黔產毛萼香茶菜二萜成分

陶 晨，李齊激，葉林虎，張建新，楊小生*

1貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室，貴陽 550002;2 黔南民族醫學高等專科學校，都勻 558003

毛萼香茶菜Isodon erioealyx (Dunn)Hara.為唇形科香茶菜屬為多年生草本植物，主要分布在我國西南的貴州、云南、四川及廣西等省，為民間常用草藥，具有清熱利痰、涼血散瘀的功效，主要用于治療感冒、風濕關節炎、癌癥、急性黃疸性肝炎、爛腳丫等［1，2］。植物化學研究發現其主要含有二萜、三萜、黃酮類成分，尤其富含貝殼杉烷二萜［3-6］。藥理研究顯示該植物提取物能顯著拮抗平滑肌收縮［7］，抗菌和抗炎作用［8］，毛萼乙素對人臍靜脈內皮細胞系的增殖、遷移、小管形成具有不同程度的抑制作用［9］，還發現其可以靶向AML1-ETO 原癌蛋白激活細胞凋亡途經治療白血病［10］。目前，已有毛萼香茶菜清熱利咽片上市銷售，效果較好。筆者在對該植物成分進行結構修飾研究過程中，從中分離、鑒定了10個二萜化合物:6-乙酰基-毛萼晶B(1)、毛萼晶O(2)、12-hydroxydehydro-abietic acid(3)、neorabdosin(4)、毛萼晶D(5)、毛萼晶E(6)、毛萼晶B(7)、毛萼晶N(8)、coetsoidin A(9)、毛萼晶L(10);其中化合物1 為新天然產物，3 為首次從該植物中分離。

1 儀器與材料

Varian INOVA-400 核磁共振儀測定(TMS 為內標);HP-5973 型質譜分析儀;API QSTAR Pulsar 質譜儀;Pol I 自動旋光儀;XT-4 顯微熔點儀(溫度未校正);Agilent 1100 型液相色譜儀;柱層析硅膠(200～300 目)和薄層層析硅膠板(GF254)均為青島海洋化工廠生產;柱層析RP-C18硅膠為Merck 公司生產;Sephadex LH-20 為Amersham Pharmacia Biotech AB公司生產;除高效液相色譜用溶劑為色譜純外，其余試劑均由工業純重蒸所得。

實驗藥材于2012年7 月采自貴州省貴陽市，經貴陽中醫學院陳德媛教授鑒定為毛萼香茶菜Isodon eriocalyx (Dunn)Haral 植物的嫩枝和葉，憑證標本保存于貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室。

2 提取與分離

經自然干燥的毛萼香茶菜嫩枝葉(20 kg)粉碎后，用75%乙醇加熱回流提取3 次(3 h/次)，減壓回收溶劑得浸膏1.5 kg。將浸膏加水完全溶解后，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3 次，合并、濃縮萃取液得石油醚萃取物0.3 kg，乙酸乙酯萃取物0.8 kg，正丁醇萃取物0.3 kg，水萃取物0.1 kg。乙酸乙酯萃取物經硅膠柱層析石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(20∶1→0∶1)得到5 個組分(Fr 1～Fr 5)。Fr 2(10∶1，87 g)經MCI 柱層析除掉色素后，再用硅膠柱層析石油醚-丙酮梯度洗脫(10∶1→0∶1)得到3 個組分(Fr 2-1、Fr 2-2、Fr 2-3);Fr 2-1(8∶1)經凝膠柱色譜洗脫(氯仿-甲醇1∶1)化合物3(27mg);Fr 2-2經氯仿-甲醇1∶1 重結晶得化合物2(63 mg)。Fr 3(7∶1，151 g)經MCI 柱層析除掉色素后，再用硅膠柱層析石油醚-丙酮梯度洗脫(10∶1→0∶1)得到7 個組分(Fr 3-1→Fr 3-7);Fr 3-2(8∶1)經硅膠柱層析石油醚-丙酮等度洗脫(10∶1)得化合物4(273 mg);Fr 3-5(6∶1)經硅膠柱層析石油醚-丙酮等度洗脫(8∶1)得化合物5(993mg)，化合物7(93 mg);Fr 3-5(5∶1)經硅膠柱層析石油醚-丙酮等度洗脫(7∶1)得化合物9(870 mg);Fr 4(5∶1，137g)經MCI 柱層析除掉色素后，再用硅膠柱層析石油醚-丙酮梯度洗脫(8∶1→0∶1)得到4 個組分(Fr 4-1→Fr 4-4);Fr 4-1(8∶1)經凝膠柱色譜洗脫(甲醇)得化合物1(226 mg);Fr 4-2(5∶1)經制備HPLC 甲醇-水(20-80)洗脫得化合物8(61 mg)、10(114 mg);Fr 4-3(3∶1)經凝膠柱色譜洗脫(甲醇)后丙酮重結晶得6(319 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 白色粉末(氯仿)，mp.183～184.5℃，［-186.9° (c=0.63，MeOH);根據EI-MS m/z 386［M］+，HR-ESI-MS m/z 409.1638 (calcd for C22H26O6Na，409.1627)和NMR 數據推算其該化合物分子式為C22H26O6，不飽和度為10。從1H NMR、13C NMR 和HMQC 譜(見表1)可知，該化合物含有3 個甲基［含1 個乙酰甲基δH2.11(3H，s)，δC24.6(-OAc)］、5 個亞甲基［含1 個環外雙鍵信號δH5.08(1H，s，H-17a)，4.84 (1H，s，H-17b)，δC157.2 (C-16)，109.4 (C-17);1 個含氧取代亞甲基信號δH4.32 (1H，d，J=9.6 Hz，H-20a)，3.98 (1H，d，J=9.6 Hz，H-20b)，δC65.5 (C-20)］、6 次甲基［含1 個環內雙鍵信號δH6.77 (1H，d，J=10.0 Hz，H-3)，5.90 (1H，d，J=10.0 Hz，H-2)，δC127.5 (C-2)，160.7 (C-3)，1 個含氧取代次甲基δH5.62 (1H，br s，H-6)，δC74.4 (C-6)］和8 季碳［含1 個含氧取代季碳信號δC96.8 (C-7)，2 個羰基信號δC198.2 (C-1)，213.6 (C-15)］。結合植物化學分類學知識和上述光譜信息可初步推測該化合物為香茶菜屬植物中較為典型的對映貝殼杉烷型二萜。

