土鱉蟲酶解物鎮痛作用的研究*

丁志軍 張后富 羅美蘭#

（1江西省皮膚病專科醫院藥劑科 南昌330001；2江西省中醫藥研究院 南昌330046）

土鱉蟲（Eupolyphaga sinensis Walker）為鱉蠊科昆蟲地鱉雌蟲的干燥體，主產于湖南、湖北和安徽等地，是我國傳統的名貴藥材，藥用歷史悠久，應用范圍廣泛，具有破血逐瘀，續筋接骨的功效。本品在我院臨床上以土鱉蟲打粉用溫開水泡服用于治療帶狀皰疹（蛇串瘡）、水痘、單純性皰疹（熱瘡）及帶狀皰疹的后遺神經痛等疾病，療效確切。依據土鱉蟲為昆蟲類中藥，其蛋白質經口服進入胃可被胃蛋白酶酶解為多肽，以及多肽的良好水溶性，我們制備了土鱉蟲酶解提取物樣品，送軍事醫學科學院毒物藥物研究所進行了鎮痛活性的研究，為將其進一步開發成新藥提供試驗依據。

1 材料

1.1 動物 KM種小鼠，SPF級，雌雄兼用，體質量（20±2）g；SD大鼠，SPF級，雌雄兼用，體質量（200±20）g，均由軍事醫學科學院試驗動物中心提供，實驗設施合格證號為SCXK-（軍）2007-004，總后衛生部。

1.2 藥品與試劑 土鱉蟲，雌性，購自安徽省亳州市中成藥公司。胃蛋白酶（國藥集團化學試劑有限公司產品，批號F20061108）；碳酸氫鈉（上海虹光化工廠有限公司）；嗎啡（青海制藥廠有限公司）；阿司匹林（南京制藥廠有限公司）；戊巴比妥鈉（上海新亞藥業有限公司）；加巴噴丁（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司）。

1.3 儀器 萬能粉碎機（江陰市康和機械制造有限公司）；離心機（江蘇華大離心機股份有限公司）；BS224S電子天平（萬分之一）（德國SARTORIUS）。

2 方法與結果

2.1 酶解提取物樣品的制備 土鱉蟲蟲體經過萬能粉碎機粉碎，過40目篩，稱取80 g粉碎后的粉末，混懸于1.5 L純化水中，加入1.5 L模擬胃液（取3.0 g NaCl、10.5 mL濃鹽酸，加入約1.2 L純化水中攪勻后，繼續加入4.8 g胃蛋白酶，加純化水定容至1.5 L，攪勻，即得。），37℃振蕩培養（200 r/min）4 h，抽濾，固體NaHCO3調pH值至7.0左右，5 000 r/min離心15 min，取上清液，經膜過濾器濃縮至約600 mL，微波干燥（50 ℃、-0.07 MPa），干膏產率約為25%，干膏粉代號為XCAV706-B-0。

2.2 對醋酸所致小鼠扭體模型的影響[1]取KM種小鼠80只，隨機分為空白對照組、嗎啡陽性對照組、阿司匹林陽性對照組、土鱉蟲酶解提取物超高、高、中、低劑量組共7組，每組10只。土鱉蟲酶解提取物超高、高、中、低劑量組分別灌胃給藥160 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg，陽性對照組分別皮下注射嗎啡2.5 mg/kg、腹腔注射阿司匹林150 mg/kg，空白對照組給口服同體積生理鹽水，給藥30 min后再給小鼠腹腔注射0.6%醋酸（0.4 mL/20 g體重），致使小鼠產生“扭體”反應；注射醋酸5min后，記錄15min內小鼠的“扭體”次數，計算各組小鼠的扭體抑制率，并與鹽水對照組進行比較。結果見表1。扭體抑制率=（對照組平均扭體次數-用藥組平均扭體次數）/對照組平均扭體次數×100%。

表1 土鱉粉酶解提取物對醋酸所致小鼠扭體的影響 （±S）

表1 土鱉粉酶解提取物對醋酸所致小鼠扭體的影響 （±S）

注：與空白對照組比較，＊P＜0.01，土鱉蟲酶解提取物超高、高、中劑量組能顯著降低醋酸所致小鼠扭體反應次數（P＜0.01），并與劑量呈一定的依賴關系。

藥物 n 劑量（mg/kg） 扭體次數（次） 抑制率（%）空白對照組Morphine（嗎啡）Aspirin（阿司匹林）XCAV706-B-0（低）XCAV706-B-0（中）XCAV706-B-0（高）XCAV706-B-0（超高）10 10 10 10 10 10 10 2.5（sc）150（ip）10（op）20（op）40（op）160（op）49.3±10.9 0.0＊0.5±1.3 40.1±13.6 38.9±12.5 32.9±10.3＊22.8±10.1＊100 99 18.7 21.1 33.3 53.8

