血管內皮生長因子C、D在宮頸癌中的表達及意義

摘要：目的 檢測血管內皮生長因子C（VEGF-C）、血管內皮生長因子D（VEGF-D）在正常宮頸組織組、宮頸上皮內瘤樣病變組、宮頸癌非淋巴結轉移組、宮頸癌淋巴結轉移組中的表達，并分析其與宮頸癌的關系。方法 免疫組織化學SP法檢測33例宮頸癌組織（淋巴結轉移）、57例宮頸癌組織（非淋巴結轉移）中VEGF-C、VEGF-D的表達，以30例宮頸上皮內瘤樣病變、30例正常宮頸組織作為對照組。結果 VEGF-C、VEGF-D在正常宮頸組織組、宮頸上皮內瘤樣病變組及宮頸癌組織組中的表達量依次增高（P<0.05）；伴淋巴結轉移組VEGF-C、VEGF-D在組織中的表達較無淋巴結轉移組均明顯升高（P<0.05）；Ⅱ期較Ⅰ期相比VEGF-C、VEGF-D的表達增高（P<0.05）。結論 VEGF-C、VEGF-D通過促進宮頸癌內淋巴管形成，與宮頸癌淋巴結轉移有關。

關鍵詞：宮頸癌；淋巴結轉移；血管內皮生長因子C；血管內皮生長因子D

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，淋巴轉移是宮頸癌最常見的轉移方式，宮頸癌在早期就可發生淋巴轉移，而淋巴結轉移是否存在不但影響治療方案的選擇，并且對患者的預后影響很大。研究表明血管內皮生長因子C（vascularendothelialgrowthfactorC，VEGF-C）和血管內皮生長因子D（vascularendothelialgrowthfactorD，VEGF-D）是目前已確認的淋巴管生長因子，其可以特異性的促進腫瘤組織新生淋巴管形成[1]。關于VEGF-C、VEGF-D在宮頸癌組織的表達及其臨床意義的研究報告較少，本實驗通過檢測VEGF-C、VEGF-D在正常宮頸組織組、宮頸上皮內瘤樣病變組、宮頸癌非淋巴結轉移組、宮頸癌淋巴結轉移組的表達情況，進一步分析比較各組之間的差異，為宮頸癌的早期診斷、淋巴結轉移的及時發現與治療提供新的臨床思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 病例選自本院婦科及本市婦幼保健院婦科2007年有完整臨床資料的存檔宮頸癌病理組織蠟塊90例，患者術前未行任何治療，90例宮頸癌按FIGO臨床分期標準分I期58例，Ⅱ期32例；鱗癌55例，腺癌35例；高分化29例，中分化28例，低分化33例；無淋巴結轉移患者57例，有淋巴結轉移33例。宮頸上皮內瘤樣病變（cervialintraepithelialneoplasia，CIN）Ⅲ30例。正常宮頸組織30例。患者年齡34～65歲，平均47.5歲。

1.2方法 采用免疫組織化學SP法。兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGF-D多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中衫金橋生物技術有限公司。蠟塊連續組織切片成4μm厚，分別進行蘇木素-伊紅染色，VEGF-C和VEGF-D免疫組化染色。每批切片均設有陽性對照和陰性對照，用已知陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3結果 判斷所有切片均有兩位高年資病理醫師單獨閱片評價。VEGF-C、VEGF-D陽性表達判斷標準：VEGF-C、VEGF-D定位于細胞漿及胞膜上，胞漿成透明或無色者為陰性，胞漿或（和）胞膜呈深棕色或棕黃色顆粒為陽性。每例取10個高倍（×400）視野，每個視野計數100個細胞，以陽性細胞/腫瘤細胞總數>10%為陽性表達。

1.4統計學方法 數據應用SPSS11.0軟件行統計學處理。計數資料采用%表示，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

VEGF-C、VEGF-D蛋白主要表達于癌細胞，陽性顆粒呈彌漫性或小灶性分布，間質中少量表達。癌組織VEGF-C、VEGF-D蛋白高表達，癌周組織中VEGF-C、VEGF-D呈低表達，癌組織顯著高于癌周組織，差異有統計學意義，并且兩組中表達均高于宮頸上皮內瘤樣病變組、正常宮頸組織組（P<0.05）。癌組織中VEGF-C、VEGF-D的表達與臨床分期相關，Ⅱ期明顯高于Ⅰ期，差異顯著（P<0.05）。淋巴結轉移組VEGF-C、VEGF-D的陽性表達率為72.7%、63.6%明顯高于無淋巴結轉移組的49.1%、45.6%，差異有統計學意義（P<0.05）。病理分級高分化、中分化和低分化組癌組織中VEGF-C、VEGF-D的表達差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

