Survivin、VEGF 基因在非小細胞肺癌中的表達

詹勤元，何陸英，劉清霞，蔡 云

（江西省腫瘤醫院內二科，南昌 330029）

肺癌是我國發病率最高的惡性腫瘤，占惡性腫瘤死亡的第一位，其中70%～80%為非小細胞肺癌。Survivin 是新近發現的功能最強的凋亡抑制蛋白，它在正常分化組織中幾乎不表達，而在人類各種腫瘤組織中均特異性表達；VEGF 是作用于血管內皮細胞，促進血管生成，特異性最高、功能最強的調控因子。Survivin 不僅抑制細胞的凋亡，而且參與血管的生成，腫瘤血管形成是腫瘤生長、轉移的基礎。本研究通過檢測Survivin、VEGF 基因在非小細胞肺癌中的表達情況，探討Survivin、VEGF 基因陽性表達與肺癌臨床病理特征的關系，以及二者在肺癌組織中表達的相關性，為今后肺癌的診斷、治療及預后判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 病例資料

選擇2009 年6 月至2010 年6 月江西省腫瘤醫院收治的非小細胞肺癌患者40 例，男20 例，女20 例，年齡20～75 歲，平均58 歲；其中鱗癌15 例，腺癌15 例，其他類型（如大細胞癌）10 例；TNM 分期：I 期16 例，Ⅱ期14 例，Ⅲ期10 例。所有患者術前均未行放化療。40 例患者經隨訪，目前均存活；I期16 例患者一般情況良好，未出現轉移或復發，Ⅱ期14 例中有10 例、Ⅲ期10 例中有8 例出現不同程度的轉移或復發，經化療和（或）放療后病情均得到控制。

1.2 標本采集與分組

40 例患者均在本院胸外科行手術治療，將手術切除的肺癌組織標本作為研究組，手術切除的癌旁正常肺組織標本作為對照組。

1.3 免疫組織化學檢測

鼠抗人Survivin、VEGF 基因檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，檢測過程中嚴格按照試劑盒中工作液所要求的標準來進行。采用SP 法染色:標本石蠟包埋，做5 μm 厚切片，常規脫蠟、水化，行抗原修復，血清封閉；一抗4 ℃孵育過夜，二抗室溫孵育20 min，鏈霉卵白素-過氧化酶室溫孵育30 min，DAB 顯色5～10 min，蘇木精復染后脫水、透明、封片，光鏡下觀察。同時用已知的陽性切片在同條件下染色作為陽性對照，用PBS 代替一抗作為空白對照。

1.4 結果判定標準

陽性表達為胞漿或胞核出現棕黃色，根據細胞著色深淺判定表達強度。Survivin 基因表達強度：細胞不著色為陰性（-），淡黃色為弱陽性（+），棕黃色為陽性（?），深棕黃色為強陽性（?）。VECF 基因表達強度按文獻［1］標準分為4 級：0 級為陰性，1 級為弱陽性，2 級為陽性，3 級為強陽性。

1.5 統計學方法

使用SPSS13.0 統計軟件。計數資料比較及均Survivin、VEGF 基因在肺癌組織中表達的相關性采用卡方檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

研究組Survivin 基因表達陽性率為72.5%（29/40），VEGF 基因表達陽性率為70.0%（28/40）；對照組Survivin 和VEGF 基因均無陽性表達，2 組Survivin、VEGF 基因陽性表達率比較差異均有統計學意義（P＜0.01）。研究組Survivin 基因的表達主要位于癌細胞的細胞漿和（或）細胞核，陽性細胞內見棕褐色；VEGF 基因的表達主要位于細胞漿，極少位于細胞核。研究組Survivin、VEGF 基因陽性表達與肺癌臨床病理特征的關系比較見表1。在肺癌組織中Survivin、VEGF 基因表達呈正相關（χ2=8.5，P＜0.01），見表2。

表1 研究組survivin、VEGF 基因陽性表達與肺癌臨床病理特征的關系

表3 在肺癌組織中Survivin、VEGF 基因表達的相關性分析 例

3 討論

Survivin 基因蛋白是作用最強的凋亡抑制因子，可發揮多種生物學功能，如通過抑制凋亡，促進細胞增殖和轉化，參與腫瘤的耐藥機制等；該基因表達于胚胎和發育的胎兒組織，在終末分化的成人組織中不表達（胸腺除外），但在人類大多數的腫瘤組織和轉化細胞中卻有大量表達。Survivin 基因通過抑制凋亡通路下游的caspase3 和7 的活性發揮抗凋亡作用，并作用于細胞周期的G2/M 期，與紡錘體的微管蛋白特異性結合維護有絲分裂的正常進行及細胞的分裂增殖、生長分化有關。VEGF 是目前已知的作用最強，特異性最高的促血管生長因子，它可發揮多種生物學功能，如促進血管內皮細胞增殖、增加血管通透性、促進血管支持物的生成、抑制腫瘤細胞凋亡等；在腫瘤的生長和轉移過程中有重要作用，在很多實體腫瘤中VEGF 具有重要的預后價值，其表達多位于腫瘤周邊及腫瘤向周圍浸潤區域。VEGF 以旁分泌和自分泌的方式作用于血管內皮細胞，與血管內皮細胞上的受體結合，引發一系列信號轉導，刺激內皮細胞分化和血管生成。

