慢性肝病患者血中TPO、PAIgG檢測的意義

張曉明

慢性肝病患者血中TPO、PAIgG檢測的意義

張曉明

目的探討在慢性乙型肝炎(乙肝)、乙肝肝硬化血小板減少發病機制中血小板生成素(TPO)、血小板相關免疫球蛋白G(PAIgG)的作用。方法 115例慢性乙肝(CHB組, 52例)、乙肝肝硬化(LC組, 63例)伴血小板減少患者及57例健康獻血者(CTL組)采取靜脈血酶聯接免疫吸附劑測定(ELISA)法檢測TPO、PAIgG水平。結果 慢性乙肝患者TPO輕度升高、PAIgG水平明顯升高；肝硬化患者PAIgG水平明顯升高, TPO水平明顯下降；患者與CTL組比較除慢性乙肝患者TPO外, 差異有統計學意義(P＜0.01)。結論 PAIgG參與了慢性乙肝、乙肝肝硬化伴血小板減少的發病；而肝硬化的血小板減少機制還與TPO生成減少有關。

慢性乙型肝炎；肝硬化；血小板生成素；血小板相關免疫球蛋白G

病毒性肝炎患者合并血小板減少十分常見, 在各型慢性肝炎和肝硬化中的發生率為37%～77%［1,2］。脾大及脾功能亢進是慢性肝病血小板減少的主要原因［3,4］。但慢性肝病患者血小板減少的程度與脾大、脾亢的程度并不總是平行的。本文通過檢測慢性肝病患者血中TPO、PAIgG水平, 就其發病機制做一些探討, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取115例慢性乙肝、乙肝肝硬化伴血小板減少患者, 經3次檢測外周血小板計數＜100×109/L為入選對象, 其中慢性乙肝伴血小板減少(CHB組)患者52例,乙肝肝硬化伴血小板減少(LC組)患者63例, 均為按全國第五次肝炎會議擬訂標準診斷的本院2013～2014年住院患者,健康對照57例均采自市中心血站義務獻血者(CTL組), 外周血小板計數正常。常規方法檢測患者的白蛋白(ALB)、凝血酶原活動度(PTA)等肝功能指標。三組一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 檢測方法 ELISA方法檢測血中TPO、PAIgG水平。

1.3 試劑與儀器 PAIgG采用太陽生物技術公司生產的ELISA試劑盒；TPO采用美國R&D systems INC公司生產ELISA試劑盒,嚴格按照試劑盒說明書操作。采用美國W.W4型酶標洗板機,奧地利-100型酶標儀檢測。

1.4 實驗步驟

1.4.1 樣品制備 清晨空腹采取靜脈血, EDTA抗凝, 常規方法分離血漿-20℃保存, 用于檢測TPO水平；PAIgG用血按太陽生物技術公司提供的血小板制備試劑盒說明書進行血小板分離與洗滌, 制備血小板懸液, 并用其提供的標本儲存液-20℃保存待測。

1.4.2 ELISA法血漿TPO檢測 參照試劑盒操作程序進行：即將上述血漿按一定稀釋度的標準品及樣品200 μl 加入酶標反應孔內, 置4℃, 孵育3 h。洗板3次后, 加入辣根過氧化物酶標記的鼠抗人TPO單克隆抗體, 置4℃孵育30 min。洗板3次, 加入底物反應體系, 顯色, 于全自動酶聯免疫檢測儀上直接讀數, 單位為pg/ml。

