高效液相色譜法測定福壽膠囊的含量

【摘 要】本文采用高校液相測定了福壽膠囊中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，固定相為：YMCC18色譜柱（4.6*250*5μm），乙腈一水（15：85）為流動相，檢測波長為322nm；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在4～32μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率為99.3%。本方法是一種簡便、準(zhǔn)確，可用于福壽膠囊含量的測定。

【關(guān)鍵詞】福壽膠囊；含量；測定

福壽膠囊為膠囊劑，內(nèi)容物為深褐色的粉末；味苦、微澀。福壽膠囊由巴戟天（去木心）、何首烏（制）、枸杞子、絞股蘭、玫瑰茄、余甘子、靈芝（切小塊）、黑豆組成。福壽膠囊具有滋補肝腎，調(diào)養(yǎng)臟腑，益氣養(yǎng)血，扶正固本的功效。福壽膠囊具有改善視力、改善性機能狀態(tài)的作用。福壽膠囊常用于改善中老年人的疲倦乏力、失眠多夢、畏寒肢冷等臨床癥狀。何首烏（制）具有補益精血的功效。何首烏常用于血虛頭昏目眩、失眠、須發(fā)早白、腸燥便秘、風(fēng)疹瘙癢、痔瘡等[1-4]。《藥品化義》記載：“益肝，斂血，滋陰。治腰膝軟弱，筋骨酸痛，截虛瘧，止腎瀉，除崩漏。”二苯乙烯苷具有抗氧化、抗腫瘤、降低膽固醇、清除自由基、抑制動脈粥樣狀硬化等作用[5-10]。本文用高效液相法對福壽膠囊中的2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的進行了含量測定。

1.儀器與試藥

QTR3120基本加熱型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）；JA1003N電子精密天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；EPED-RO-EDI超純水機（南京易普易達科技發(fā)展有限公司）； R-1050大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；UWB-6恒溫水浴箱（北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；HCT-360液相色譜儀柱溫箱（南京科捷分析儀器有限公司）。鹽酸（蘭州藍洋石化有限公司）、乙醚（深圳三原化工有限公司）、甲醇（河南省新鄉(xiāng)市中原有機化工有限責(zé)任公司）、冰乙酸（東莞市嘉盈新能源有限公司）、乙腈（蘭州藍洋石化有限公司）、三乙胺（南寧美钖化工有限公司）。

2.含量測定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[9-10]。色譜柱為YMC C18色譜柱（4.6*250*5μm）；乙腈一水（15：85）為流動相；檢測波長為322nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2供試品溶液的制備

取福壽膠囊內(nèi)容物適量，研細，精密稱定，加20毫升氯仿，回流提取30分鐘，過濾，殘渣，加75%甲醇20毫升超聲20分鐘，過濾，水浴蒸干濾液，殘渣加5毫升甲醇溶解，過0.45μm的濾膜，即得。

2.3對照品溶液的制備

精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品約5mg，置50毫升容量瓶中，用甲醇超聲波振蕩溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10毫升，置100毫升容量瓶中，用甲醇超聲波振蕩溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷10μg）。

2.4陰性干擾試驗

按方中比例取巴戟天（去木心）、枸杞子、絞股蘭、玫瑰茄、余甘子、靈芝（切小塊）、黑豆等藥材，按照制備工藝方法制成陰性制劑，按2.3項下方法制成供試品溶液，按色譜條件測定。結(jié)果表明：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷相同保留時間處不存在吸收峰，說明此方法具有較強的專屬性。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為4、8、16、20、24、28、32μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。試驗表明，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品在4～32μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗

精密吸取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液10μL重復(fù)進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.55%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.7重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批福壽膠囊樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測定含量，并計算樣品的RSD值為0.63%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.8穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0，1，2，3，4h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進樣測定，供試品2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積積分值的RSD為0.65%。結(jié)果表明2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.76%。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定福壽膠囊三批樣品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為103μg/g、108μg/g、105μg/g。

3.討論

本實驗還對流動相進行了考察，分別考察乙腈一水（15：85），乙腈-甲醇—水（15：15∶70），甲醇-水（30∶70），甲醇-水-三乙胺（20∶80：0.1），乙腈-甲醇-水 （20∶10：70）不同比例的流動相，結(jié)果以乙腈一水（15：85）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈一水（15：85）為流動相。福壽膠囊原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有性狀、鑒別、溶化性等檢驗項目，沒有含量測定。本實驗對福壽膠囊中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量進行測定，為今后對福壽膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供依據(jù)。本實驗方法是一種簡便、準(zhǔn)確、安全的測定福壽膠囊含量的方法。福壽膠囊中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量為不少于100μg/g。

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