復發性外陰陰道假絲酵母菌病陰道局部細胞因子的水平

摘要：目的 通過檢測陰道局部IFN-γ、IL-10的水平，探討陰道局部免疫功能與復發性外陰陰道假絲酵母菌病發病的關系。方法 選取婦科就診及體檢的育齡婦女，健康婦女28例、VVC 30例、RVVC 30例，留取陰道灌洗液離心，ELISA法檢測上清液中IFN-γ和IL-10的濃度，RT-PCR法檢測細胞成分中IFN-γ、IL-10mRNA的表達水平。結果 ①RVVC、VVC、健康組IFN-γ蛋白水平為：1.67±0.14、1.81±0.16、1.92±0.12×100pg/ml，患病兩組的表達水平均低于對照組（P<0.05），RVVC和VVC組之間的表達水平也有差異（P<0.05），IFN-γmRNA表達結果與蛋白水平一致；②RVVC、VVC、健康組IL-10蛋白水平為：1.14±0.19、1.07±0.16、0.67±0.15×100pg/ml，患病兩組的表達水平均明顯高于健康組（P<0.05），但患病兩組間的表達水平無明顯差異（P>0.05），mRNA的表達與蛋白水平一致。結論 外陰陰道假絲酵母菌病的發病和復發可能與陰道局部細胞因子水平表達異常有關。

關鍵詞：復發性外陰陰道假絲酵母菌病；IFN-γ；IL-10；ELISA；RT-PCR

外陰陰道假絲酵母菌病（Vulvovaginalcandidiasis， VVC）是一種常見的女性生殖道感染疾病，75%的女性一生至少患過一次VVC[1]。1年中發作4次及以上有癥狀的VVC稱為復發性外陰陰道假絲酵母菌病（Recurrentvulvovaginalcandidiasis， RVVC）。本研究通過測定患者陰道灌洗液中干擾素-γ（IFN-γ）和白細胞介素-10（IL-10）的水平，探討其在VVC和RVVC發病機制中的作用，以期為該病的病因學和免疫治療方面提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料選取婦科就診及體檢的育齡非妊娠婦女為研究對象，按疾病類型分為健康組，VVC組和RVVC組，所有研究對象無內外科疾病及免疫缺陷病，6個月內未服用甾體類激素，1w內無性生活及陰道用藥史。婦科檢查除VVC外無其他生殖道感染疾病、無陰道出血。

1.2 標本采集5ml生理鹽水沖洗宮頸管、陰道上段，后穹窿回抽4~5ml，所有灌洗液均不含血液成分，以3000r/min 離心5min，分離上清液和細胞成分，分別置于-20℃和-80℃的冰箱凍存。

1.3 方法上清液采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法測定，細胞成分采用逆轉錄多聚酶鏈式反應（RT-PCR）法半定量測定。

1.3.1 引物的設計與合成通過Gene Bank 查詢基因序列，IFN-γ上游引物5，-GAGGTCGAAGAGCATCCCAG-，下游引物5，-GCTTAGGTTGGCYGCCTAGT-3，；IL-10上游引物5，-ACATCAAGGCGCATGTGAAC-3，，下游引物5，-GCCACCCTGATGTCTCAGTT-3，。

1.3.2 RT-PCR步驟Trizol提取細胞成分的RNA，按反轉錄試劑盒進行cDNA合成，反應條件為42 ℃，50 min；用RotorGene 3000 PCR儀進行擴增，反應條件：95 ℃，15 s； 59 ℃，25 s；共45個循環。實驗結果應用分析軟件Rotor-Gene計算出2-ΔΔCt值即mRNA的相對含量，每組實驗重復3次，取平均值。

1.4 統計學分析所得數據采用SPSS 17.0統計軟件包進行分析，計量資料用均數+標準差（x+s）表示，組間差異的比較采用方差檢驗。

2 結果

2.1 細胞因子的蛋白水平表達RVVC、VVC、健康組IFN-γ蛋白水平分別為：1.67+0.14、1.81+0.16、1.92+0.12×100pg/ml，患病兩組的表達水平均低于對照組（P<0.05），RVVC和VVC組之間的表達水平也有差異（P<0.05）；RVVC、VVC、健康組IL-10蛋白水平分別為：1.14±0.19、1.07±0.16、0.67±0.15×100pg/ml，患病兩組的表達水平均明顯高于健康組（P<0.05），但患病兩組間的表達水平無明顯差異（P>0.05）。

