HPLC法測定劉寄奴中7—甲氧基香豆素的含量

摘要：目的 建立劉寄奴中7-甲氧基香豆素的含量測定方法。方法 Agela Technologies C18色譜柱，以甲醇-水-冰醋酸（52：48：4）為流動相，流速：0.8ml/min，檢測波長：322nm，柱溫：40℃。結果 7-甲氧基香豆素濃度在2.336～46.72ug/ml范圍內，線性關系良好。回歸方程為y=120.93x+7.9298，相關系數：R=1（n=6）。結論 本方法簡便、準確、靈敏度高、重現性好，可用于劉寄奴中7-甲氧基香豆素的含量測定。

關鍵詞：劉寄奴；7-甲氧基香豆素；HPLC

劉寄奴為菊科植物奇蒿Artemisia anomala S Moore的干燥地上部分。具有活血祛瘀，通經止痛，解暑止瀉的功能。主治腹痛脹痛，月經不調，暑熱泄瀉，跌打損傷，金瘡出血，癰腫。劉寄奴主產于江蘇、浙江、江西等省。其含有木栓酮、β-谷甾醇、7-甲氧基香豆素、東莨菪亭、異嗪皮啶、胡蘿卜苷、咖啡酸等成分[1]。因7-甲氧基香豆素具有一定的生物活性，且性質穩定。筆者對劉寄奴中7-甲氧基香豆素的含量測定進行系統探討，得出了操作簡便快速、結果準確可靠的測定方法。為充分利用本地資源、更好地控制劉寄奴藥材質量，創造了很好的條件。

1 儀器與試藥

安捷倫1200液相色譜儀（美國安捷倫公司），KQ100DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。7-甲氧基香豆素對照品來源于北京北研馨綠生物技術有限公司，純度>98%，含量測定用；甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 色譜條件與測定條件

色譜柱為Agela Technologies C18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為甲醇-水-冰醋酸（52：48：4），流速為0.8ml/min，檢測波長為322nm，柱溫：40℃[2-4]。在此色譜條件下7-甲氧基香豆素與其它組分分離完全，保留時間為7.585min，理論塔板數為13195。見圖1。

圖1 對照品（A）與樣品（B）色譜圖

3 溶液的制備

3.1對照品溶液的制備 精密稱取7-甲氧基香豆素對照品11.68mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。取上述母液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液[5]。

3.2供試品溶液的制備 取本品粉末（過二號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

4 結果

4.1線性關系考察 分別取母液0.25、0.5、0.75、1.25、2.5、5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，吸取20ul進行高效液相測定，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標進行線性回歸，結果標準曲線方程為y=120.93x+7.9298，相關系數R=1。表明：7-甲氧基香豆素濃度在2.336～46.72ug/ml范圍內，與峰面積呈良好線性關系。

4.2精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，重復進樣6次，以峰面積計算方法測定精密度，RSD為0.47%，顯示精密度良好。

4.3重復性試驗 取同一批劉寄奴粉末6份，按照供試品溶液制備項下的方法操作，制得6份供試品溶液，測定并計算6份供試品溶液中7-甲氧基香豆素的含量，其RSD為0.9%。表明樣品按本標準試驗，重現性良好。

4.4穩定性試驗 取同一批供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h進樣測定，結果7-甲氧基香豆素含量的RSD為1.0%，表明樣品溶液在24h內穩定。

4.5回收率測定 精密稱取已知含量的同批劉寄奴粉末（含量為1.4253mg/g）6份，每份約0.25g，分別精密加入7-甲氧基香豆素對照品溶液（濃度11.68ug/ml）25ml，按上述樣品溶液的制備方法和色譜條件進行平行測定，見表1。

4.6樣品測定 按上述操作方法，測定8份來自不同產地的樣品，外標法計算含量，見表2。

5 討論

5.1測定波長的選擇 取7-甲氧基香豆素對照品溶液，在200～400nm波長范圍內進行光譜掃描，結果在322nm處有最大吸收，故選擇322nm為測定波長。見圖2。

圖2 7-甲氧基香豆素對照品紫外掃描圖

5.2流動相的選擇 在對流動相的考察上，先采用甲醇-水（52：48），發現基線漂移。加入0.4%的冰醋酸溶液，分離效果不佳。進而對其比例不斷的調整，至加入4%左右的冰醋酸溶液，主成分與其它雜質峰得到良好的分離，且保留時間合適，峰形良好。

5.3提取溶劑和提取方法的選擇 采用甲醇、乙醇、流動相三種不同溶劑，對其提取效果進行比較，結果顯示甲醇超聲提取的含量最大，故選擇甲醇為提取溶劑，超聲為提取方法。

5.4提取體積的考察 分別精密加入不同體積甲醇，超聲提取30min，結果顯示加入甲醇25ml提取已比較完全，為節省成本，采用25ml甲醇超聲提取。

5.5提取時間的考察 精密加入甲醇25ml，分別超聲10、20、30、40min，結果表明，超聲30min可提取完全，故提取時間定為30min。

5.6影響藥材含量的因素 從上述測定結果可知，不同產地的劉寄奴7-甲氧基香豆素的含量有明顯差別，說明生態環境、采收時間及年限等差異對7-甲氧基香豆素的含量造成影響。

參考文獻：

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編輯/哈濤