1例用玻片凝集法鑒定老年患者血型錯誤的原因分析

摘要：目的 生理鹽水玻片凝集法測定老年患者血型，交叉配血發現血型鑒定錯誤，查找原因。方法 玻片法，試管法，正定型，反定型，生理鹽水交叉配血實驗；方法學原理：根據紅細胞膜表面有無A抗原和（或）B抗原，將血型分為A，B，AB，O型4種。可利用紅細胞凝集試驗，通過正反定型準確鑒定ABO血型。正定型是指用標準抗A抗B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或（和）B抗原；反定型，是指用標準的A型、B型細胞來測定血清中有無抗A和（抗B）。結論 可以通過試管凝集法檢測發現老年體弱患者血中較弱的抗原，從而正確鑒定血型，合理交叉配血，可為臨床手術，外傷失血等合理輸血提供有力的醫療保障。

關鍵詞：血型鑒定；玻片法；試管法；注意事項

筆者曾在基層醫院遇到過1例88歲的老年患者，因摔倒后30min診斷為\"股骨骨折\"收住院，遵醫囑進行手術前驗血備血。立即抽取患者血液3.0ml，以 1500轉/min離心分離血清，用生理鹽水凝集法（玻片法）鑒定患者ABO血型，鑒定結果：患者紅細胞懸液與抗A與抗B血清均不發生凝集（紅細胞均勻散在）判定為O型RH（+），與O型獻血者血液交叉不符（次側管出現紅細胞凝集和溶血現象），同型血相輸主側和次側均不應凝集。查找原因發現，老年患者由于ABO血型抗原性較弱，用玻片法鑒定出現假陰性（本應為B型，老年人的紅細胞應與A型血清抗B抗體發生凝集），結果出現假O型（老人紅細胞與A和B血清均不凝集，出現紅細胞均勻散在現象）與O型獻血者交叉出現：次側管凝集和溶血的異型血型交叉配血現象），改用試管法鑒定該老年患者真正血型為B型（+），與B型獻血者交叉配血結果相符（即主側管和次側管紅細胞均無凝集無溶血現象），通過嚴格篩選了B型RH（+）的B型懸浮紅細胞3.0U與患者進行血液交叉配合血型相符，未出現輸血不良反應。患者安全度過手術關，終年94歲。

1 實驗方法和步驟

1.1操作方法

1.1.1用生理鹽水玻片凝集法鑒定 將貯存于-4℃冰箱的抗A和抗B標準血清取出放置至室溫，將以上抽取的患者紅細胞用0.9%的生理鹽水反復洗滌數次，制備成紅細胞懸液備用。分別取患者的紅細胞懸液各1滴加到載玻片上，再分別加入抗A標準血清1滴和抗B標準血清1滴，RH抗D血清1滴，10min后觀察結果。該患者被鑒定為O型RH（+）（即抗A側和抗B側紅細胞均不出現凝集，紅細胞呈游離散在現象）。

1.1.2交叉配血 取O型獻血者血液3.0ml，1500轉/min離心分離血清，同樣用0.9%的生理鹽水洗滌獻血者紅細胞制成紅細胞懸液。取試管2支，分別用玻璃蠟筆注明主側和次側。主側管加入患者的血清4滴，獻血者的紅細胞懸液4滴，次側管加入獻血者的血清4滴，患者的紅細胞懸液4滴，分別輕輕搖勻，平衡后放入離心機以1500轉/min離心1～2min，取出試管觀察結果：主側管無凝集，無溶血，次側管有凝集，微溶血現象與同型血交叉不符，查找原因用試管法鑒定發現該患者血型為B型RH（+），而不是O型RH（+）。