2.2 細胞因子的基因水平表達RVVC、VVC、健康組IFN-γmRNA分別為：0.44±0.22、0.83±0.23、1.00±0.00，患病兩組的表達水平均低于對照組（P<0.05），RVVC和VVC組之間的表達水平也有差異（P<0.05）；RVVC、VVC、健康組IL-10mRNA水平分別為：2.50±0.41、2.38±0.38、1.00±0.00，患病兩組的表達水平均明顯高于健康組（P<0.05），但患病兩組間的表達水平無明顯差異（P>0.05）。

3 討論

近些年來，隨著對RVVC宿主免疫機制研究的逐漸深入而相對于全身免疫而言，更多的研究結果表明局部免疫異常在RVVC發病中起到重要作用，如臨床研究發現RVVC患者對其它粘膜假絲酵母菌病的易感性并不增加，另外口腔或皮膚粘膜患有假絲酵母菌病的婦女并不易患VVC，因此陰道局部細胞免疫功能的變化可能在RVVC發病中發揮重要作用[2]。正常情況下，婦女陰道局部輔助性T細胞1（Th1）/輔助性T細胞2（Th2）處于動態平衡狀態，它們各自分泌多種細胞因子，形成復雜的網絡，共同調節免疫應答。Th1分泌IL-2、IFN-γ和腫瘤壞死因子等，主要介導細胞免疫，可激活巨噬細胞和中性粒細胞，使機體進入抗真菌狀態；Th2分泌IL-4、IL-10和IL-13等，通過抑制Th1介導的噬菌作用增加對真菌的易感性。這兩種細胞的相互協調決定了機體對真菌的感染性或真菌在粘膜表面的共棲狀態[3]。Th1和Th2免疫應答之間存在著負反饋作用，一旦平衡被打破，會出現一方占優勢的局面，會引起局部免疫的異常，引發病癥。

本研究發現，RVVC患者無論在蛋白水平還是基因水平均表現為IFN-γ明顯降低，而IL-10升高，這表明RVVC 患者存在陰道局部免疫功能失調的異常。IL-10升高對Th1型因子有下調功能，IFN-γ的降低使得機體對抗真菌的能力降低，同時不能很好地抑制Th2型因子，以Th2介導的免疫應答占優勢，使機體加重了對該病的易感性，致使該病反復發作。這與Carvalho等發現用假絲酵母菌活化RVVC患者的外周血，其單核細胞產生的IFN-γ明顯減少或消失的結果相一致。VVC組中，IFN-γ的降低和IL-10的升高，使得Th1/Th2之間的平衡向Th2方向偏移，Th2介導體液免疫反應，激活嗜酸性粒細胞，產生一系列炎性介質，介導Ⅰ型變態反應，這可能與臨床上部分患者出現外陰水腫，局部瘙癢等過敏癥狀有關[4]。另外，RVVC組患者的IFN-γ濃度較單純VVC組低，表明在RVVC患者陰道局部細胞免疫環境改變中，Th1型因子IFN-γ的降低可能在該病的反復發作中發揮了重要作用。

RVVC的發病和復發可能是多因素造成的，陰道局部細胞免疫功能的改變很可能只是因素之一，更多的細胞因子在RVVC中的發病作用需要進一步的探討。目前關于RVVC的治療也存在許多疑問與爭議，需要多項臨床循證試驗來驗證。

參考文獻：

[1] PaulNyirjesy， Jack D， Sobel. Vulvovaginal candidiasis[J].Obstetrics and Gynecology Clinics of North America， 2003.

[2] Cassone A， De Bernardis F， Santoni G.Anticandidal immunity and vaginitis:novel opportunities for immune intervention[J].Infect Immun， 2007.

[3] Mohanty S， Xess I， Hasan F， etal. Prevalence and susceptibility to fluconazole of Candida species causing vulvovaginitis[J].India J Med Res， 2007.

[4] 崔穎，王少為.復發性外陰陰道假絲酵母菌病與陰道局部免疫環境改變的相關性[J].中國實用婦科與產科雜志， 2007.編輯/王海靜