MACC1在胃癌中的表達(dá)及其與血管形成的關(guān)系

楊 勇，胡孔旺

(1.安徽省淮北市濉溪縣人民醫(yī)院普外科，安徽淮北 235100;2.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，安徽合肥 230022)

胃癌轉(zhuǎn)移的過(guò)程與腫瘤的血管形成有密切的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(Metastasis associated in colon cancer 1，MACC1)在多種腫瘤中高表達(dá)［1－4］，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展;但MACC1在胃癌組織中的表達(dá)以及其余血管形成的關(guān)系研究還較少。本研究通過(guò)檢測(cè)MACC1在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系及其與MVD之間的關(guān)系，探討其與臨床病理特征之間以及與胃癌血管形成的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院近2007年1月—2013年12月手術(shù)切除標(biāo)本45例，其中男性25例，女性20例，年齡42～75歲，平均年齡52歲，手術(shù)之前未接受過(guò)放療及化療的患者，收集手術(shù)標(biāo)本癌組織，同時(shí)另取距離癌組織邊緣5 cm非腫瘤的癌旁組織石蠟標(biāo)本，10%甲醛固定石蠟包埋，病理切片備用，病歷資料完整，有相關(guān)的組織學(xué)證據(jù)。

1.2 試劑 兔抗人MACC1抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，CD34抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.3 方法 免疫組織化學(xué)檢測(cè):免疫組化染色采用鏈霉素－生物素過(guò)氧化物酶(S-P)染色法，操作方法根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作結(jié)合文獻(xiàn)［5］，采用 DAB顯色。MACC1抗體和CD34抗體使用按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，并用磷酸鹽緩沖液(PBS)設(shè)立陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判讀 MACC1免疫組化結(jié)果為細(xì)胞漿著色，根據(jù)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率進(jìn)行評(píng)分:0分，陰性;1分(+)，陽(yáng)性率30%;2分(++)，陽(yáng)性率30% ～70%;3分(+++)，陽(yáng)性率70%;評(píng)分1 分即為陽(yáng)性［6］。

MVD計(jì)算MVD計(jì)算根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行判讀計(jì)算［6］，先在低倍鏡下找腫瘤組織內(nèi)微血管密度最高的區(qū)域(熱點(diǎn))，然后換×200鏡下，每5個(gè)視野的總數(shù)，再除以5，取平均值，即為該腫瘤的MVD。

2 結(jié)果

2.1 MACC1在胃癌組織中的表達(dá) 胃癌組織中高表達(dá)MACC1，表達(dá)部位主要位于細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒狀物質(zhì)(圖1)。在胃癌組織中MACC1的表達(dá)明顯高于癌旁組織(圖2)(P＜0.05)。在胃癌組織中MACC1的表達(dá)與胃癌的患者的年齡、性別無(wú)關(guān)，而與胃癌的大小、分期、分化、浸潤(rùn)以及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，見(jiàn)表1。

圖1 MACC1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(S-P染色，×400)

圖2 MACC1在癌旁組織中的陰性表達(dá)(S-P染色，×400)

表1 MACC1的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系(n=45)

2.2 CD34的表達(dá)和MVD測(cè)定 免疫組化染色用CD34標(biāo)記胃癌組織血管，其主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞膜，微血管染色呈棕黃色(圖3)。計(jì)算胃癌組織中的微血管的數(shù)，發(fā)現(xiàn)MACC1陽(yáng)性的胃癌組織其微血管密度高于MACC1陰性的胃癌組織(P ＜0.05)，見(jiàn)表2。

圖3 免疫組化顯示胃癌組織中的微血管(S-P染色，×200)

表2 胃癌中MACC1表達(dá)與MVD之間的關(guān)系

3 討論

MACC1基因定位于染色體7P21.1，其可作為結(jié)腸癌和胃癌等腹膜播散的標(biāo)記分子，與腫瘤的轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系;研究發(fā)現(xiàn)MACC1在結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌以及肝癌中都呈高表達(dá)［1－4］，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，在肝癌中其表達(dá)越高，生存期越短［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，MACC1在胃癌組織中表達(dá)高于癌旁組織，且差異明顯，說(shuō)明其參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。

進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MACC1的表達(dá)還與胃癌的大小、分期、分化、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，胃癌腫瘤大、分期晚、分化差、浸潤(rùn)較深以及有淋巴轉(zhuǎn)移者M(jìn)ACC1表達(dá)較多。在很多腫瘤中MACC1的表達(dá)與患者的預(yù)后密切相關(guān)，其是影響預(yù)后的指標(biāo)之一，其單核苷酸的多態(tài)性與大腸癌的發(fā)病早及預(yù)后差相關(guān)［7－10］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)MACC1過(guò)表達(dá)促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、運(yùn)動(dòng)、侵襲和轉(zhuǎn)移［2，11－12］，本研究的也進(jìn)一步證實(shí)在胃癌中MACC1與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

