肺癌及其癌旁組織、良性病變survivin的表達意義

馬建梅，陳 承，黃 偉(.西安醫學院臨床醫學院，陜西西安 700;.陜西省西安市第一醫院，陜西 西安 7000)

在我國，肺癌年發病率為35/100 000，成為我國的第一大癌癥［1］，危害極大。但目前肺癌的發生發展機制尚不明確，研究表明，腫瘤細胞凋亡抑制可能是肺癌發生、發展的關鍵。survivin是細胞凋亡抑制蛋白家族的成員，主要表達于發育中的胚胎組織，在許多惡性腫瘤組織高表達，但在分化成熟的組織中一般不表達［2］。本研究通過檢測肺癌、癌旁組織、良性病變中survivin表達，探討survivin及其亞細胞定位表達與肺癌發生、發展、預后的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 西安交通大學第二醫院、西安醫學院附屬醫院2008年5月—2011年5月手術獲得的肺癌標本60例，其中年齡52～76歲，平均65.5歲;腫瘤最大徑 2～9 cm，平均7 cm;鱗癌32例，腺癌28例;高分化癌16例，中分化癌25例，低分化癌19例;有淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移31例;腫瘤分期 I期 26例，Ⅱ期21例，III期13例;患者既往均無腫瘤病史，術前均未行包括放、化療在內的各種抗腫瘤治療。癌旁組織15例，均為距離腫瘤≤2 cm的組織，良性病變10例，包括結核病變6例，炎性病變4例，正常肺組織5例。肺癌患者手術后均進行了隨訪，隨訪率100%，隨訪起始時間為手術治療開始日起，觀察終止時間為2012年12月31日。

1.2 主要試劑 兔抗人survivin單克隆抗體，免疫組化 SP試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 survivin的檢測 石蠟包埋組織做4 μm厚切片，脫蠟、水化，微波抗原修復，血清封閉;一抗4℃孵育過夜，生物素標記的二抗室溫孵育30 min，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液30 min，DAB顯色5～10 min，蘇木精復染后脫水、透明、封片，光鏡下觀察。用 PBS代替一抗作為陰性對照，采用試劑盒內提供的陽性切片作為陽性對照。

1.4 結果判定 兩名經驗豐富的病理科醫師閱片，免疫組化染色強度分為弱陽性、中等陽性、強陽性，分別計為1、2、3分;選取5個高倍鏡(×400)視野，每個視野計數100個腫瘤細胞中陽性染色的細胞數，分為五個等級計分:0分，＜5%;1分，5% ～25%;2分，26% ～50%;3分，51% ～ 75%;4分，≥75%;以染色強度分值與陽性細胞數分值的乘積作為每一例的積分，積分為0者為表達陰性，積分≥1者為陽性。survivin陽性染色為胞質或胞核出現棕黃色顆粒。

1.5 統計學處理 采用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，survivin及胞質表達的相關數據采用χ2檢驗，生存率計算采用Kaplan-Meier法，影響生存率單因素分析采用Logrank檢驗，用Cox比例危險度模型作多因素預后分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

survivin陽性染色主要位于細胞質，部分位于胞核，部分胞質和胞核均出現表達。見圖1。

2.1 survivin在肺癌、癌旁組織、良性病變、正常組織的表達 60例肺癌中survivin陽性率為81.6%(49/60)，15例癌旁組織為survivin陽性率為13.3%(2/15)，10例良性病變survivin陽性率為0(0/10)，5例正常組織survivin陽性率為0(0/5)，進行 χ2檢驗，χ2=22.7，P ＜0.05，有統計學差異，故survivin表達在肺癌組織高表達，癌旁組織低表達，良性病變及正常組織不表達。

2.2 survivin胞質表達與肺癌的關系 49例survivin表達陽性的肺癌組織中胞質陽性占69.4%(34/49)，胞核陽性為14.3%(7/49)，胞核胞質均陽性16.3%(8/49)(將胞核表達與胞核胞質均表達認為非單純胞質表達，本文簡稱“陰性”)，胞質表達與肺癌特征的關系見表1。

2.3 survivin胞質表達與肺癌患者生存率的關系 隨訪結果顯示:34例胞質表達陽性的肺癌患者中死亡20例，失訪或存活14例，中位生存時間(26±5.64)個月、生存率41.18%;15例胞質表達陰性的患者中死亡10例，失訪和存活5例，其中位生存時間(13±4.08)個月、生存率33.33%;Kaplan-Meier生存分析顯示肺癌survivin胞質表達陰性患者的生存率低于胞質表達陽性者，log-rank檢驗χ2值=4.47，P=0.0346(P ＜0.05)，差異有統計學意義。見表2，圖2。

