金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測研究

薛士鵬

金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測研究

薛士鵬

目的 探討金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測的臨床應用價值。方法 本次研究的對象是小白鼠, 將本院自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素作為免疫抗體, 研究這種抗體在產生過程中的作用, 采用金黃色葡萄球菌B型腸毒素間接競爭酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢驗方式對其進行檢驗,總結出金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測在細菌霉素中檢測的理論依據。結果 本院自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素純度較高, 能夠與金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度呈現出線性關系。在本次研究過程中, 小白鼠最高效價為1：10000。從本次試驗中發現, 當金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度在2～1000 ng/ml范圍中時競爭性抑制率與金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度10～450 ng/ml時樣品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度會隨之增加。結論 采用金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測這種方式應用于檢測中具有極強的價值, 靈敏度較高, 能夠檢測出樣品中金黃色葡萄球菌B型腸毒素的殘留情況。

金黃色葡萄球菌B型腸毒素；酶聯免疫檢測；臨床應用價值；研究

改革開放以來, 我國國民經濟進入了快速增長的階段,隨著人們生活水平的提高, 日常生活的飲食結構和消費觀念產生了巨大的變化, 動物源性食品的比重在人們生活中所占有的比重越來越多。金黃色葡萄球菌B型腸毒素是重要的食源性和醫源性雙重致病菌, 經常存在于多種物質中, 這種病菌對營養物質水平的要求不高, 耐鹽性較強, 大量聚集會產生食物中毒的情況發生。為了探討金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測的臨床應用價值, 本院特進行了一次研究,取得了較為良好的效果, 現將具體情況報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 本次研究中所使用的分光光度計主要由日本島津提供, 型號為UV-265FW；在實驗中ZFQ-85A型酶聯免疫檢測儀主要由華中電子管廠提供；研究中采用的離心機型號為TGL, 由北京醫用離心機廠提供。金黃色葡萄球菌B型腸毒素主要由信陽農業高等實驗室保存。牛血清白蛋白主要由華美公司提供。

1.2 檢測方法

1.2.1 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的制備 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的制備主要包括3個方面：①從瓊脂板上挑選出單菌落, 將其接種到10 ml的培養液中, 需要保持培養環境的溫度為37℃, 培養的時間為12 h, 得到種子液, 將1 ml含量的種子液接種到200 ml的培養基中進行培養, 培養的溫度、時間與上述時間相同；②將培養好的金黃色葡萄球菌B型腸毒素菌液進行離心處理, 離心的速度為10000 r/min, 離心后取其上清液, 用濾膜過濾后放置在300 ml的濾杯之中 ,用截留孔徑為10 k的超模在氮氣壓力下對其進行濃縮處理,濃縮成其原體積的1/10。需要注意的是, 氮氣壓力設置在0.2 MPa。液體濃縮好之后將其放置在冰浴之中, 根據體積的具體情況分次進行磁力攪拌并加入固體達到飽和度為60%的狀態, 再冰浴4 h之后進行15 min的離心處理, 取上清液繼續放置在冰浴中加入(NH4)2SO4, 將飽和度情況提高到85%,放置在4℃的環境中即可。過夜后需要對取得的液體進行蛋白沉淀, 離心, 除去上清后加入其體積1/10的水重新溶解,隨后進行為期為24 h的透析；③根據儀器中的色譜柱相關要求對毒素進行純化。

1.2.2 金黃色葡萄球菌B型腸毒素抗血清的制備 此種制備的方式主要包括2個方面：①在進行抗原注射前的1周對小白鼠進行皮內注射, 注射的藥物為卡介苗, 這樣能夠刺激動物的免疫系統, 然后再進行抗原注射, 抗原注射使用的量為0.1 ml/次；②抗原注射后的1個月之后對小白鼠進行斷尾, 采其血樣, 將其放置在室溫中進行凝血處理, 在4℃的環境下進行過夜, 采用轉速為3000 r/min的速度進行離心處理,離心的時間為5 min。

1.2.3 ELISA進行檢測 按照ELISA的相關檢測標準進行操作即可。

2 結果

小白鼠最高效價為1：10000, 當金黃色葡萄球菌B型腸毒素的濃度在2～1000 ng/ml之中時競爭性抑制率與金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度10～450 ng/ml時樣品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素濃度會隨之增加。

3 討論

金黃色葡萄球菌B型腸毒素英譯為Staphylococcal Enterotoxin B, 簡稱為SEB。金黃色葡萄球菌B型腸毒素經常會蘊藏在蛋白質、水分含量充足并且同時含有一定含量的淀粉之類的食物之中［1］。在日常生活中, 牛奶、大多數乳制品均符合金黃色葡萄球菌B型腸毒素生長的條件, 在牛奶中含有的金黃色葡萄球菌B型腸毒素具有極強的耐熱性, 耐受度可高達100℃300 min［2］, 也就是說在原料乳經過熱處理后雖然金黃色葡萄球菌能夠被殺死, 但是金黃色葡萄球菌B型腸毒素還能夠導致機體致病的情況發生, 因此, 對乳制品中的金黃色葡萄球菌B型腸毒素進行檢測對人類的身體健康具有極其重要的意義［3］。金黃色葡萄球菌B型腸毒素在檢測中傳統的方式是采用動物學試驗的方式進行的, 但是這種檢驗方式動物來源較為困難, 并且靈敏度情況較低, 在檢驗的過程中經常會出現檢測結果不滿意的情況［4］。本次研究中, 作者根據具體的情況用自制的金黃色葡萄球菌B型腸毒素進行研究,將小白鼠作為免疫實驗的對象, 取得了較為良好的效果, 檢測的靈敏度情況明顯提高。

綜上所述, 金黃色葡萄球菌B型腸毒素的酶聯免疫檢測這種檢測方式具有極強的臨床應用價值, 值得在實際中應用。

［1］ 楊靜.食源性金黃色葡萄球菌腸毒素基因在液體培養基和牛肉制品中的表達研究.南京農業大學, 2013.

［2］ 章建輝.免疫磁珠快速檢測金黃色葡萄球菌方法的研究.湖南師范大學, 2013.

［3］ 李樂.致病微生物新型檢測方法及預防體系應用研究.中南大學, 2014.

［4］ 王立新.臨床血流感染患者金黃色葡萄球菌耐藥機制及分子流行病學研究.天津醫科大學, 2013.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.192

2015-01-30］

473061 南陽醫學高等專科學校