ELISA檢測室內質控失控原因分析及處理

摘要：目的 探討ELISA檢測室內質控失控的原因分析及處理措施。方法 統計和分析ELISA檢測2010～2012年室內質控失控原因及處理結果。結果 在9658次試驗中，共發生室內質控失控80次，比例為0.83%，失控原因分別為：試劑原因18次；質控品原因20次；人為原因15次；儀器原因18；環境原因4次；其他原因5次。結論 通過分析，ELISA檢測室內質控失控的原因以試劑、質控品、儀器設備、人為因素為主，為減少失控的發生應提高工作人員的責任心，加強人員培訓，嚴格執行SOP文件，增強關鍵點的控制，同時加強實驗室的硬件建設，使檢測結果更加穩定可靠。

關鍵詞：ELISA；室內質控；失控

臨床實驗室質量管理的第一要素是選擇和執行適當的室內質量控制（Internal quality control，IQC）程序，例如依據測定項目的質量要求和方法特點選擇統計學標準、控制規則和質控品的數目，并嚴格執行IQC程序以提高IQC的質量[1]。筆者通過對室內質控中的失控情況處理及失控原因和處理方法作一探討。

1 資料與方法

1.1試劑 HBsAg 、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗體，用ELISA法，試劑盒由北京萬泰生物技術有限公司提供。所有試劑均通過中國藥品生物制品檢定所批批檢，并在有效期內使用。質控品由北京康徹思坦提供。

1.2儀器 TECAN酶標儀、TECAN洗板機、孵育箱、10-300ul微量移液器。

1.3質控品使用前確認 新批號質控品購入后，應在使用前進行對應項目的使用前確認。使用新批號質控品平行檢測24孔，其中各孔S/CO值應>1，S/CO均值在1.5～4，批內CV%≤15%，即為有效。

1.4質控圖的制作方法 采用Levey-Jennings質控圖法[2]。每次試驗前，將質控品從冰箱取出，平衡至室溫狀態，隨同常規標本一起檢測，連續測定20次，以20次質控血清的結果為依據，計算出平均值（x） 和標準差（s），繪制Levey-Jennings質控圖。

1.5室內質控判斷標準 試劑盒自帶的陰陽性對照檢測結果符合試劑盒要求，室內質控品S/CO值應>1，12s判斷為\"告警\"、 22s、R4s 、41s、10X、10T判斷為\"失控\"。

2 結果

2.1試劑因素引起的失控原因 ①不同批號試劑混用；②試劑保存不當，失效；③試劑過期。

2.2質控品引起的失控原因 ①質控品保存不當造成污染、變質；②質控品密封不好，水分揮發；③質控品開啟時間過長或反復凍融使效價降低；④質控品批號不一致：⑤質控品過期。

2.3儀器引起的失控原因 ①移液器未經校準或校準時間過長；②移液器吸入或排出過快，造成加樣或加試劑不準；③洗板不干凈；④酶標儀比色不準確，光源燈能量減弱；⑤比色杯污染。

2.4人為原因 ①試劑擺放位置錯誤；②質控品擺放位置錯誤；③質控品錯加、漏加、少加；④設置Cotoff公式錯誤，或選擇比色波長不正確。見表1。

3 討論

失控原因的查找并無固定模式。一般原則是由易到難，由近到遠[3]。檢測人員如發現質控數據違背了質控規則，應簡單迅速回顧整個操作過程，分析查找最可能發生誤差的原因，對于處于\"告警\"的質控值可以逐項排查實驗各個環節，若未查找到明顯的告警原因，可以發出該批次檢測報告，并繼續跟蹤下一批次實驗質控，作好相應告警記錄。若下一批次實驗質控再次出現12s則違背22s規則，該批次實驗按照失控處理。對于處于\"失控\"的質控值應填寫失控報告單，上報實驗室負責人，經分析發現的影響因素會影響到患者標本的檢驗結果，則需同時重新檢測質控品和患者標本。

對失控原因的分析是發現誤差來源的途徑，對失控的處理方法則是糾正誤差的關鍵。失控原因主要由試劑、質控品、儀器、人為因素引起，因此常規操作中應注意各環節的質量控制。由于試劑引起失控的處理方法：①更換或添加試劑時，檢查有效期，注意不同批號試劑不能混用；②嚴格按要求保存試劑，防止試劑變質，使用符合要求的蒸餾水配制試劑，嚴格執行標準操作規程。由于質控品引起失控的處理方法：①每天實驗前，常規確認質控品的批號、效期、種類、規格；②質控品不能反復凍融；③融解后的質控品應放在2℃～8℃保存，使用應≤7d，防止污染。由于儀器設備引起失控的處理方法：①嚴格執行儀器設備的使用及維護規程；②經大型維修或維護后的儀器設備使用前應進行確認，保證性能達到預期要求；③儀器設備應定期校準。由于人為操作因素引起失控的處理方法：①加強考核，提高實驗室人員的工作責任心；②加強培訓，提高工作人員的業務素質；③設置Cotoff公式錯誤，或選擇比色波長不正確，未超過比色時間，可糾正錯誤后重新比色，不必對質控品進行復檢；如果超過了比色時間，則應重新進行實驗（包括質控品和患者標本）。

參考文獻：

[1]Westgard JO.Internal quality control：planning and implementation strategies[J].Ann Clin Biochem，2003，40（Pt6）：593-611.

[2]Cubie HA，Moore C，Waller M，et al.The development of a quality assurance progrsmme for HPV testing within the UK HNS cervical screening LBC/HPV studies[J].J Clin Virol，2005，33（4）：287-292.

[3]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第4版，南京：東南大學出版社，2006：201-202.

編輯/哈濤