紫外可見分光光度法測定注射用山楂總黃酮中總黃酮的含量

【摘 要】目的 建立測定注射用山楂總黃酮中總黃酮的含量的方法。方法 采用紫外可見分光光度法，檢測波長為500nm，無水蘆丁為對照品。結(jié)果 蘆丁在8.12～48.72μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998（n=6），平均回收率為100.0%，RSD=0.13%（n=6）。結(jié)論 所用方法靈敏、準確、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，可用于注射用山楂總黃酮中總黃酮的含量測定。

【關(guān)鍵詞】注射用山楂總黃酮；總黃酮；紫外可見分光光度法；含量測定

山楂總黃酮即山楂葉總黃酮，是從山楂葉中提取的黃酮類化合物的總稱，目前從山楂總黃酮中分離出的單體有三十多種，有牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷、牡荊素、金絲桃苷、槲皮素等。山楂葉中的黃酮類化合物的藥理作用有很多方面，例如對心、腦血管疾病有確切明顯的療效，山楂總黃酮對心絞痛、冠心病、心律失常、腦供血不足、腦動脈硬化癥、腦血栓、老年性癡呆及各種腦損傷后遺癥可產(chǎn)生積極的預防和治療作用。

1.儀器與試藥

TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；AE240電子天平（瑞士梅特勒公司）；所用試劑均為色譜純。

2.方法與結(jié)果

2.1線性關(guān)系考察

對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品約10.08mg，置50ml容量瓶中，加乙醇適量使溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1ml含無水蘆丁0.2030mg）[1]。

標準曲線的制備 精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，使搖勻放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置20分鐘，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部 附錄VA），在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、測試溶液中對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線。

回歸方程為：y=0.0135x+0.0089 r=0.9998（n=6），表明對照品濃度在8.12～48.72μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，符合含量分析測試要求。

圖1 蘆丁對照品標準曲線

2.2顯色后測試溶液穩(wěn)定性試驗

取顯色后的對照品測試溶液及供試品測試溶液，在60分鐘內(nèi)于500 nm波長處進行連續(xù)掃描，評價顯色后測試溶液的穩(wěn)定性。

對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品約10.26mg，置50ml容量瓶中，加乙醇適量使溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1 ml含無水蘆丁0.2052mg）。

供試品溶液的制備：取注射用山楂總黃酮0.1512g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，放置3小時以上，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

試驗方法：精密量取上述對照品溶液及供試品溶液各2ml，分別置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，使搖勻放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄VA），在500nm的波長處分別取顯色后0、5、10、15、20、25、30、40、50、60分鐘的測試溶液測定吸光度。

結(jié)論：對照品溶液及供試品溶液顯色后的測試溶液在20分鐘后達到較穩(wěn)定狀態(tài)，在顯色后20～60分鐘內(nèi)穩(wěn)定性良好，符合含量分析測試要求。因此，確定本含量測定方法顯色時間為20分鐘。

2.3重復性試驗

供試品溶液的制備：取注射用山楂總黃酮0.1522g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，放置3小時以上，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

結(jié)論：該含量測定方法的重復性良好，符合含量分析測試要求。

2.4供試品溶液穩(wěn)定性試驗

供試品溶液的制備：取注射用山楂總黃酮0.1530g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，放置3小時以上，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

試驗方法：取供試品溶液，室溫、密閉放置，于12小時內(nèi)測定，評價供試品溶液的穩(wěn)定性。分別于0、3、6、9、12小時取供試品溶液2ml，置25ml容量瓶中，照總黃酮含量測定方法進行測定，計算RSD值。

結(jié)論：供試品溶液置室溫、密閉條件下放置12小時，穩(wěn)定性較好，符合含量分析測試要求。

2.5加樣回收試驗

對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品約10.15mg，置50ml容量瓶中，加乙醇適量使溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1ml含無水蘆丁0.2030mg）。

供試品溶液的制備：取注射用山楂總黃酮0.1501g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，放置3小時以上，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，取供試品溶液，照總黃酮含量測定方法進行測定，注射用山楂總黃酮成品總黃酮含量為90.7mg/支（顯色后供試品溶液總黃酮含量為34.8μg/ml）。

試驗方法：精密量取6份供試品溶液各6ml，分別加入對照品溶液0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml，照總黃酮含量測定方法進行測定，計算RSD值。

2.7樣品測定

供試品溶液的制備 分別取10批注射用山楂總黃酮0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，搖勻，超聲處理5分鐘，放置3小時以上，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

試驗方法：取供試品溶液，照總黃酮含量測定方法進行測定。

3.討論

采用紫外可見分光光度法建立了總黃酮含量測定的方法，經(jīng)方法學研究證實，該方法靈敏、準確、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，可用于注射用山楂總黃酮中總黃酮的含量測定。 [科]

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2010：30.