2.4 肺癌患者預后的多因素分析 分析肺癌預后的單因素相關因子，結果顯示:其與survivin胞質陽性表達、淋巴結轉移，分期有關，多因素Cox回歸分析結果顯示:survivin胞質表達、淋巴結轉移是反映肺癌預后的獨立危險因素，其危險度分別為18.882、3.546，見表3。

表1 survivin胞質表達與肺癌的關系

表2 Survivin胞質表達在肺癌患者生存時間的比較

表3 肺癌預后多因素Cox分析

3 討論

survivin是1997年由耶魯大學的Ambzosini等用效應蛋白酶受體-1(effector cell report-1，ERP-1)的cDNA在人類基因庫中篩選克隆出的基因。survivin基因定位于不穩定性較高的染色體17q25上，由4個外顯子和3個內含子組成，基因全長15Kb，編碼142個氨基酸的蛋白，表達于細胞周期的G2/M期，定位于細胞有絲分裂的紡錘體。survivin表達常見于胚胎發育過程，與細胞分裂和增殖密切相關，其表達有利于胚胎組織的內穩和分化［3］。survivin在成人組織的表達僅見于胸腺、睪丸、分泌期子宮內膜，但其特異地高表達于惡性腫瘤中，研究發現 34.5%的胃癌，70.7%的乳腺癌，77.8%的膀胱癌，85.5%的非小細胞肺癌中都有不同程度的survivin mRNA表達。可見，survivin與腫瘤關系密切，那么，其與癌旁組織或良性病變有何關系?國外有學者發現胰腺癌細胞中的survivin表達率顯著高于胰腺良性腫瘤;國內方艷秋［4］研究表明survivin在肝癌組織、癌旁組織及正常肝組織表達陽性率分別為76.67%，15%，0，本試驗對比了60例肺癌組織、15例癌旁組織、10例良性病變、5例正常肺組織的survivin表達，發現survivin在肺癌高表達，癌旁組織低表達，良性病變、正常組織未見表達;與相關報道相似，故推測survivin表達與腫瘤的發生有關，可作為一種新的腫瘤標志物反映腫瘤的惡性程度。

近年研究發現survivin具有不同的剪切異構體，不同的剪切異構體有獨特的亞細胞定位和功能。免疫組化染色可以區分細胞中不同分布的survivin，而且只有細胞漿可以和P34結合，P34-cyclin B磷酸化survivin是 survivin發揮抑制凋亡作用所必須的［5］，細胞核內的 survivin由于不能被 P34磷酸化，所以不能發揮凋亡抑制作用，從而可能會誘導凋亡，因此survivin亞細胞定位與腫瘤有密切的關系。李永平［6］報道:在淋巴結轉移陽性的乳腺癌原發灶組織中 survivin細胞漿內表達陽性較細胞核內表達陽性多;相對在未發生淋巴結轉移的原發灶中，survivin主要表達在細胞核，且二者差異有統計學意義，而survivin在乳腺癌亞細胞定位與其它臨床病理特征，如病理分級、雌激素受體表達情況或腫瘤大小，均無顯著關系;本研究發現60例肺癌標本中，34例呈胞質(漿)表達，胞質(漿)表達與年齡、腫瘤大小、分期、分化、組織類型無關，與淋巴結轉移有關，綜上所述，survivin胞質表達陽性與淋巴結轉移密切相關。國內姚紅［7］報道侵襲轉移是導致肺癌患者治療失敗和死亡的主要原因之一，因此，survivin胞質表達和淋巴結轉移的相關性與肺癌預后有關。林輝［8］報道:肝細胞癌中survivin胞質表達陽性組的生存率明顯低于陰性組，且多因素Cox回歸分析提示survivin基因陽性表達是肝癌預后的獨立危險因素。Yao［9］在survivin與胃癌的研究中，發現survivin分布于胞核和胞漿(質)中，而且分析表明，核內表達與較好預后有關，胞漿(質)陽性提示預后差;本試驗檢測survivin主要在胞質(漿)表達，對比胞質(漿)表達陽性與陰性(非單純胞質表達者)者生存率，陰性者生存率低于陽性者，且差異有統計學意義，因此推測survivin胞質(漿)表達與肺癌預后有關，且進行Cox多因素分析顯示:淋巴結轉移和survivin胞質內表達是肺癌預后的獨立危險因素。國內吳志德［10］報道腫瘤標志物可作為治療效果及復發監測的指標之一。survivin及其胞內定位表達與肺癌治療效果的關系將是本試驗進一步深入研究的方向。

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