試論趨化因子CXCR4在卵巢腫瘤干細胞活動中的作用

摘要：目的 通過研究卵巢干細胞中趨化因子受體在腫瘤干細胞系中侵襲、轉化中的作用，探討治療卵巢腫瘤的新方法。方法 采用流式細胞術和RT-PCR方法檢測趨化因子的活動表達，同時通過體外微孔隔離室觀察趨化因子受體在卵巢腫瘤細胞侵襲、轉移活動中作用。結果 趨化因子受體CXCR4在卵巢癌細胞中呈陽性，通過封閉CXCR4可以抑制趨化因子CXCL12族對腫瘤遷移的促進作用。結論 卵巢腫瘤干細胞中趨化因子受體的活躍程度直接和腫瘤生長活動相關，發(fā)揮趨勢因子的沉默作用可以減緩卵巢癌細胞的生長。

關鍵詞：卵巢腫瘤；CXCL12；CXCR4

女性卵巢腫瘤發(fā)病率越來越高已經成為一個趨勢，這既和現(xiàn)代人的生活、工作習慣改變相關，也和我們面臨的環(huán)境日益惡化有關。眾多的卵巢腫瘤患者診療資料表明：卵巢癌細胞非常容易發(fā)生侵襲、轉移。而更進一步的醫(yī)學研究也發(fā)現(xiàn)，卵巢癌細胞侵襲、轉移的速度和患者身體體質以及卵巢腫瘤干細胞中的趨化因子受體表達的高低有密切聯(lián)系。本文主要探討唯一一個在卵巢腫瘤干細胞上特異表達的趨化因子CXCL12族及其特異性受體CXCR4在卵巢癌細胞侵襲、轉移中所起的作用。

1資料與方法

1.1培養(yǎng)卵巢腫瘤干細胞 將CAOV-3卵巢細胞株和Anglne細胞株接種在含10%胎牛血清的標準培養(yǎng)基中，并在37°C、5%CO2以及飽和濕度環(huán)境中培養(yǎng)24h。

1.2建立CXCR4穩(wěn)定表達體系 取培養(yǎng)基細胞，用磷酸鹽緩沖液沖洗兩次，使用SIGMA Trizol試劑盒提取卵巢腫瘤干細胞總RNA，再進行反轉錄生成聚合酶鏈反應物（RT-PCR），取2.5μL的PCR物在1.5%瓊脂糖凝膠上進行電泳，用溴化一啶進行染色，最后通過紫外光檢測儀觀察PCR的合成結果，采用免疫熒光標志流式細胞術對卵巢腫瘤干細胞CXCR4的表達進行分析。

1.3分組檢測CXCR4趨化因子的趨化活性 腫瘤干細胞穩(wěn)定生長至75%～95%融合時，再用磷酸鹽緩沖液清洗兩遍，并將多細胞組合在無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)成單細胞懸液，接著將腫瘤干細胞接種在不同的Transwell侵襲小室內。在每孔小室的上室加0.2mL的單細胞懸液，下室加0.4mL的無血清培養(yǎng)液。通過添加不同趨化因子以及改變趨化因子的不同濃度，將卵巢腫瘤干細胞分為五組進行培養(yǎng)，各組具體趨勢因子分布及濃度見表1。

在培養(yǎng)結束后，將五組樣本分別用磷酸鹽緩沖劑再沖洗兩次，并采取措施抹去未侵襲的細胞，在無菌風干的情況下用0.1%結晶紫進行染色20min，再用自來水沖洗。將干細胞切片隨機記錄5個視野的侵襲、轉移細胞數(shù)，進行平均統(tǒng)計。

2結果

2.1 CXCR4的表達情況 流式細胞檢測結果顯示在CAOV-3卵巢細胞株存在表達中等量的CXCR4趨化因子，在RT-PCR的檢測表明，該細胞存在一定程度的CXCR4分子轉錄現(xiàn)象。在Anglne細胞株中則不存在CXCR4表達。

2.2 CXCR4趨化因子表達不同對CAOV-3卵巢腫瘤細胞侵襲和轉化作用的影響。在B組，當在下室添加一定濃度的CXCL12趨化因子時，腫瘤細胞發(fā)生侵襲和轉移的數(shù)量比A組（對照組）明顯增加，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在C組，當CXCL12濃度明顯增加時，侵襲和轉移的腫瘤細胞數(shù)量比B組又明顯增加了，也具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而在D組和E組，由于在上室分別添加了CXCR4中和抗體以及CXCR4拮抗劑AMD3100，明顯抑制了卵巢腫瘤干細胞的侵襲、轉移趨勢，在進一步的比較中（E組），加入CXCR4拮抗劑AMD3100時，卵巢腫干細胞侵襲、轉移的趨勢抑制更加明顯（P<0.05），見表2。

3討論

腫瘤細胞的侵襲、轉移抑制是腫瘤治療研究的重點，通過尋找與腫瘤細胞侵襲、轉移有關的趨化因子也成為當前腫瘤治療藥物研制的關鍵。由于腫瘤發(fā)生部位的不同，不同趨化因子受體在腫瘤細胞侵襲轉移中的作用也就不盡相同。通過對卵巢腫瘤干細胞侵襲轉移的檢測，我們可以發(fā)現(xiàn)，趨化因子受體（CXCL12族和CXCR4）在腫瘤干細胞的侵襲、轉移中發(fā)揮了重要的作用[1]。

趨化因子的作用主要在于趨化細胞的遷移。例如淋巴結中的趨化因子（Ltn）會通過與組織中的抗原提呈細胞相互作用監(jiān)視病原體的入侵；血管中有些趨化因子（CCR7）會提供一些關鍵信息促成細胞生成；而炎癥趨化因子（Il8）的作用則是趨化白細胞從血循環(huán)系統(tǒng)到組織的感染或是損傷部位。顯然，卵巢腫瘤干細胞中的趨化因子也影響了腫瘤細胞的活動規(guī)律[2]。

CXCR4是白細胞受體中的一種，在人體免疫系統(tǒng)的細胞調整中發(fā)揮重要作用。國外的醫(yī)學研究表明，80%的卵巢腫瘤組織中存在趨化因子CXCL12的受體CXCR4的表達，95%以上的卵巢腫瘤腹水中有CXCL12，正常的卵巢組織細胞中則不存在。本例中的對比檢測結果也證明了這一結論。

腫瘤細胞的惡性程度最直接、最準確的判斷標準就是細胞的侵襲以及轉移程度。本文通過培養(yǎng)不同組別的卵巢腫瘤干細胞，檢測的結論是：CXCL12能明顯促進CAOV-3細胞的侵襲轉移，而當加入CXCR4中和抗體或是CXCR4拮抗劑時，這種侵襲和轉移的程度有著明顯的減緩。顯然，趨化因子CXCL12和CXCR4在卵巢腫瘤的發(fā)展過程中有著重要影響。

4結論

CXCR4、 CXCL12族趨化因子的相互作用會促進卵巢腫瘤細胞的侵襲和轉移速度，雖然通過抑制趨化因子受體CXCR4的表達，并不肯定就能阻止腫瘤細胞的擴散，但給未來治療卵巢腫瘤的藥物研究提供了一條新的思路。

參考文獻：

[1]黃文，李仲均，黃素然，等.CXCR4在卵巢上皮性癌組織和轉移淋巴結中的表達及臨床意義[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報，2013（12）：1752.

[2]宋淑亞，崔研因.CXCR4抑制劑與血液系統(tǒng)腫瘤的治療[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生， 2013（15）：2306.

編輯/孫杰