目前已知的腫瘤轉移途徑中，淋巴轉移是宮頸癌轉移的重要途徑之一，它關系到治療方案的選擇，而淋巴管的生成是發生淋巴轉移的必要條件。血管內皮生長因子（VEGF）是一種糖蛋白細胞因子，是由腫瘤細胞產生及分泌的血管生成因子[2]。血管內皮生長因子（VEGF）及其受體在血管生成過程中發揮著重要作用[3]，其特異性的作用于內皮細胞，促進內皮細胞的增殖，介導正常或病理的血管和淋巴管生成。VEGF-C、VEGF-D是VEGF家族新成員，它是一種高度保守的分泌性糖蛋白，腫瘤淋巴管生成主要受VEGF-C、D/VEGFR-3的調控[4]。VEGF-C、VEGF-D的促淋巴管生成作用和宮頸癌之間存在一定的關系。

VEGF-C是首先被發現的促淋巴管生長因子，最初由Joukov等從人前列腺癌細胞株PC-3的cDNA文庫中克隆并分離出來的。在惡性腫瘤中，VEGF-C主要產生于癌細胞。臨床試驗發現，腫瘤細胞中的VEGF-C可誘導淋巴管生成，促進腫瘤淋巴轉移的發生。在人類多種原發惡性腫瘤組織中，VEGF-C的表達與區域淋巴結轉移顯著相關[5]。研究顯示VEGF-C的表達在人類乳腺癌、結腸直腸癌、前列腺癌、睪丸癌、食管癌、胃癌、甲狀腺癌中與淋巴結轉移顯著相關。本試驗中，研究發現VEGF-C在宮頸癌組織中的表達均明顯升高，與宮頸上皮內瘤樣病變組、正常宮頸組織組相比，差異顯著（P<0.05）。VEGF-C蛋白淋巴結轉移組較非淋巴結轉移組表達要高，差異有統計學意義（P<0.05）。VEGF-C的表達，Ⅱ期比Ⅰ期高，差異顯著（P<0.05），有統計學意義。

VEGF-D是由Achen等在1988年通過計算機同源搜索發現并鑒定的血管內皮生長因子，與VEGF-C結構功能相似，在正常組織中少見表達，多由腫瘤細胞及腫瘤基質細胞表達。Stacker等[6]在小鼠腫瘤異種移植模型中證實VEGF-D能夠誘導腫瘤內淋巴管形成，腫瘤細胞上表達的VEGF-D能夠促進腫瘤細胞向淋巴結轉移。Hu等[7]追蹤觀察69例結直腸癌患者顯示腫瘤組織VEGF-D蛋白表達呈較高水平，其表達水平與淋巴轉移及患者低生存率相關，認為VEGF-D的表達與淋巴結轉移及患者預后密切相關。本試驗中，研究發現VEGF-D在宮頸癌組織中的表達均明顯升高，與宮頸上皮內瘤樣病變組、正常宮頸組織組相比，差異顯著（P<0.05）。VEGF-D蛋白淋巴結轉移組較非淋巴結轉移組表達要高，差異有統計學意義（P<0.05）。VEGF-D的表達，Ⅱ期比Ⅰ期表達要高，相比差異顯著（P<0.05），有統計學意義。

Van[8]等發現VEGF-C、VEGF-D在宮頸病變不同階段表達有顯著正相關性。Haiko等[9]研究發現，在從子宮頸上皮內瘤樣病變進展為子宮頸浸潤癌的過程中，VEGF-C、VEGF-D表達不同，因此推測其可能還參與了宮頸癌變過程中的促淋巴管生成表型的轉變，使得子宮頸癌早期即可發生淋巴轉移。本研究顯示，在癌旁組織和不同宮頸癌試驗中，在正常宮頸組織組、宮頸上皮內瘤樣病變組、宮頸癌無淋巴結轉移組、宮頸癌淋巴結轉移組，在宮頸癌Ⅰ期和Ⅱ期中，VEGF-C、VEGF-D的表達和宮頸病變程度呈正相關。本研究顯示，VEGF-D在宮頸疾病組織中的表達與VEGF-C呈高度正相關，二者在宮頸癌癌變過程中表達逐步增強，并與宮頸癌分期和有無淋巴結轉移密切相關。本研究顯示，VEGF-D同VEGF-C一樣在宮頸癌新生淋巴管形成中發揮作用，誘導宮頸癌新生淋巴管形成，促進宮頸癌淋巴結轉移。

腫瘤的抗血管生成治療已用于臨床并取得較好療效，但是僅抗血管治療具有局限性，VEGF-C及VEGF-D還有促進淋巴管生成的作用，腫瘤淋巴管生成是腫瘤淋巴轉移的重要途徑，隨著腫瘤淋巴轉移機制的進一步闡明，阻斷VEGF-C及VEGF-D介導的生物治療可能成為治療腫瘤的新靶點。

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編輯/哈濤