赤芝中一個新的酚性雜萜

周鳳嬌，王心龍，王淑美，程永現*

1廣東藥學院，廣州 510006;2 中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，昆明 650201

靈芝最早記載于《神農本草經》，有仙草之稱，被列為上品，又名三秀、茵或芝［1］，它是一種堅硬、多孢子和微帶苦澀的菌類。靈芝屬種類較多，《中華人民共和國藥典》僅收載了赤芝(Ganoderma lucidum)或紫芝(Ganoderma sinensis)的干燥子實體作為藥材正品來源［2］，但實際上靈芝屬其它品種市場也流通并藥用。靈芝作為名貴中藥多年來曾引起眾多學者關注，以“Ganoderma”為主題詞，通過SciFinder 檢索可發現相關研究多達萬余篇。研究發現靈芝可調節人體代謝和內分泌功能，對免疫系統、神經系統、心血管系統、呼吸系統等均具有較好的干預效果，同時還可保肝、抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老、抗炎等［3］。靈芝臨床上或民間被用于治療多種疾病，如慢性支氣管炎、消化不良、神經衰弱、慢性肝炎、高血壓、腫瘤、AIDS 等［4，5］。雖然靈芝屬的研究已多，但化學成分多局限于三萜、多糖和生物堿［6-8］，我們對赤芝的化學成分進行了研究，曾報道lingzhiol 及其腎保護作用［9］，對其繼續深入研究，從中分離得到9 個化合物，其中包括1 個新的酚性雜萜及2 個首次分離的化合物。該研究將進一步加深和拓寬了人們對靈芝化學的認識。

1 儀器與材料

VGAUTO Spec-3000 及Finnegan MAT 90 質譜儀;Bruker AM-500 及DRX-600 MHz 核磁共振儀(TMS 作為內標，δ 為ppm，J 為Hz)。硅膠(80～100目和200～300 目)(青島海洋化工廠);40～63 μm RP-18(日本Daiso);45～75 μm MCI gel CHP 20P(日本三菱公司產品);25～100 μm Sephadex LH-20(Pharmacia 公司)。

赤芝于2012年7 月購自中國吉林省北芝菌業科技開發有限公司，樣品經中國科學院昆明植物研究所楊祝良研究員鑒定，憑證標本(CHYX-0579)保存于中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室。

2 提取與分離

取赤芝子實體80 kg，粉碎后用95%的乙醇回流提取(2 × 360 L × 2 h)，濃縮得總提物。總提物用水適當稀釋后用乙酸乙酯萃取3 次，得到乙酸乙酯部分1.1 kg。經硅膠色譜柱進行分離，以氯仿-甲醇(100∶1～1 ∶1)梯度洗脫，得到7 個組分(F1～F7)。F5(31 g)經MCI gel CHP 20P 柱以甲醇-水(10%～90%)梯度洗脫得到3 段組分(F5.1、F5.2、F5.3)。F5.2(22 g)經正相柱硅膠色譜柱，以氯仿-甲醇(50∶1～1∶1)梯度洗脫得到4 段組分(F5.2.1、F5.2.2、F5.2.3、F5.2.4)。F5.2.3(3.5 g)經Sephadex LH-20 柱(MeOH)，RP-18 柱，以甲醇-水(50%～70%)洗脫，得到化合物1(1.5 mg)和3(4.2 mg)。F5.2.4(4 g)經MCI gel CHP 20P 柱，以甲醇-水(10%～50%)梯度洗脫，制備薄層硅膠，用氯仿-甲醇(7∶1)展開，再經Sephadex LH-20 柱(MeOH)，得化合物2(3.0 mg)。F5.2.1(8 g)經RP-18 柱，以甲醇-水(60%～90%)洗脫，再經Sephadex LH-20柱(MeOH)，得化合物5(6.0 mg)、6(17 mg)、7(10 mg)、8(3.0 mg)。F5.2.2(5 g)經Sephadex LH-20(MeOH)，制備薄層硅膠，用氯仿-丙酮(3∶1)展開，然后經Sephadex LH-20 柱，得化合物9(3.6 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 淡黃色固體，由13C NMR、DEPT 譜及高分辨質譜{m/z:306.1104［M］+(calcd for C16H18O6，306.1103)}確定其分子式為C16H18O6，計算其不飽和度為8。1H NMR 譜中烯區或芳香區有3 個質子(δH7.10，d，J=2.8 Hz，H-3';δH6.88，dd，J=8.9，2.8 Hz，H-5';δH6.67，d，J=8.9 Hz，H-6')，其偶合常數表明結構中芳香區存在一個ABX 系統。中場區的質子信號(δH5.47，s，H-6;δH3.84，s，H-8)分別為雙鍵及與羥基相連碳上的質子。另外，中場區還有兩個(δH3.11，s，H-2)質子。1H-1H COSY 譜顯示H-5'/H-6'相關，進一步證實了芳環上的取代方式;H-4/H-5/H-6 相關，表明含C-4-C-5-C-6 相連的結構片段。HMBC 譜顯示H-4 與C-3，C-8 相關，H-6 與C-7，C-8 相關，H-8 與C-3，C-7 相關，提示結構中存在一個六元環(圖1)。H-9 與C-6，C-7，C-8 相關，表明甲基的取代位置，H-2 與C-3(δC50.2)，C-4，C-8相關，表明C-2 通過C-3 與環相連，H-3'與H-2 均與C-1(δC206)相關，可以確定苯環與另一環通過C-1-C-2 相連。因為H-2，H-4，H-8 均與C-10(δC183.6)相關，表明羧基是與C-3 相連。至此，化合物1 的平面結構可以得到毫不含糊的確定。ROESY 譜中未發現H-2/H-8 相關，表明H-2 與羧基位于同側，因此化合物1 的相對構型得以確定。結構中含有2 個手性中心，其比旋光值為-40，手性柱分析只有一個峰，表明化合物1 是一個光學活性結構。該化合物應是一個新雜萜，命名為chizhiol A。–40 (c 0.20，MeOH)，ESI-MS:m/z 305［M– H］-，HR-EIMS:m/z 306.1104 ［M］+(calcd for C16H18O6，306.1103);1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:3.11(2H，s，H-2)，1.99 (2H，m，H-4)，1.81 (2H，m，H-5)，5.47 (1H，t-like，H-6)，3.84 (1H，s，H-8)，1.72(3H，s，H-9)，7.10 (1H，J=2.8 Hz，H-3')，6.88(1H，dd，J=8.9，2.8 Hz，H-5')，6.67 (1H，d，J=8.9 Hz，H-6');13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:206.2 (C-1)，42.1 (C-2)，50.2 (C-3)，24.1 (C-4)，23.9 (C-5)，125.4 (C-6)，135.9 (C-7)，74.3(C-8)，27.1 (C-9)，183.6 (C-10)，156.7 (C-1')，115.7 (C-2')，116.3(C-3')，150.7 (C-4')121.0(C-5')，119.8 (C-6')。

