摘要:目的 在血清中人為加入不同濃度的脂肪乳,觀察其對常規生化檢驗項目結果的影響。方法 收集100例TG<2.26 mmol/L的健康體檢混合血清,取0.9 mL的混合血清加上0.1 mL的蒸餾水做對照組;0.9 mL的混合血清分別加上稀釋后不同濃度的脂肪乳做測量組。結果 當混合脂肪乳的血清的TG濃度達到2.76時對TP、CKMB開始有正干擾,對HDL開始有負干擾;當TG繼續上升到4.07時,開始對Glu、TC、HBDH有正干擾,對Cr、TB開始有負干擾;當TG繼續上升到6.53時,開始對ALT、AST、Alb有正干擾,對Apoa1、Apob有負干擾;當TG繼續上升到11.95時,對DB、Lp(a)、LDL有負干擾,對Alb有正干擾;當TG繼續上升時,導致大部分指標無法測出;脂肪乳對ALP、LDH、CHE、ADA、BUN、K、NA、CL、CO2無明顯的干擾。用高速離心15000 rpm 15 min混合了脂肪乳的血清,取下清測生化指標,與對照組無明顯差異。結論 在實際工作中遇到脂濁標本時,當TG>2.26時對一些生化的指標檢測有干擾,可以采取高速離心取下清測,以得到真值。
關鍵詞:脂濁;脂肪乳;生化指標
在臨床工作中,我們經常會遇到脂濁樣本。脂濁對生化檢驗結果造成的誤差不容忽視。為了加強檢驗質量的控制有必要對脂濁在測定生化項目時的影響加以分析。本實驗用人為方法加入脂肪乳,以控制脂肪的濃度,觀察其對常規生化檢測項目的影響。
1資料與方法
1.1一般資料 DB、TG試劑來源于日本和光, ALT、CHE、LDL-C試劑上海豐匯, ALP北京柏定,TBA寧波美康, ADA浙江康特, GGT、LDH、UA、CK、CKMB、AMS、Bun上海德賽,以上都是雙試劑測定。ApoA1、ApoB來源于上海豐匯,免疫比濁法;AST、CO2上海豐匯,單試劑;TP北京柏定,終點法測定; LP(a)寧波美康,膠乳濁度法; GLU(GOD-POD法)、HBDH北京利德曼;TC德國AUTEC;HDL-C上海景源。脂肪乳華瑞制藥公司。采用OlympusAU5400自動生化分析儀器。
1.2方法 取當天健康者體檢標本中TG<2.26 mmol/L的血清作為測量用的混合血清。脂肪乳分別用蒸餾水1∶1,1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128,1∶256,1∶512做倍比稀釋。取0.9 mL的混合血清加0.1ml的蒸餾水做對照組;0.9 mL的混合血清分別加入上述稀釋后不同濃度的脂肪乳做第一測量組;將混合了脂肪乳的血清用15000 rpm 15 min高速離心后取下清做第二測量組。
2結果
脂肪乳高速離心前后對常規生化檢測項目影響。脂肪乳對常規生化檢測項目影響各不相同,見表1。當混合脂肪乳的血清的TG濃度達到2.76時對TP、CKMB開始有正干擾,對HDL開始有負干擾;當TG繼續上升到4.07時,開始對Glu、TC、HBDH有正干擾,對Cr、TB開始有負干擾;當TG繼續上升到6.53時,開始對Alb、ALT、AST有正干擾,對ApoA1、ApoB有負干擾;當TG繼續上升到11.95時,對DB、Lp(a)、LDL有負干擾;當TG繼續上升時,導致大部分指標無法測出,對TBA、AMS有正干擾,對GGT、UA、CK有負干擾;脂肪乳對ALP、LDH、CHE、ADA、BUN、K、Na、Cl、CO2無明顯的干擾。當高速離心后,15000 rpm 15 min離心后取下清測生化指標,可以觀察到與對照組基本一致。
3討論
3.1干擾機制
