不同檢驗方法對肺結核早期診斷的應用

摘要：目的 探討痰涂片、PCR、PPD三種檢驗方法與肺結核早期診斷中的應用價值，探究快速、可靠、敏感、特異的診斷方法。方法 選取2013年3月～9月我院收治疑似活動性肺結核患者182例，據相同醫師推斷將患者分為高度疑似42例、低度疑似140例，獲取痰樣分別進行涂片、PCR、PPD、培養檢驗，與病理學檢驗結果進行對比。結果高度疑似組陽性率（40.48%）高于低度疑似組（5.71%），高度疑似組痰涂片、PCR、PPD陽性率26.19%、30.95%、30.95%，高于低度疑似組12.86%、11.43%、5.71%；高度疑似組痰涂片敏感度、特異度、符合率分別為64.71%、80.65%、85.71%，PCR為76.47%、86.21%、90.48%，PPD為76.47%、86.21%、90.48%，差異具有統計學意義（P＜0.05）；低度疑似組差異無統計學意義（P＞0.05）。結論 肺結核早期診斷中，運用影像學與癥狀診斷，針對高度疑似者，運用PCR可提高診斷效用，避免漏診；而針對低度疑似者，運用痰涂片法可基本滿足臨床需要；若有需要符合條件者可運用PPD。

關鍵詞：結核病；早期診斷；痰涂片；PCR；PPD

結核病是臨床常見病與多發病，我國是結核病高發國家，患病率居發展中國家第二位，據不完全統計，我國每年新增肺結核患者130萬，其中傳染性肺結核450萬例，肺結核病嚴重威脅國民健康，肺結核防治工作任重道遠[1]。肺結核早期診斷與及時治療是改善預后的關鍵，常用的診斷技術包括X線、CT、細菌性檢驗等，但結核病臨床表現與影像學表現復雜多變、特異性強，細菌性檢驗敏感度低，痰涂片法符合率低、培養法耗時長，探討快速、敏感、特異的細菌學診斷是結核病早期診斷的難題。本研究就我院收治182例據臨床表現與胸部影像學診斷疑似肺結核患者進行痰涂片結核菌檢查、聚合酶鏈反應（Polyerase Chain Reaction，PCR）與皮膚結核菌素蛋白衍化物（PPD）檢驗，比較其診斷效用[2]。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年3月～9月我院收治疑似活動性肺結核患者182例，其中男113例、女69例；年齡13～72歲，平均（51.3±5.3）歲。納入標準：均未有肺結核病史；均進行X線等影像學檢查、結核菌素實驗。據相同醫師推斷將患者分為高度疑似42例、低度疑似140例，兩組患者年齡、性別等臨床資料差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2方法①痰涂片檢查，所有患者均于清晨、夜間和即時，指導深呼吸，取痰液或肺部分泌物，取三份痰標本，若取清晨痰，3h后再取痰標本一份，或留用2份即時痰，痰量3～5ml，合格痰液應呈膿樣、干酪樣，標記后運用竹簽挑起痰膿性物質，覆于載玻片形成圓形痰膜，自然干燥后運用萋尼氏染色法處理，待干后行鏡檢（淡藍色背景），連續觀察，填寫檢驗報告[3]。②PCR檢驗，取痰步驟與痰涂片相同，取0.5ml痰樣，加入1N氫氧化鈉溶液5μL，于37℃溫箱內放置40min，運用高速離心機離心，轉速10000r/min，持續5min，棄上清液后運用5%生理生理鹽水沖洗至中性備用。取胸水與血清各1ml，運用離心機離心后待沉淀后加入裂解液50μl，持續10min沸水浴，取出再次行10000r/min離心持續5min。制備TB-DNA模板：于Taq酶0.2μl中加入15μl反應液混勻后再滴入石蠟油20μl封頂，加入上清液5μl完成制備后行10000r/min離心5min，擴增循環35次，取20mlPCR擴增液行上樣電泳，于紫外線下檢驗，呈S型號曲線增長，最強熒光值較基礎熒光值＞20u為陽性[4]。③PPD檢驗：于左臂內側皮內注射PPD液0.1ml，進行皮試，若72h后可見直徑≥5mm腫結為陽性[5]。