國內外學者對Survivin、VEGF 基因在腫瘤組織中的表達進行了大量研究，研究［2-8］表明，Survivin、VEGF 基因在多種腫瘤中均有表達，提示它的表達與腫瘤的發生、發展、預后均有密切關系。董德瓊等［2］的研究表明，Survivin 基因表達預示著腫瘤有較高的侵襲性和不良預后；陶琳等［3-4］的報道顯示，在非小細胞肺癌中Survivin 陽性表達率越高，細胞分化程度越低，抑制細胞凋亡的作用越強，腫瘤細胞的浸 潤性越強，預后越差；Belyanskaya 等［5］的研究表明，Survivin 基因參與腫瘤細胞的耐藥機制，它與腫瘤預后緊密相關；王玲等［6］報道顯示，VEGF 基因在非小細胞肺癌中的陽性率與患者的年齡、性別、病理組織學無關，而與TNM 分期有關，分期越晚其陽性率越高，此外VEGF 基因還可促進非小細胞肺癌中Survivin 的表達；王萌等［7］研究表明，Survivin、VEGF基因的表達與NSCLC 的臨床病理學特征密切相關，二者聯合檢測有助于肺癌的診斷及惡性程度與預后的評估；呂喜英等［8］研究表明，Survivin、VEGF 基因在NSCLC 組織中的表達呈正相關，二者聯合檢測對患者化療療效、預后的判斷具有重要意義。

本研究結果顯示：Survivin、VEGF 基因在肺癌組織中的陽性表達率均顯著高于其在癌旁正常組織中的表達（P＜0.01），二者在肺癌組織中的表達呈顯著正相關（χ2=8.5，P＜0.01）；Survivin、VEGF 基因表達與非小細胞肺癌的病理類型、年齡、性別均無明顯關系，而與細胞分化程度、TNM 分期有一定關聯，患者TNM 分期越晚、細胞分化程度越低，Survivin、VEGF 基因表達越高，與Sarela 等［9］報道相符。

綜上所述，Survivin 和VEGF 基因可作為一種腫瘤的特異生成、抑制異性生物學標記物，，二者的聯合檢測可為肺癌的診斷和靶向治療、預后的判斷等提供新的依據。

［1］Vlom M，Koomagi R，Mattrenj J.Progpostic value of vascular endothelial growth factor and its receptor Flt-1 in squamous cell lung cancer［J］.Int J Cancer，1997，74（1）:64-68.

［2］董德瓊，薛東鷹，楊渝浩.Survivin 蛋白在肺腺癌中表達及臨床意義［J］.國際呼吸雜志，2006，26（2）：92-94.

［3］陶琳，姚峰，李華，等.Survivin 基因表達與非小細胞肺癌發生發展的關系［J］.中國肺癌雜志，2003，6（4）：275-277.

［4］王玲，李俠，薛玉文，等.非小細胞肺癌Survivin、VEGF基因表達及相互關系的探討［J］.中國腫瘤臨床，2004，31（22）：1302-1304.

［5］Belyanskaya L L，Hopkins Donaldson S，Kurtz S，et al.Cisplatin activates AKt in small cell lung cancer cells and attenuates apoptosis by surviving upregulation［J］.Int J Cancer，2005，117（5）:755-763.

［6］王玲，李霞，李玉，等.Survivin、VEGF 基因的表達及微血管密度與非小細胞臨床病理特征的關系［J］.癌癥，2005，24（7）：823-826.

［7］王萌，陳公琰，藺鐵，等.Survivin、VEGF 在非小細胞肺癌中表達及相關性研究［J］.腫瘤防治研究，2006，33（1）：1302-1304.

［8］呂喜英，李青山，張秀琴，等.Survivin 在非小細胞肺癌中表達及其與血管內皮生長因子相關性研究［J］.腫瘤研究與臨床，2007，19（8）：302-304.

［9］Sarela A I，Macadam R C，Fannery S M，et al.Expression of the antniapoptosis gene，survivin，predicts death from recurrent colorectal carcinoma［J］.Gut，2000，46（5）:645-650.