胃癌的發(fā)生發(fā)展與胃癌的血管形成有著密切的聯(lián)系，胃癌體積達(dá)到一定程度就必須有血供才能維持正常的生長(zhǎng)需要，而腫瘤血管的形成有很多因素參與其中，本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中MACC1的表達(dá)與胃癌的微血管密度有著一定的關(guān)系，陽(yáng)性表達(dá)MACC1的胃癌組織中其血管密度較高，說(shuō)明MACC1與胃癌組織的血管形成有著一定的聯(lián)系，胃癌中MACC1的表達(dá)，可能促進(jìn)血管的形成，其可能的機(jī)制可能是與MACC1促進(jìn)腫瘤的血管形成有關(guān)，使得胃癌組織中血管形成較多，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、分化以及轉(zhuǎn)移有關(guān)，其機(jī)制可能與MACC1高表達(dá)促進(jìn)腫瘤MMP-2、MMP-9的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的血管的形成［13－15］，但是其促進(jìn)胃癌血管生成的具體機(jī)制尚不完全明確，需進(jìn)一步的深入研究，總之，MAAC1在胃癌組織中高表達(dá)，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并促進(jìn)胃癌的血管形成。

［1］ 康安定，方 帆，鄧亞平，等.MACC1在結(jié)腸癌中表達(dá)及其臨床病理意義［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，26(13):5087 －5090，5118.

［2］ Shirahata A，F(xiàn)an W，Sakuraba K，et al.MACC 1 as a marker for vascular invasive hepatocellular carcinoma［J］.Anticancer Res，2011，31(3):777 －780.

［3］ 李雙齊，修 娜，劉麗娜.結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1和熱休克蛋白90在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30(11):2411 －2413.

［4］ 黃好亮，史惠蓉，張瑞濤，等.卵巢上皮性癌組織中結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1的表達(dá)及其臨床意義［J］.腫瘤，2011，31(6):522－526.

［5］ 張媛媛，宋育林.NOB1在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(10):1707 －1709.

［6］ 趙 林，張才全，何發(fā)明，等.PDGF-D/PDGFR-β 在胃癌中的表達(dá)及與血管形成的關(guān)系［J］.生命科學(xué)研究，2012，16(6):516－520.

［7］ Stein U，Burock S，Herrmann P，et al.Circulating MACC1 transcripts in colorectal cancer patient plasma predict metastasis and prognosis［J］.PLoS One，2012，7(11):e49249.

［8］ Schmid F，Burock S，Klockmeier K，et al.SNPs in the coding region of the metastasis-inducing gene MACC1 and clinical outcome in colorectal cancer［J］.Mol Cancer，2012，29(11):49.

［9］ Kawamura M，Saigusa S，Toiyama Y，et al.Correlation of MACC1 and MET expression in rectal cancer after neoadjuvant chemoradiotherapy［J］.Anticancer Res，2012，32(4):1527 －1531.

［10］ Lang AH，Geller-Rhomberg S，Winder T，et al.A common variant of the MACC1 gene is significantly associated with overall survival in colorectal cancer patients［J］.BMC Cancer，2012，17(12):20.

［11］ Wang L，Wu Y，Lin L，et al.Metastasis-associated in colon cancer-1 upregulation predicts a poor prognosis of gastric cancer，and promotes tumor cell proliferation and invasion［J］.Int J Cancer，2013，6(133):1419 －1430.

［12］ Ge SH，Wu XJ，Wang XH.et al.Over-expression of MACC1 Associates Better Prognosis of Gastric Cancer Patients［J］.Chin J Cancer Res，2011，232(2):153 －159.

［13］ Gao J，Ding F，Liu Q，et al.Knockdown of MACC1 expression suppressed hepatocellular carcinoma cell migration and invasion and inhibited expression of MMP2 and MMP9［J］.Mol Cell Biochem，2013，376(1/2):21 －32.

［14］ Qu JH，Chang XJ，Lu YY，et al.Overexpression of metastasis-associated in colon cancer 1 predicts a poor outcome of hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2012，18(23):2995 －3003.

［15］ Shirahata A，F(xiàn)an W，Sakuraba K，et al.MACC1 as a marker for vascular invasive hepatocellular carcinoma［J］.Anticancer Res，2011，31(3):777 －780.