1.4.3 ELISA法血小板懸液PAIgG檢測 參照試劑盒操作程序進行：①包被：包被緩沖液將羊抗人IgG抗體稀釋成10 μg/ml, 加入40孔聚丙酰胺反應板內, 0.1 ml/孔, 置37℃3 h后4℃過夜, 次日洗滌3次甩干。 ②加標本：于包被反應板前兩排加入倍比稀釋的已知量統一參考血清, 0.1 ml/孔,后兩排加入血小板待測標本, 0.1 ml/孔, 置37℃溫箱90 min取出, 洗滌3次甩干。③加酶標：將酶標結合物稀釋成一定的濃度, 加入0.1 ml/孔, 置37℃溫箱60 min取出, 洗滌3次甩干 。④加基質：加新鮮配置的基質液0.1 ml/孔, 10 min后顯色, 再加入2 mol濃硫酸終止反應, 酶標光度上比色, 讀出OD值, 單位為ng/107(Plt)。

1.5 統計學方法 采用SAS統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數 ± 標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗；相關分析采用Pearson相關分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

CTL組P AIgG為(37.25±21.00)ng/107(Plt)； LC組PAIgG為(90.15±52.99)ng/107(Plt) , CHB組PAIgG為(92.71± 40.98)ng/107(Plt), CTL組明顯低于另兩組, 差異有統計學意義(P＜0.01)。CTL組血漿TPO為(82.30±21.84)pg/ml, LC組為(61.56± 17.45)pg/ml, 明顯低于CTL組, 差異有統計學意義(P＜0.01)；CHB組血漿TPO為(96.98±29.37)pg/ml, 與CTL組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。經相關分析, PAIgG與外周血血小板計數呈負相關(r=-0.497, P＜0.01)。

3 討論

病毒性肝炎血小板減少的機制較為復雜。近年研究發現慢性肝病患者血小板相關免疫球蛋白(PAIg)增高, 血小板計數與PAIgG之間呈負相關, 因此認為慢性肝病患者血小板減少可能與自身免疫紊亂有關。

PAIg包括PAIgG、PAIgA、PAIgM, 其中PAIgG占絕大多數。PAIgG可有兩種組分, 一種是真正的抗血小板抗體,或稱血小板特異性抗體；另一種為免疫復合物。真正的抗血小板抗體可被人血小板吸附, 并與血小板膜糖蛋白GP相結合, 其中IgG、IgA與GPⅡb/Ⅲa、Ⅰa/Ⅱa等結合, 而IgM與GPⅢa、GPⅠb相結合, 隨血流到脾臟、肝臟等單核巨噬細胞系統被吞噬和破壞, 從而導致血小板減少。有學者檢測了84例病毒性肝炎患者和20例健康對照者PAIgA、PAIgG、PAIgM水平, 結果發現：病毒性肝炎血小板減少癥組PAIgG水平顯著高于病毒性肝炎血小板正常組和健康對照組, 且與血小板計數呈負相關；PAIgA 、PAIgM較對照組也增高, 但與血小板計數的相關性較小。本研究表明：CHB和LC組患者PAIgG水平較CTL組均明顯升高(P＜0.01), 且與外周血血小板計數呈負相關(r=-0.497, P＜0.01), 說明免疫因素致血小板破壞為慢性乙肝血小板減少的原因之一。

總之, PAIgG參與了慢性乙肝、乙肝肝硬化伴血小板減少的發病；而肝硬化的血小板減少機制還與TPO生成減少有關。

［1］ 馬艷麗, 任萬華.病毒性肝炎血小板減少機制探討.胃腸病學和肝病學雜志, 2005, 14(3):315-317.

［2］ 田賢江 , 王文香 , 吳敦煌 , 等.拉米夫定治療慢性乙型肝炎患者血小板變化的觀察.胃腸病學和肝病學雜志, 2008, 17(3): 208-211.

［3］ 蔣孝華, 蔡亞平.病毒性肝炎患者血小板減少與脾臟腫大和血小板生成素的關系.南華大學學報(醫學版), 2005(3):361-363.

［4］ 羅炳棋 , 向賢宏 , 陳偉 .肝硬化脾亢致血小板減少的影響因素與治療選擇 .影像診斷與介入放射學, 2010, 19(6):373-376.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.016

2015-04-30］

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