3.1.1目前很多生化項目都是用比色、比濁等分析方法進行測定的,而脂濁對光線有一定的散射作用,因此脂濁血清的樣本空白吸光度值會升高,從而對吸光度產生正向干擾[1]。主要是由于懸浮在樣品中的極低密度脂蛋白(VLDL)引起所致。TP波長為546 nm。脂肪乳對其從1∶64開始有正干擾,原因是濁度對波長的干擾。Glu主波長520 nm,副波長600 nm。脂肪乳對其從1∶8開始是正干擾,原因是濁度在主波長520 nm左右處增加了吸光度。TC主波長505 nm,副波長700 nm。脂肪乳對其從1∶8開始是正干擾,原因是濁度在主波長505 nm左右處增加了吸光度。HBDH波長為340 nm,脂肪乳對其是正干擾,原因為脂肪乳在340 nm處有較高的吸光度。ALT、AST波長為340 nm,脂肪乳對其是正干擾,原因為脂肪乳在340 nm處有較高的吸光度。白蛋白的測定方法是BCG法,脂濁增加了色源物質的干擾,對其造成正干擾。TBA主波長405 nm,負波長660 nm;AMS主波長405 nm。脂肪乳對二者均造成正干擾,原因是脂肪乳在主波長處增加了吸光度。
3.1.2血清中水分被不溶性的脂濁微粒所取代,因此除甘油三酯等少數項目以外,脂濁可以使大多數血清成分產生負誤差[2]。HDL-C波長為600 nm。脂肪乳對其從1∶16開始是負干擾,原因是濁度在600nm處未對吸光度造成干擾,而對其他波長造成干擾,造成對其為負干擾[3]。肌酐的測定方法受許多特異\"色源\"物質的干擾,血清中的水分被不溶性的脂濁微粒所取代,對其造成負干擾。TB的測定方法是重氮法、DB的測定方法是釩酸氧化酶法,主波長是450 nm,負波長是546 nm,脂肪乳對其是負干擾,原因是二者主、副波長相距較小,濁度對二者的影響相似,甚至對副波長的影響更大。
3.1.3脂濁血清由于血清粘度加大及脂濁微粒的屏蔽效應,可以減少抗原抗體結合的機率,從而對免疫比濁法產生一定的影響[4]。血清載脂蛋白A1、B是免疫投射比濁法,波長為340 nm。脂肪乳度其是負干擾,原因是脂肪乳與試劑中的抗體結合形成沉淀,降低了抗體的含量。脂濁血清由于血清粘度加大及脂濁微粒的屏蔽效應,可以減少抗原抗體結合的機率,從而對免疫比濁法產生負影響。脂蛋白(a)的測定方法是膠乳濁度法,主波長為600 nm,反應方向為向上。脂濁對光線有一定的散射作用,因此脂濁血清的樣本空白吸光度值會升高,導致本底吸光度過高,從而對吸光度產生負向干擾[1]。LDL主波長506 nm,副波長700 nm。脂濁對其是負干擾,其原因是脂濁對光線有一定的散射作用,因此脂濁血清的樣本空白吸光度值會升高,導致本底吸光度過高,從而對吸光度產生負向擾。
3.1.4脂濁使分析物分布呈非均一性,因此測定過程中的隨機誤差加大。在臨床過程中遇到脂濁嚴CKMB的測定方法是速率法,波長為340 nm。脂肪乳對其從1∶16開始是正干擾,原因為濁度在340 nm處增加了吸光度,對其造成正干擾。但是CK的方法也是速率法,波長也為340 nm,本次試驗中對CK造成了負干擾,其原因是脂濁使分析物分布呈非均一性,因此測定過程中的隨機誤差加大。
3.1.5由于電解質的測定原理是電極法,故脂肪乳對K、Na、Cl沒有影響。
3.2消除方法
3.2.1中度脂濁的血清(TG<2.26 mmol/l),我們常常不需要對其進行特殊處理。
3.2.2對于重度脂濁血清(TG>2.26 mmol/l),由于樣本的本底吸光度過高,必須對樣本進行預處理[2]。具體方法有如下幾種:生理鹽水稀釋法;醚抽提法;靜置實驗;高速離心法;在本次試驗中已得到驗證,高速離心后能有效去除干擾。VITROS干化學分析儀利用特殊的多層薄膜技術,因其測試條有過濾功能,對于有些脂血標本的測定很有用[5]。
參考文獻:
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編輯/肖慧