牛黃益金片的含量測定

【摘 要】建立反相高效液相色譜法測定牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量。方法：采用奧泰公司 C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），檢測波長為284nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鹽酸黃柏堿在8～80μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。鹽酸黃柏堿平均回收率分別為99.5%。結論：本法簡便、準確，可用于牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量測定。

【關鍵詞】牛黃益金片；含量；測定

牛黃益金片為淺黃色至棕黃色的片。牛黃益金片由黃柏、硼砂、玄明粉、牛黃、薄荷腦、薄荷油組成。牛黃益金片具有清熱利咽，消腫止痛的功效。牛黃益金片常用于急、慢性咽炎。黃柏為蕓香科植物黃皮樹或黃檗的干燥樹皮。《本草圖經》記載：“檗木，黃檗也，今處處有之，以蜀中者為佳。五月六月采皮，去皺粗暴干用。其根名檀桓。”黃柏有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡之功效。黃柏具有降血壓、抗菌、抗炎、抗癌、抗潰瘍、抗氧化、解熱作用、抗痛風、抗病毒等作用[1-5]。黃柏常用于濕熱痢疾、泄瀉、淋濁、帶下、盜汗、癰疽瘡毒、皮膚濕疹等。本文采用高效液相色譜法對牛黃益金片劑中的鹽酸黃柏堿的進行了含量測定。

1.儀器與試藥

1.1儀器

SLGH超深度高精度恒溫槽（南京順流儀器有限公司）；Molchem化工行業用超純水設備（上海摩勒科學儀器有限公司）；MicroSmart高速微量離心機（北京昊諾斯科技有限公司）；CC-100分析型色譜柱溫箱（成都納杰科技有限公司）；RE-3000A旋轉蒸發器（上海嘉鵬科技有限公司）；US6180DH數顯型超聲波清洗器（北京優晟聯合科技有限公司）； SP-756P紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；Smartline 高效液相色譜系統（北京創新通恒科技有限公司）；BSA124S電子分析天平（東莞康潤儀器設備有限公司）。

1.2色譜柱

奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品

鹽酸黃柏堿 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4試劑

甲醇（廣州博氧化工有限公司）、乙腈（廈門潤科化工科技有限公司）、磷酸（廣州太三憶化工有限公司）、十二烷基磺酸鈉（濟南鑫諾化工有限公司）、三乙胺（濟南鑫諾化工有限公司）。

1.5試藥

牛黃益金片劑。

2.測定方法確定

2.1色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[6-7]。流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），檢測波長：284nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：35℃。理論板數按鹽酸黃柏堿峰計算應不得低于3000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸黃柏堿對照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20ug的溶液，即得。

2.3提取方法確定

2.3.1提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了75%甲醇、乙醇、甲醇進行熱回流提取，結果表明甲醇分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇甲醇進行熱回流提取。

2.3.2提取時間的選擇

取供試品適量，用甲醇提取，熱回流提取分別提取30、60、90分鐘，制備供試品溶液，含量結果表明：三種提取時間結果無明顯差異，為保證提取完全并縮短處理時間，采用熱回流提取30分鐘。

2.3.3供試品溶液的制備

取牛黃益金片，研細，精密稱定，加入甲醇60mL，熱回流提取30分鐘，過濾，水浴蒸干，殘渣用5ml流動相溶解，濾過。取續濾液，即得。

2.4專屬性試驗

依照處方取硼砂、玄明粉、牛黃、薄荷腦、薄荷油，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照2.3.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依色譜條件測定，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗

精密稱取鹽酸黃柏堿對照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20ug·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.76%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取鹽酸黃柏堿對照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果表明，鹽酸黃柏堿在8～80μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.7重現性試驗

稱取同一批的牛黃益金片劑樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.85%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的鹽酸黃柏堿對照品，上述方法進行測定，計算回收率，平均回收率分別為99.5%，RSD為0.53%。

2.9樣品穩定性試驗

取同一批牛黃益金片劑樣品，按2.3.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10小時，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的RSD=0.65%。結果表明供試品10小時內穩定。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定牛黃益金片劑三批樣品中鹽酸黃柏堿的含量，結果三批樣品的含量分別為0.17mg/g、0.16mg/g、0.16mg/g。

3.討論

分別考察，乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶30：40），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），甲醇-水-冰醋酸（34∶65∶1）不同比例的流動相，結果以乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用，乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35）為流動相。本實驗表明此方法可用于牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量測定。牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量為每片不低于0.15mg/g。

【參考文獻】

[1]王躍華，徐文俊，何俊蓉，朱劍宏，孫雁霞.川黃柏離體培養及藥用成分的抑菌試驗研究[J].中國中藥雜志，2004（10）.

[2]劉春平，趙淑肖，陳強，南國榮，王鳳榮，四榮聯，王剛生.鹽酸小檗堿抗5種皮膚癬菌實驗觀察[J].臨床皮膚科雜志，2005（01）.

[3]王飛，郭力，楊奎，杜微祥，蒲旭峰.加味三妙膠囊及黃柏對前列腺滲透作用的實驗觀察[J].成都醫藥，2003（01）.

[4]楊澄，朱繼孝，王穎，溫堯林，孔令東.鹽制對黃柏抗痛風作用的影響[J].中國中藥雜志，2005（02）.

[5]郭志堅，郭書好，何康明，劉慧瓊，潘珊珊.黃柏葉中黃酮醇甙含量測定及其抑菌實驗[J].暨南大學學報（自然科學與醫學版），2002（05）.

[6]陳天朝，翟來超.HPLC梯度洗脫測定黃柏中鹽酸小檗堿與鹽酸黃柏堿的含量[J].中醫研究，2011（04）.

[7]張莉，潘超.高效液相色譜法同時測定二妙丸中鹽酸小檗堿和黃柏堿的含量[J].中國新藥雜志，2011（22）.