2.3 對坐骨神經慢性壓迫性神經病理性疼痛模型的影響

2.3.1 模型的建立 取SD大鼠40只，腹腔注射戊巴比妥鈉55 mg/kg（ip）麻醉，在左后側大腿中段分離坐骨神經。在坐骨神經即將分叉的前段，用無菌玻璃鉤將坐骨神經與周圍組織分離，用無菌鉻腸線（4號，直徑0.15 mm）結扎4個環，每個環間距1～2 mm，局部撒青霉素鈉消毒，分別縫合肌肉組織與皮膚，置于鋪有軟木屑的籠中。假手術組只暴露坐骨神經，不進行結扎，其余處理同神經結扎組。在術后14 d，測定CCI大鼠壓力痛閾值，篩選出疼痛癥狀的大鼠。測定基礎痛閾，淘汰基礎痛閾大于8 g或小于0.6 g的大鼠（正常痛閾15 g）。

2.3.2 分組及給藥 根據基礎痛閾將大鼠隨機均分為加巴噴丁對照組、土鱉蟲酶解提取物超高、高劑量組共3組。土鱉蟲酶解提取物超高、高劑量組分別灌胃給藥160 mg/kg、40 mg/kg（相當于臨床用量的8倍、2倍），加巴噴丁對照組灌胃給藥60 mg/kg，測定給藥后 0.5 h、1 h、2 h、4 h，8 h 的壓力痛閾值。結果見表2。

表2 土鱉蟲酶解提取物對CCI大鼠痛覺的影響 （±S） g

表2 土鱉蟲酶解提取物對CCI大鼠痛覺的影響 （±S） g

注：與給藥前比較，＊P＜0.01，土鱉蟲酶解提取物超高、高劑量組能顯著提高大鼠壓力痛閾。

藥物(mg/kg) n 基礎壓力痛閾 給藥后機械壓力痛閾0.5 h 1 h 2 h 4 h 8 h加巴噴丁（60）XCAV706-B-0（40）XCAV706-B-0（160）888 3.83±1.47 3.99±1.52 4.00±1.66 17.10±3.56＊ 21.18±5.39＊ 17.70±6.63＊ 16.51±6.64＊ 15.13±6.61＊7.34±3.58＊ 10.87±3.28＊ 10.20±4.59＊ 9.81±2.40＊ 11.34±5.38＊11.19±5.98＊ 15.62±6.41＊ 16.0±4.56＊ 11.67±7.01＊ 12.14±6.54＊

2.3.3 壓力痛閾測定 將大鼠置于金屬籠中，用不同克重的纖維絲（Von Frey Hair）刺激其足底足心部位，持續刺激5 s，每次刺激間隔5 s，找到10次刺激中引起4次到6次大鼠抬足反應的纖維絲，記錄其克重，此克重即為壓力痛閾值（單位：g）。在某一克重的毛刷無反應，而另一克重的毛刷達到最大抬足次數，則取兩者的平均值。

3 討論

雖然目前有許多止痛藥物可用于鎮痛，如阿片類藥物，非甾體類抗炎藥[2]，但這些藥物并不能治愈疼痛，且易產生耐受性。所以鎮痛藥物的研發一直是熱點，開發出鎮痛效果好、無成癮性的新型鎮痛藥變得日益重要。本研究采用腹腔注射醋酸建立動物扭體模型，采用無菌鉻腸線結扎制備坐骨神經慢性壓迫性神經病理性疼痛模型，對土鱉蟲酶解提取物進行了鎮痛作用的實驗研究，其結果顯示，土鱉蟲酶解提取物對兩種疼痛模型均有顯著鎮痛作用，且呈明顯量效關系。此研究為土鱉蟲酶解提取物臨床治療疼痛提供了實驗依據，但關于其藥理作用機制可能是多方面的，尚有待于進一步探討。

[1]范文昌，梅全喜，高玉橋.12種廣東地產清熱解毒藥的鎮痛作用實驗研究[J].今日藥學，2010，20(2):12-15

[2]Holtman JR，Dwoskin LP，Dowell C，et al.The novel small molecule α9α10 nicotinic acetylcholine receptor antagonist ZZ-204G is analgesic[J].Eur J Pharmacol，2011，670(2-3):500-508