在HMBC 譜(見表1、圖1)中，低場質子信號δH5.08 (H-17a)，4.84 (H-17b)與羰基碳δC213.6(C-15)/35.2 (C-13)遠程相關，提示含有對映貝殼杉烷型二萜中典型的α，β-不飽和酮;δH6.77 (H-3)與δC198.2 (C-1)/ 30.0 (C-18)/21.9 (C-19)遠程相關，5.90 (H-2)與δC198.2 (C-1)遠程相關提示環內雙鍵位于A 環C-1、C-2 位;δH4.32 (H-20a)，3.98 (H-20b)與δC198.2 (C-1)/ 52.1 (C-5)/96.8 (C-7)遠程相關，δH5.62 (H-6)與δC52.1 (C-5)/ 96.8 (C-7)/ 171.8 (-OAc)遠程相關提示乙酰基位于C-6 位，C-20 位含氧基團與C-7 位形成氧環。經綜合分析1D NMR、2D NMR 光譜數據及其理化性質，并與文獻［11］報道毛萼晶B 6-OH 經乙酰化反應所得衍生物［7］進行比對，相關數據基本一致，但本文為首次從植物中分離得到，故鑒定化合物1為6-乙酰基-毛萼晶B(6-acetyl-Maoecrystal B)。

表1 化合物1 的1H NMR、13C NMR 和HMBC 數據(CD3OD)Table 1 1H NMR，13C NMR and HMBC data of compound 1(CD3OD)

圖1 化合物1 的結構和HMBC(→)遠程相關Fig.1 Chemical structure and key HMBC (→)correlation of compound 1

化合物2 無色針晶(氯仿-甲醇1∶1)，EI-MS m/z 406［M］+;1H NMR (C5D5N，400 MHz)δ:5.51(1H，d，J=12.8 Hz，H-20a)，5.38 (1H，d，J=12.8 Hz，H-20b)，5.13 (1H，dd，J=11.4，3.4 Hz，H-1)，2.16 (3H，s，-OAc)，1.07 (3H，s，H-19)，1.24 (3H，s，H-18)，0.90 (1H，s，J=3.2 Hz，H-16);13C NMR (C5D5N，100MHz)，δ:75.9 (C-1)，24.9 (C-2)，39.5 (C-3)，34.1 (C-4)，58.5 (C-5)，174.2(C-6)，170.7 (C-7)，59.1 (C-8)，45.5 (C-9)，43.0(C-10)，17.3 (C-11)，31.5 (C-12)，32.6 (C-13)，24.9 (C-14)，216.9 (C-15)，48.8 (C-16)，11.5 (C-17)，33.6 (C-18)，23.4 (C-19)，69.2 (C-20)，170.5，21.7 (-OAc)。以上數據與文獻［12］報道一致，故鑒定化合物2 為毛萼晶O(Maoecrystal O)。