1.2解決辦法 用已知的A型獻血者與患者血液用試管法鑒定血型。即取2支試管，1支試管加入患者的血清2滴，A型獻血者洗滌后的紅細胞懸液（含A抗原）2滴；第2支試管加入患者洗滌的懸浮紅細胞2滴，A型獻血者的血清（含有抗B抗體）2滴，以同樣方法離心10min后觀察結果顯示：第1管紅細胞出現凝集，推斷與A抗原發生凝集反應的 血清中含有抗A抗體（B型和O型人的血清中才含有抗A抗體），但O型與以上O型獻血者做血型交叉結果不符，故排除O型的可能；第2管紅細胞凝集，推斷與抗B抗體發生凝集反應的紅細胞上含有B抗原（B型和AB型的紅細胞上含有B抗原），取B型和AB型紅細胞懸液分別與抗B血清與抗A血清試管法鑒定，發現與抗B血清有少量凝集與抗A血清不凝集，故排除 AB型，RH血型均為陽性，綜上所述可以得出結論，該患者真正血型為B型。因為老年患者抗原性較弱，用玻片法沒有發現弱凝集，用試管法離心后發現弱凝集。

在10多年以前，很多基層醫院連一個專業的檢驗員都沒有，更談不上做血型亞型，RH血型鑒定，凝膠微柱法等等的檢測條件，靠的就是細心和經驗累積。本人在基層醫院工作了20年從未發生過輸血醫療事故，也帶過不少的非專業和專業的學員，糾正過學員鑒定血型的錯誤，現總結一點經驗與基層的同仁們共享。

1.3鑒定血型交叉配血一定要注意以下幾點

1.3.1紅細胞標本問題 ①未加入抗體和血清；②實驗室溫度（37℃以下凝集力減弱）；③未識別溶血；④血清與紅細胞比例不當；⑤離心速度與時間不夠；⑥使用失效或錯誤試劑；⑦實驗器皿不干凈；⑧一些疾病致紅細胞的抗原性太弱，應用抗A和抗B試劑未能出現預期的凝集反應；⑨使用未洗滌的紅細胞標本，其表面黏附的血漿或血清中含有針對抗A抗B試劑中染色劑或其他成分的抗體，出現假陽性；⑩紅細胞抗原性減弱或消失。

1.3.2血清標本的問題 ①小的纖維凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血液凝集，如使用血漿標本或未完全除去纖維蛋白的血清標本；②血清中不正常濃度和比例的蛋白質成分或高分子蛋白增多可引起非特異性凝集，如緡錢狀紅細胞的非特異性凝集；③血清中含抗A，抗B以外的其他紅細胞抗體；④患者接受了ABO血型不同的骨髓移植；⑤血清中抗體減弱或消失。

2 原因分析和處理

2.1重新采集標本，以避免采集，標記，污染等錯誤。

2.2查詢患者以往病史，輸血史，用藥史，骨髓移植史。

2.3徹底洗滌標本或試劑紅細胞。

2.4室溫孵育30min后，離心觀察結果，以檢測弱的抗原抗體反應。

2.5以自身紅細胞做對照，以確定自身抗體的干擾。

2.6非正常高濃度的抗A，抗B可引起前帶現象。

3 ABO正反定型不符及處理

3.1抗體太弱或消失 如新生兒，老年人，應注意患者的年齡和診斷辦法：將血清稀釋，或用2.5%EDTA處理可消除。

3.2患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大分子藥物等原因，可發生類似凝集現象，如緡錢狀凝集，辦法將血清用生理鹽水稀釋3倍。

3.3冷自身抗體存在 所有試劑及細胞37℃孵育判定結果。

3.4自身免疫性溫型抗體 37℃反應比室溫強，血清能凝集自身和其他各型紅細胞，若紅細胞上吸附這種自身抗體，在自身或其他人血清中，均可出現凝集，正定型被誤認為AB型，反定型被誤認為O型，辦法：用遞增溫度（22℃，37℃，45℃），洗滌紅細胞后再做血型鑒定。

3.5正定型注意 更換新批號抗血清或對實驗有懷疑時，要設陽性、陰性對照及進行血清效價的測定 紅細胞懸液濃度過高或離心力過大，可造成假凝集，出現似凝集非凝集外觀，注意洗滌紅細胞，顯微鏡下仔細觀察，采取加溫措施排除由于冷凝集素引起的假凝集致血型判定錯誤。

