[7]。本研究顯示，p27表達水平隨著子宮內膜癌惡性程度的增加而下降，VEGF-C表達水平隨著腫瘤惡性程度的增加而增加，且兩者呈負相關。VEGF-C和p27的聯合檢測可能在子宮內膜過增生癌變的診斷和鑒別中具有重要的臨床參考意義。

aipainen A,et al.A n

[1]Joukov V,Pajusola K,Kovel vascular endothelial growth factor,VEGF-C,is a ligand for the Flt4(VEGFR-3)and KDR (VEGFR-2)receptor tyrosine kinases[J].EMBO J,1996,15(7):1751

[2]Mineo TC,Ambrogi V,Baldi A,et al.Prognostic impact of VEGF, CD31,CD34,and CD105 expression and tumour vessel invasion after radical surgery for IB-IIA non-small cell lung cancer[J].J Clin Pathol,2004,57(6):591-597

[3]Loda M,Cukor B,Tam SW,et al.Increased proteasome-dependent degradation ofthe cyclin-dependentkinase inhibitorp27 in aggressive colorectal carcinomas[J].Nat Med,1997,3(2):231-234

[4]Nycum LR,Smith LM,Farley JH,et al.The role of p27 in endometrial carcinoma[J].Gynecol Oncol,2001,81(2):242-246

[5]Bamberger AM,Riethdorf L,Milde-Langosch K,et al.Strongly reduced expression of the cell cycle inhibitor p27 in endometrial neoplasia[J]. Virchows Arch,1999,434(5):423-428

[6]Shimanuki Y,Takahashi K,Cui R,et al.Role of serum vascular endothelial growth factor in the prediction of angiogenesis and prognosis for non-small cell lung cancer[J].Lung,2005,183(1):29-42

[7]馬立新,喬海泉,代文杰.p27～(kip1)、VEGF在原發性肝細胞癌中的表達及臨床意義[J].哈爾濱醫科大學學報,2004,38(4):359-361

Expression and Correlation of VEGF-C and p27 in Endometrial Carcinoma

CHEN Can,LIANG Yan-fang
(1The Fifth People’s Hospital of Dongguan,Guangdong523905)

Objective:To study the expression and correlation of VEGF-C and p27 in proliferative endometrium and endometrial carcinoma.Methods:The expression of VEGF-C and p27 were detected by immunohistochemistry in 51 cases of endometrial carcinoma and 45 cases of endometrial hyperplasia tissues.The correlation was analyzed in the context of clinical pathological characteristics. Results:The positive expression of VEGF-C was significantly higher than that of proliferative endometrium and normal endometrium rate of endometrial carcinoma(χ2=4.571,χ2=0.235,P＜0.01),the difference being statistically significant;the positive expression of p27 was lower than that of hyperplastic endometrial carcinoma and normal endometrial tissue rate of endometrial carcinoma(χ2=10.227,χ2=2.113,P＜0.05),the difference also being statistically significant.According to the analysis of endometrial cancer tissue,pathological grading and VEGF-C positive expression rate were positively related with endometrial carcinoma,tumor differentiation,the degree of myometrial invasion and clinical stage(P＜0.05);the expression of p27 was associated with tumor differentiation and clinical stage(P＜0.05),and was independent of the depth of myometrial invasion(P＞0.05).The expression rate of VEGF-C and p27 expression rate witnessed significantly negative correlation.Conclusion:VEGF-C and p27 gene expression in different tissue differs in endometrium and there is a correlation between them.This suggests that the two factors in endometrial cancer occurrence and development and that they play an important role in the invasion and therefore have the potential to become one of the important indicators of prognosis as they have certain clinical significance.

Endometrial carcinoma;Proliferative endometrium;VEGF-C;p27;Immunohistochemistry

R737.33

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2015.01.001

2014-08-15）

●臨床研究●