化合物3 黃色粉末(氯仿)，EI-MS m/z:316(M+);1H NMR (CDCl3，400 MHz)，δ:6.83 (1H，s，H-14)，6.62 (1H，s，H-11)，1.22 (3H，d，J=5.8 Hz，H-17)，1.23 (3H，d，J=5.8 Hz，H-16)，1.27(3H，s，H-19)，1.20 (3H，s，H-20);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:37.8 (C-1)，18.5 (C-2)，36.6(C-3)，47.4 (C-4)，44.5 (C-5)，21.9 (C-6)，29.2(C-7)，127.0 (C-8)，147.7 (C-9)，36.8 (C-10)，110.8 (C-11)，150.7 (C-12)，131.7 (C-13)，126.7(C-14)，26.7 (C-15)，22.5 (C-16)，22.7 (C-17)，184.8 (C-18)，16.2 (C-19)，25.0 (C-20)。以上數據與文獻［13］報道一致，故鑒定化合物3 為(12-hydroxydehydro-abietic acid)。

化合物4 無色結晶(氯仿-甲醇1:1)，EI-MS m/z 430(［M］+);1H NMR (CDCl3，400 MHz)，δ:6.12 (1H，t，J=5.2 Hz，H-15)，5.61 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，5.05 (1H，d，J=2.0 Hz，H-17a)，5.03(1H，d，J=2.0Hz，H-17)，4.37 (1H，d，J=10.0 Hz，H-20a)，4.15 (1H，dd，J=1.6 Hz，H-20)，3.71(1H，brs，H-3)，2.20，2.13 (each 3H，s，2 ×-OAc)，1.28 (3H，s，H-18)，1.08 (3H，s，H-19);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:202.5 (C-1)，41.7 (C-2)，77.0 (C-3)，37.5 (C-4)，47.6 (C-5)，73.9 (C-6)，207.9 (C-7)，56.5 (C-8)，39.5 (C-9)，51.2 (C-10)，20.6 (C-11)，32.7 (C-12)，34.4 (C-13)，35.2(C-14)，73.3 (C-15)，149.7 (C-16)，108.7 (C-17)，29.1 (C-18)，22.9 (C-19)，62.0 (C-20)，170.1，169.4，21.0，20.5 (OAc):以上數據與文獻［14，15］報道一致，故鑒定化合物4 為Neorabdosin。

化合物5 無色針晶(氯仿-丙酮)，EI-MS m/z:432，C24H32O7;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:5.67(1H，t，br s，H-15)，5.13 (1H，s，H-17a)，5.11 (1H，s，H-17b)，4.89 (1H，t，J=3.6 Hz，H-6)，4.37 (1H，dd，J=10.0，1.2 Hz，H2-20a)，3.96 (1H，dd，J=10.0，1.6 Hz，H-20b)，2.24，2.08 (each 3H，s，2 ×-OAc)，0.98 (3H，s，H-18)，0.92 (3H，s，H-19);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:212.2 (C-1)，35.2 (C-2)，38.0 (C-3)，32.5 (C-4)，53.2 (C-5)，74.5 (C-6)，96.5 (C-7)，51.0 (C-8)，42.3 (C-9)，48.6 (C-10)，17.2 (C-11)，31.8 (C-12)，35.3 (C-13)，25.9(C-14)，74.5 (C-15)，157.0 (C-16)，109.8 (C-17)，29.7 (C-18)，23.0 (C-19)，64.6 (C-20)，173.6，170.1，21.9，21.0 (2 ×-OAc)。以上數據與文獻［16］報道一致，故鑒定化合物5 為毛萼晶D(Maoecrystal D)。

化合物6 無色結晶(丙酮)，EI-MS m/z 392［M］+;1H NMR (CDCl3-CD3OD，400 MHz)δ:5.07(1H，s，H-17a)，5.05 (1H，s，H-17b)，4.70 (1H，br s，H-15)，4.31 (1H，s，H-1)，4.24 (1H，d，J=9.6 Hz，H-20a)，4.07 (1H，d，J=8.8 Hz，H-20b)，3.72(1H，m，H-6)，1.98 (3H，s，-OAc)，1.11 (3H，s，H-18)，1.02 (3H，s，H-19);13C NMR (C5D5N，100 MHz)δ:74.6 (C-1)，25.6 (C-2)，38.5 (C-3)，33.7(C-4)，58.4 (C-5)，76.8 (C-6)，97.2 (C-7)，52.6(C-8)，42.9 (C-9)，39.9 (C-10)，17.3 (C-11)，32.7 (C-12)，37.0 (C-13)，26.8 (C-14)，75.1 (C-15)，162.1 (C-16)，107.1 (C-17)，32.8 (C-18)，22.0 (C-19)，63.0 (C-20)，170.0，21.5 (-OAc)。以上數據與文獻［16］報道一致，故鑒定化合物6 為毛萼晶E(Maoecrystal E)。