3.6反定型要注意 不用玻片法，有的患者由于各種疾病等原因，血清中抗體較弱，凝集力不明顯，必須經過離心使紅細胞緊密接觸以便于結果觀察。

3.7引起正反定型不一致的常見原因有 標準血清效價太低、親和力不強。紅細胞懸液配制過濃、過淡，抗原比例不適當，使反應不明顯，出現似凝集非凝集現象。紅細胞上抗原減弱。受檢者血清中缺乏應有的抗A、抗B抗體，或其效價過低。受檢者血清中蛋白紊亂或實驗室溫度過高，常引起紅細胞呈緡錢狀排列。細菌污染、血清中有不規則抗體，低月齡兒、老年人、免疫力低下的人群血清中的抗A、抗B效價太低甚至缺乏，出現正反定型不符。

4 注意事項

工作中如出現以上情況，必須注意以下幾點。

4.1工作時思想要高度集中，不與他人閑談分散注意力，弄錯標本，加錯血清和紅細胞，導致血型鑒定結果錯誤，發生輸血事故。

4.2必要時應合分析用抗人球法、酶法、聚凝胺法或延長反應時間，改變反應溫度等多種方法綜合分析。試劑種類盡量的齊全，以備特殊情況時用。

4.3要及時更新輸血專業知識，有較強的工作責任心和事業心，工作不足5年以上，臨床經驗不足者不能獨立上崗，獨立發輸血配血報告書，必須要在檢驗科主任的帶教下進行輸血前的各項驗血備血的檢驗操作，操作中注意每個細節的操作正確性。

4.4標準血清從冰箱取出后，應待其平衡至室溫后用，否則出現冷凝集現象，用畢立即旋緊蓋子放回-4℃～8℃度冰箱直立保存，以免標準血清溢出交叉污染及其效價降低。注意標準A、B 血清一定不能與待鑒定的紅細胞懸液直接接觸交叉污染致血型鑒定錯誤，定期檢測標準血清效價。多次停電后的標準血清不再使用。

4.5室溫在20℃～24℃左右進行，以免出現冷凝集，用空調或地暖管加溫。

4.6玻片法時間不少于10min，否則較弱凝集不出現，出現假陰性。

4.7正反定型結果一致才可以發報告。

4.8注意反定型法，年老體弱，低月齡患兒，血清中抗體水平下降或缺乏抗A或抗B抗體，引起假陰性或血型鑒定錯誤，注意RH血型是否一致。

4.9紅細胞一定要用0.9%的生理鹽水洗滌，高滲或低滲溶液都會使紅細胞破壞溶血影響血型鑒定和交叉配血結果的觀察。

4.10幼兒紅細胞抗原未發育完全，老年體弱者抗原性較弱，最好采用試管法鑒定血型，因為離心作用可以加速凝集反應還可以使紅細胞接觸緊密，促進紅細胞凝集作用。本文介紹此例屬于此現象，用玻片法鑒定出現假陰性，特別要注意是否有細微的凝集現象，必要時置于顯微鏡下仔細觀察進行反復對比確認后方可出報告。

4.11紅細胞亞型抗原性較弱，抗A抗B效價較低時，易造成漏檢或誤定，加用O型血清（含抗A抗B）血清和反向定型，可避免此類錯誤。

以上是筆者在多年工作中的一點體會，總之輸血前的檢測尤其是ABO血型鑒定的準確性是非常重要的，只有準確鑒定血型才是保證安全輸血最關鍵的環節之一。

參考文獻：

[1]葉應嫵，王毓三，主編.中華人民共和國衛生部醫政司編. 全國臨床檢驗操作規程[M]. 東南大學出版社，1997.

[2]熊立凡，劉成玉，主編.臨床檢驗基礎[M].第4版.北京：人民衛生出版社，2007：8.

編輯/哈濤