圖1 化合物1 的主要HMBC 和COSY 相關Fig.1 Key HMBC and COSY correlations for 1

化合物2 白色粉末，1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:8.11 (1H，s，H-2)，8.16 (1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，7.28 (1H，t-like，J=7.5 Hz，H-5)，7.24(1H，t-like，J=7.5 Hz，H-6)，7.48 (1H，d，J=8.0 Hz，H-7)，9.89 (1H，s，3-CHO);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:139.8 (C-2)，120.1 (C-3)，123.6(C-4)，122.4 (C-5)，125.0 (C-6)，113.1 (C-7)，125.7 (C-8)，138.9 (C-9)，187.4 (3-CHO)。以上數據和文獻［10］基本一致，故確定化合物2 為吲哚-3-甲醛。

化合物3 淡黃色粉末，1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:7.33 (1H，d，J=2.0 Hz，H-3)，7.37(1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-5)，6.79 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)，9.55 (1H，s，1-CHO)，3.86 (3H，s，2-OCH3);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:126.9 (C-1)，151.3 (C-2)，110.2 (C-3)，161.9 (C-4)，117.6(C-5)，130.1 (C-6)，192.6 (1-CHO)，56.0 (2-OCH3)。以上數據和文獻［11］基本一致，故確定化合物3 為2-甲氧基-4-羥基苯甲醛。

化合物4 淡黃色粉末，1H NMR (400 MHz，acetone-d6)δ:7.56 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.59(1H，dd，J=8.0，1.8 Hz，H-5)，6.91 (1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，3.89 (3H，s，3-OCH3);13C NMR (100 MHz，acetone-d6)δ:122.7 (C-1)，115.4 (C-2)，147.9 (C-3)，151.9 (C-4)，113.3 (C-5)，124.8 (C-6)，167.6 (1-COOH)，56.2 (2-OCH3)。以上數據和文獻［12］基本一致，故確定化合物4 為4-羥基-3-甲氧基苯甲酸。

化合物5 針狀晶體，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.14 (1H，d，J=8.2 Hz，H-3)，4.74(1H，t，J=8.8 Hz，H-7)，1.14 (3H，s，H-18)，0.81(3H，s，H-19)，2.15 (3H，s，H-21)，0.96 (3H，s，H-22)，0.80 (3H，s，H-23)，1.34 (3H，s，H-24);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:34.7 (C-1)，27.6 (C-2)，78.2 (C-3)，38.8 (C-4)，49.0 (C-5)，26.5 (C-6)，66.7 (C-7)，156.3 (C-8)，142.7 (C-9)，38.6(C-10)，196.5 (C-11)，49.0 (C-12)，44.9 (C-13)，58.8 (C-14)，216.1 (C-15)，35.7 (C-16)，54.0 (C-17)，18.3 (C-18)，19.1 (C-19)，205.1 (C-20)，31.2 (C-21)，28.1 (C-22)，15.4 (C-23)，24.6 (C-24)。以上數據和文獻［13］基本一致，故確定化合物5 為靈芝酮A。

