Twist-2在宮頸癌中的表達(dá)及意義

魏 巖，吳 強(qiáng)

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤外科，江蘇南京 210000;2.安徽省馬鞍山市婦幼保健醫(yī)院婦科，安徽馬鞍山 243011)

宮頸癌是臨床上最常見的婦性惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高居女性惡性腫瘤第二位，次于乳腺癌。我國(guó)每年宮頸癌的發(fā)病人數(shù)約占世界總發(fā)病人數(shù)的1/5，尤為高發(fā)。子宮頸癌的主要病因與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的存在癌基因表達(dá)有密切關(guān)系［1］。據(jù)報(bào)道，早期宮頸癌行手術(shù)治療患者的5年生存率可高達(dá)90%，而中晚期患者的生存預(yù)后均不理想。隨著診療手段的不斷發(fā)展，新柏氏液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)的廣泛運(yùn)用為宮頸癌的早期診斷提供了有力支持，但中晚期患者腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)目前還沒有有效治療手段。最新研究證實(shí)，上皮細(xì)胞間質(zhì)化(EMT)與腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)密切相關(guān)，其中Twist-2作為EMT的主要轉(zhuǎn)錄因子均被證實(shí)與很多惡性腫瘤密切相關(guān)［2－4］，但在宮頸癌領(lǐng)域的研究國(guó)內(nèi)報(bào)道尚不多見。本次試驗(yàn)旨在研究Twist-2在宮頸癌中的表達(dá)情況，并為評(píng)估宮頸癌患者的生存預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機(jī)選取馬鞍山市婦幼保健院及馬鞍山市中心醫(yī)院2006年1月—2008年5月的60例宮頸癌手術(shù)患者，平均年齡(50.7±4.6)歲，基本資料完整，術(shù)前均未行化療治療。同期選取45例CIN病變行宮頸錐切術(shù)或子宮全切術(shù)患者以及20例因子宮肌瘤行全切術(shù)患者作為對(duì)照組。

1.2 方法 應(yīng)用石蠟處理標(biāo)本后切成厚約為3～4 μm，60℃溫箱烤片2 h作為備用。主要試劑:Twist-2抗體為上海群已生物公司的兔抗人單克隆抗體，二抗為美國(guó)Epitomics公司的濃縮羊抗兔IgG多克隆抗體，SP免疫組織化學(xué)試劑盒來(lái)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色所有操作步驟均按試劑盒說(shuō)明書，抗原修復(fù)方式為熱修復(fù)。PBS代替一抗為陰性對(duì)照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 兩位病理醫(yī)師獨(dú)立看片，根據(jù)片中陽(yáng)性細(xì)胞染色占所觀察細(xì)胞數(shù)總數(shù)的百分比及陽(yáng)性細(xì)胞或胞漿的染色強(qiáng)度對(duì)切片進(jìn)行評(píng)分。染色強(qiáng)度:無(wú)色計(jì)為0分，淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)為1分、2分、3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比:小于5%計(jì)為0分;5% ～10%計(jì)為1分;11%～50%計(jì)2分;51% ～75%計(jì)3分;大于75%計(jì)4分。根據(jù)兩項(xiàng)指標(biāo)乘積分成4級(jí):1～3分示陰性(－);4～5分示弱陽(yáng)性(﹢)，6～7分示中陽(yáng)性(﹢﹢)，8分及以上示強(qiáng)陽(yáng)性(﹢﹢﹢)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Twist-2在不同宮頸組織中的表達(dá) 按照免疫組化SP法對(duì)組織進(jìn)行染色，Twist-2主要定位于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中，陽(yáng)性成淡黃色或深褐色表達(dá)。20例正常宮頸組織中僅有1例的Twist-2呈弱陽(yáng)性表達(dá)(1/20)，同期45例CIN組織中Twist-2也類似于正常宮頸組織(7/45)，而60例宮頸癌組織中Twist-2表達(dá)明顯強(qiáng)于以上兩種組織(46/60)，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0.001，圖1、表1)。

2.2 Twist-2表達(dá)與臨床資料的關(guān)系 表2可得出Twist-2的表達(dá)與患者的年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而與患者的臨床分期、分化程度及5年生存存在相關(guān)性(P ＜0.05)。

圖1 Twist-2在不同類型宮頸組織的表達(dá)

表1 Twist-2在不同類型宮頸組織的表達(dá)

3 討論

宮頸癌是我國(guó)女性最常見的惡性腫瘤之一，其中鱗癌占到整個(gè)宮頸癌發(fā)病的80%。以往的研究表明，HPV病毒的感染是宮頸癌發(fā)病的最主要因素，尤其以HPV16、HPV18兩種亞型為著［5］。隨著現(xiàn)代TCT技術(shù)的不斷普及，使得宮頸癌的發(fā)病率得到了有效控制，早期診斷早期治療的宮頸癌患者5年生存率明顯上升，宮頸癌患者主要死于腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，而浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移也是所有腫瘤細(xì)胞共同的生物學(xué)特性。因此尋找出一種可能在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起決定行作用的因子對(duì)宮頸癌患者的診斷及治療都將起著決定性作用。

表2 Twist-2的表達(dá)與宮頸癌患者臨床資料的關(guān)系

上皮細(xì)胞間質(zhì)化(EMT)是指上皮細(xì)胞在特定生理病理情況下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程［6］。最新研究進(jìn)展表面，發(fā)生EMT的上皮細(xì)胞經(jīng)過結(jié)構(gòu)性的改變，極性喪失，細(xì)胞遷移能力和運(yùn)動(dòng)能力加強(qiáng)，同時(shí)細(xì)胞表型由上皮表型發(fā)展呈間質(zhì)表型，因此EMT是惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的最重要因素［7］。EMT的致癌信號(hào)通路可以促進(jìn)上皮性腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，并增強(qiáng)惡性腫瘤原先生物學(xué)特性如抗凋亡，逃避免疫監(jiān)視，化療耐藥等［8－10］。EMT的過程主要由轉(zhuǎn)錄因子Twist家族(Twist-1、Twist-2)、snail家族(ANAL1/snail、ANAL2/snail)以及 ZEB 家族(ZEB1、ZEB2)所控制調(diào)控［11－12］。隨著人們對(duì)EMT分子機(jī)制的了解深入，發(fā)現(xiàn)EMT過程在很多實(shí)體惡性腫瘤中都存在惡性表達(dá)，如乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、腺樣囊性癌，舌鱗癌等［2－4、13－14］。相關(guān)研究表明，作為 Twist家族的重要成員，Twist-2可誘導(dǎo)EMT過程的發(fā)生。但目前對(duì)于Twist-2的研究還處于初步階段，國(guó)內(nèi)外關(guān)于該因子在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)的報(bào)道也很少見［15］。本組試驗(yàn)中我們以Twist-2為研究對(duì)象，測(cè)定其在宮頸癌組織中高表達(dá)(76.6%)，明顯高于宮頸CIN組織(15.6%)及正常宮頸組織(10%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。Twist-2的表達(dá)與宮頸癌患者的年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而與患者的臨床分期、分化程度及5年生存存在相關(guān)性(P ＜0.05)。

腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是臨床上治療的難點(diǎn)，也是導(dǎo)致患者死亡的最重要原因。本次研究我們發(fā)現(xiàn)Twist-2在宮頸癌細(xì)胞中存在高表達(dá)情況，并與患者的臨床分期、腫瘤的分化程度及5年生存直接相關(guān)。Twist-2作為EMT的關(guān)鍵因子在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程中均起到的重要作用，為評(píng)估宮頸癌患者的生存預(yù)后提供理論依據(jù)。

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