1.4統計學處理本次研究中獲取的所有資料數據均應用SPSS18.0軟件處理，以均數±標準差（x±s）表示計量資料，以數（n）與率（%）表示計數資料，P＜0.05為置信水平，表示差異具有統計學意義。

2結果

2.1不同疑似程度檢測高可能性組確診率高于低度疑似者，兩組不同檢驗方法間陽性檢出率差異具有統計學意義（P＜0.05）（見表1）。

注：*：與高度疑似者相比，P＜0.05

2.2不同檢查方法診斷效用比較低度疑似組中，痰涂片、PCR、PPD診斷效用差異無統計學意義（P＞0.05）；高度疑似似組中，PCR、PPD法敏感度、特異度均高于痰涂片法，差異具有統計學意義（P＜0.05）（見表2）。

注：*：與痰涂片法相比， P＜0.05

2.3假陽性與假陰性情況于高度疑似組中發現2例痰涂片法判斷為陽性者，于PCR檢驗顯示為陰性者，判斷為PCR質量控制不合格，隨后再行PCR檢驗檢驗為陽性；出現1例痰涂片檢驗陰性者，而PCR、PPD均呈陽性者，后確診為肺結核。低度疑似者中，出現痰涂片陰性者，而PCR、PPD均為陽性者，后發現痰涂片質量控制不合格，確診為肺結核。

3討論

我國是肺結核高發國家，肺結核防控治療是公共衛生服務重要項目，國家大規模肺結核防控工作成效顯著，但近年來因防控力度下降，結核病發病率有所上升[6]。早期診斷與治療是防治結核病的關鍵，目前多數基層醫療機構已具備一定的診斷能力，如CT、X 線、癥狀診斷均可作為肺結核輔助診斷方法，但因肺結核潛伏期長，表現特異，若需確診還需進行病原學檢驗。

目前針對肺結核的診斷，細菌培養法是結核病診斷的金標準，但檢驗時間較長，不利于結核病的大規模篩查與早期治療的開展，且培養需要嚴格的質量控制，否則易受其它因素的干擾[7]。因此，臨床上采用快速檢驗法進行肺結核早期篩查，本次研究中痰涂片、PCR、PPD均應用廣泛，操作便捷。痰涂片法是開展應用最早的傳統檢測方法，從形態學的角度檢查肺結核桿菌，因其操作簡便、成本低廉、檢測速度快，成為基層醫院篩查肺結核的首選[8]。但是痰涂片特異性強、敏感度低，易發生漏診。本次研究中25例肺結核患者僅檢出15例，占60%，而據大量的研究表明肺結核患者于痰涂片陽性可達50%～70%[9]。PCR檢驗迅速、敏感度高于痰涂片，此次研究25例肺結核PCR陽性20例，占80%，致PCR漏診的主要原因為痰標本不合格等。PPD全稱結核菌素純蛋白衍生物，針對結核菌素敏感度較高，本次研究中25例檢出21例，檢出率較高，但是值得注意的是PPD顯示陽性者并非肺結核患者，僅表示其攜帶結核菌的幾率較高，本次研究中以炎性腫塊≥5mm為標準，客觀上排除了弱陽性者。

本次研究中運用X線、癥狀、CT檢查等方法篩選出高度疑似者，再進行相關病原菌學檢驗，結果顯示，高度疑似者各項檢驗陽性率高于低度疑似者，確診率高于低度疑似者，由此可見于病原菌學檢驗前，先行輔助診斷，篩查出高度疑似者，可縮短檢驗流程，提高診斷效用[10]。

運用痰涂片、PCR、PPD方法分別診斷不同程度疑似組患者，于高度疑似組中，PPD、PCR診斷效用高于痰涂片法，而于低度疑似組中，PPD、PCR、痰涂片診斷效用差異無統計學意義（P＜0.05）。因此，痰涂片應用于肺結核大規模篩查能夠滿足基本臨床需要，再配合X線、CT等輔助診斷，針對高度疑似者行PCR檢驗或病原菌培養可有效避免漏診與誤診。

參考文獻：

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編輯/許言