蘭州大尾羊重復超數排卵效果分析

文│朱芳賢 孟飛 許海濤 陸健 趙俊金 張俊杰 劉丑生（全國畜牧總站）

冷凍胚胎保存動物遺傳資源與其他保存技術相比具有突出的優越性，胚胎保存了品種的全部基因，若有數量充足的胚胎，可保存與現有物種遺傳多樣性一致的遺傳資源。細胞可以在超低溫條件下長期保存，即使活物消失，只要存在同種物種，通過胚胎移植和核移植技術就可恢復這些遺傳資源。因此，在保護動物遺傳資源，尤其是挽救瀕危動物方面，冷凍胚胎技術發揮著越來越重要的作用。

大尾羊在我國廣泛分布，具有生長快、早熟、產肉力高、肉質細嫩等優點。但由于引入品種的代替以及雜交改良，現在有些品種已面臨瀕危的局面，保種工作迫在眉睫。通過對蘭州大尾羊超數排卵效果的分析，為建立其他大尾羊合理、有效的超數排卵方案提供依據。

一、材料與方法

1.時間、地點和品種。2010年8月引入到北京順義飼養，2010年10月第一次超排，2010年12月第二次超排，2011年4月第三次超排。第一次超排時供體母羊平均年齡2.5歲、平均體重43千克。

2.超數排卵方案。在發情周期的任意一天，陰道埋置新西蘭產陰道栓（CIDR），放栓當天記為“第0天”，第9～12天每日早晚分2次（間隔時間相等）等量注射新西蘭產ovagen促卵泡素（FSH），即第9天每次2.0毫升，第10天每次1.6毫升，第11天每次1.4毫升，第12天每次1.0毫升，每只注射總量為12毫升（10.9毫克）。第6次注射FSH的同時注射氯前列烯醇（PG）0.2毫克；在第7次注射FSH時取掉CIDR；第8次注射FSH前試情，發情者不在注射FSH，注射促排卵素3號19毫克，沒有發情的注射FSH。第13天試情，發情者也注射促排卵3號19毫克。

3.配種方法。發情后12小時進行第一次配種，第二次配種在第一次后8～12小時。采用人工輔助本交、人工授精和子宮角輸精方法。

4.胚胎采集。發情日為0天，第7天用手術法暴露子宮和子宮—輸卵管接合部，用國產8號導尿管進行子宮角沖胚。胚胎鑒定級別執行《畜禽細胞與胚胎冷凍保種技術規范》和《牛羊胚胎質量檢測技術規程》。

5.統計方法。采用SPSS19.0對各組數據進行方差分析和多重比較，結果以（平均值±標準差）表示。

二、結果及分析

1.重復超排效果比較（表1）。

如表1所示，3次超排共118只次，只均回收卵數、A級胚胎分別為7.42、5.00枚；3次重復超排只均回收卵數分別為7.87、6.68、7.71枚，差異不顯著（P＞0.05）；3次重復超排只均A級胚胎分別為6.46、4.05、4.10枚，第1次明顯高于后兩次，差異顯著（P＜0.05），后兩次沒有差異（P＞0.05）；3次重復超排只均未受精卵數分別為0.48、1.27、2.81枚，第1次低于第3次，并且差異顯著（P＜0.05），前兩次沒有差異（P＞0.05），后兩次也沒有差異（P＞0.05）。這個結果和沖胚過程中看到的供體母羊生殖器官粘連情況相吻合，隨著重復超排次數的增加發生粘連的羊增多，粘連程度也增重，造成卵子受精率降低及胚胎發育差。結果說明重復超數排卵對可用胚胎率、卵子受精率影響較大，與張果平等、李雪松等結果一致。

第2次超排只均回收卵數、A級胚胎低于第3次，可能原因是間隔時間短，供體羊還沒有得到充分恢復。第2次和第1次間隔2個月，第3次和第1次間隔4個月。

2.不同年齡母羊的超排效果比較（表2）。

如表2所示，3～4歲只均黃體數、只均回收卵數、只均A級胚胎數分別為12.33、9.00、8.06枚，高于1.5～2.5歲的10.40、7.93、5.73枚，但差異不顯著，說明蘭州大尾羊1.5歲后就可以有好的超數排卵效果。

三、討論

1.嚴格要求手術及術后護理。通過對重復超數排卵效果分析，建議在羊的超數排卵處理和采胚過程中，對手術以及手術后護理的要求要非常嚴格，避免造成子宮、輸卵管粘連。另外，重復超數排卵的間隔時間要3個月以上，使得供體羊得到充分恢復，避免了短時間內受到連續頻繁的刺激而影響超數排卵效果。

2.供體羊的選擇。資料表明，綿羊一般到3～4歲以后排卵率達到最高峰。7歲以后產羔率開始下降，所以，選擇供體羊時，經產母羊為首選。從理論上分析，初情期或初配母羊無生殖史，生殖系統疾病少，不育癥比例低，但作為供體不合適。因為育成羊發情特征不明顯，而且生理狀況不穩定，給移植帶來了困難。所以，選擇適合年齡的供體母羊可以提高超數排卵效果，節約成本。

表1 重復超排效果比較

表2 不同年齡母羊的超排效果比較

3.受精率低的原因。超數排卵供體羊的受精率低是制約胚胎移植技術向產業化發展的一個重要因素。除了手術原因，一方面的原因是不合理的激素劑量使卵細胞非正常發育，影響了排卵后的卵子運動和受精，另一方面原因是外源激素擾亂了輸卵管及子宮的內部環境，影響了卵子和精子的結合。另外還有與配公羊的精液質量、品質、輸精技術的熟練程度等，都是影響超排后所得卵子受精率的重要因素。

4.配種方法。本次試驗中都是采用本交方法配種，雖然受精率很高，但大尾羊尾部肥大，自然交配需要人工輔助，不易操作，要求輔助人員有一定的技術和體力，公羊也要有經驗，此次試驗中就有三分之一的公羊沒有經驗而失去交配機會。

本交、子宮頸口輸精法、腹腔鏡輸精法各有其優缺點。一般情況下本交及子宮頸口輸精法供體受精率較低，但對供體損傷小，有利于供體重復利用并降低術后對供體繁殖力的影響。腹腔鏡法受精率高，但會對供體造成一種刺激及損傷，輸精后不久即進行手術法沖卵，連續刺激對供體重復利用及術后繁殖力也有一定負面影響。因此，哪種配種方式更加經濟、合理，還要視公羊數量及能力、配種人員經驗等情況而定。

5.公羊飼養。長期的實踐證明，在嚴格挑選供體羊的同時，根據供體羊的年齡、體重、營養狀況等個體差異來調整激素劑量的前提下，加強公羊的飼養管理是獲得較好的超排效果的關鍵所在。