化合物6 淡黃色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.21 (lH，t，J=9.2 Hz，H-3)，4.73 (1H，dt，J=8.4，4.2 Hz，H-7)，4.33 (1H，s，H-12)，0.74(3H，s，H-18)，1.30 (3H，s，H-19)，1.93(1H，m，H-20)，1.07 (3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.97 (3H，s，H-28)，0.84 (3H，s，H-29)，1.39 (3H，s，H-30)，3.63 (3H，s，OCH3);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:34.4 (C-1)，27.2 (C-2)，78.2 (C-3)，38.5 (C-4)，49.0 (C-5)，26.6 (C-6)，66.2 (C-7)，157.1 (C-8)，141.9 (C-9)，38.1 (C-10)，199.5 (C-11)，78.1(C-12)，51.8 (C-13)，60.1 (C-14)，217.4 (C-15)，37.3 (C-16)，46.4 (C-17)，11.8 (C-18)，18.7 (C-19)，31.4 (C-20)，20.5 (C-21)，29.6 (C-22)，31.9(C-23)，174.3 (C-24)，27.9 (C-28)，15.3 (C-29)，23.0 (C-30)，51.6 (OCH3)。以上數據和文獻［14］基本一致，故確定化合物6 為methyl lucidenate C。

化合物7 淡黃色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:4.84 (lH，t，J=7.6 Hz，H-7)，1.00 (3H，s，H-18)，1.25 (3H，s，H-19)，0.96 (3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，1.12 (3H，s，H-28)，1.10 (3H，s，H-29)，1.34 (3H，s，H-30);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:35.6 (C-1)，34.2 (C-2)，218.0 (C-3)，46.2 (C-4)，48.8 (C-5)，27.6 (C-6)，66.2 (C-7)，157.9(C-8)，141.1 (C-9)，38.2 (C-10)，197.7 (C-11)，50.1 (C-12)，44.9 (C-13)，59.3 (C-14)，216.8 (C-15)，41.1 (C-16)，46.2 (C-17)，17.6 (C-18)，18.1(C-19)，35.2 (C-20)，18.0 (C-21)，30.6 (C-22)，30.8 (C-23)，177.7 (C-24)，27.0 (C-28)，20.7 (C-29)，24.6 (C-30)。以上數據和文獻［15］基本一致，故確定化合物7 為赤芝酸A。

化合物8 淡黃色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:3.25 (lH，dd，J=11.2，5.2 Hz，H-3)，5.61 (1H，s，H-12)，0.82 (3H，s，H-18)，1.32 (3H，s，H-19)，0.98 (3H，d，J=7.6 Hz，H-21)，1.01(3H，s，H-28)，0.87 (3H，s，H-29)，1.72 (3H，s，H-30)，3.66 (3H，s，OCH3)，2.21 (3H，s，OCOCH3);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:33.2 (C-1)，27.2 (C-2)，77.3 (C-3)，40.3 (C-4)，51.3 (C-5)，36.6 (C-6)，198.9 (C-7)，151.6 (C-8)，145.8 (C-9)，39.1(C-10)，194.1 (C-11)，79.3 (C-12)，47.8 (C-13)，58.4 (C-14)，206.2 (C-15)，37.6 (C-16)，45.3 (C-17)，12.0 (C-18)，17.9 (C-19)，33.2 (C-20)，20.1(C-21)，30.0 (C-22)，31.7 (C-23)，173.8 (C-24)，27.8 (C-28)，15.5 (C-29)，21.3 (C-30)，51.6(OCH3)，20.8 (OCOCH3)，170.2 (OCOCH3)。以上數據和文獻［14］基本一致，故確定化合物8 為methyl lucideniate E2。

化合物9 淡黃色粉末，1H NMR (500 MHz，DMSO-d6)δ:5.28 (2H，s，H-5)，8.69 (1H，s，H-7)，8.13 (1H，d，J=8.1 Hz，H-9)，7.71 (1H，t-like，J=7.3 Hz，H-10)，7.87 (1H，t-like，J=7.3 Hz，H-11)，8.17 (1H，d，J=8.1 Hz，H-12)，7.35 (1H，s，H-14)，5.43 (2H，s，H-17)，0.88 (3H，t，J=7.4 Hz，H-18)，1.86 (1H，q，H-19);13C NMR (125 MHz，DMSO-d6)δ:152.7 (C-2)，145.6 (C-3)，50.4(C-5)，128.1 (C-6)，131.7 (C-7)，127.8 (C-8)，128.6 (C-9)，127.8 (C-10)，130.4 (C-11)，129.1(C-12)，148.0 (C-13)，96.9 (C-14)，150.1 (C-15)，119.2 (C-16)，65.3 (C-17)，7.9 (C-18)，31.4(C-19)，72.5 (C-20)，172.7 (C-21)。以上數據和文獻［16］基本一致，故確定化合物9 為喜樹堿。

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