化合物7 無色粉末(氯仿)，EI-MS m/z 388［M］+;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:6.76 (1H，d，J=10.0 Hz，H-3)，5.89 (1H，d，J=10.0 Hz，H-2)，5.64 (1H，brs，H-6)，5.05 (1H，brs，H-17a)，4.82(1H，s，H-17b)，4.31 (1H，d，J=10.8 Hz，H-20a)，3.98 (1H，J=10.8 Hz，H-20b)，3.96 (1H，d，J=2.0 Hz，H-7)，2.12 (3H，s，-OAc)，1.28 (3H，s，H-18)，1.20 (3H，s，H-19);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:198.0 (C-1)，127.5 (C-2)，160.5 (C-3)，35.5 (C-4)，52.2 (C-5)，72.7 (C-6)，96.8 (C-7)，51.6 (C-8)，42.5 (C-9)，46.2 (C-10)，17.6 (C-11)，32.5 (C-12)，35.6 (C-13)，26.7 (C-14)，74.4(C-15)，157.2 (C-16)，108.9 (C-17)，29.2 (C-18)，27.1 (C-19)，64.8 (C-20)，171.7，21.1(Oac)。以上數據與文獻［17］報道一致，故鑒定化合物7 為毛萼晶B(Maoecrystal B)。

化合物8 白色粉末(氯仿)，EI-MS m/z 360［M］+;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:6.57 (1H，d，J=10.4 Hz，H-3)，5.92 (1H，d，J=10.4 Hz，H-2)，4.90 (1H，d，J=11.2 Hz，H-20a)，4.12 (1H，d，J=11.2 Hz，H-20)，1.30 (3H，s，H-18)，1.28 (3H，s，H-19)，1.18 (3H，d，J=6.8 Hz，H-17);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:196.2 (C-1)，125.0 (C-2)，156.4 (C-3)，36.0 (C-4)，53.1 (C-5)，170.2 (C-6)，169.3 (C-7)，59.0 (C-8)，43.2 (C-9)，49.8(C-10)，18.1 (C-11)，29.7 (C-12)，35.3 (C-13)，29.5 (C-14)，216.4 (C-15)，51.1 (C-16)，16.8 (C-17)，31.8 (C-18)，24.7 (C-19)，69.0 (C-20)。以上數據與文獻［12］報道一致，故鑒定化合物8 為毛萼晶N(Maoecrystal N)。

化合物9 無色粉末(氯仿)，EI-MS m/z 386［M］+;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:6.34 (1H，t，J=2.4 Hz，H-15)，5.10 (1H，d，J=1.2 Hz，H-17a)，5.07 (1H，d，J=2.4 Hz，H-17b)，4.61 (1H，d，J=8.8 Hz，H-20a)，4.27 (1H，d，J=8.8 Hz，H-20b)，3.78 (1H，t，J=2.8 Hz，H-3)，3.25 (1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，2.14 (3H，s，-OAc)，1.55 (3H，s，H-18)，1.22 (3H，s，H-19);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:205.8 (C-1)，41.5 (C-2)，77.4 (C-3)，40.2 (C-4)，132.5 (C-5)，143.5 (C-6)，193.9 (C-7)，53.7(C-8)，27.3 (C-9)，52.5 (C-10)，19.2 (C-11)，31.9 (C-12)，40.9 (C-13)，38.4 (C-14)，75.9 (C-15)，150.7 (C-16)，108.9 (C-17)，23.1 (C-18)，21.7 (C-19)，67.0 (C-20)，170.9，21.0 (-OAc)。以上數據與文獻［18］報道一致，故鑒定化合物9 為Coetsoidin A。

化合物10 白色粉末(氯仿)，EI-MS m/z 390［M］+;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:9.80 (1H，d，J=4.8 Hz，H-7)，5.20 (1H，d，J=12.0 Hz，H-20)，4.70 (1H，d，J=12.0 Hz，H-20)，4.75 (1H，m，H-1)，2.04 (3H，s，-OAc)，1.21 (3H，s，H-18)，1.17(3H，d，J=7.6 Hz，H-17)，1.00 (3H，s，H-19);13C NMR (CDCl3，100 MHz)δ:74.8 (C-1)，24.0 (C-2)，39.8 (C-3)，34.0 (C-4)，61.7 (C-5)，202.3(C-6)，169.7 (C-7)，58.7 (C-8)，43.4 (C-9)，43.2(C-10)，17.1 (C-11)，29.1 (C-12)，35.0 (C-13)，28.3 (C-14)，215.5 (C-16)，50.9 (C-16)，16.7 (C-17)，32.9 (C-18)，24.0 (C-19)，67.6 (C-20)，170.3，21.1 (-OAc)。以上光譜數據與文獻［19］報道一致，故鑒定化合物10 為毛萼晶L(Maoecrstal L)。

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