HPLC法測定糠酸莫米松乳膏含量

李 蔚，馬 嘉，吳 靜，阮菁菁

(中國人民解放軍第105醫院，安徽合肥 230031)

糠酸莫米松(Mometasone Furoate)是人工合成的糖皮質激素類藥，具有療效強、腎上腺皮質功能抑制低等特點［1］。其外用制劑常用于對糖皮質激素有效的皮膚病，對皮炎(接觸性皮炎、脂溢性皮炎、異位性皮炎、神經性皮炎)，急性、亞急性、慢性濕疹及皮膚瘙癢癥有顯著療效。本品臨床用于濕疹、神經性皮炎、異位性皮炎及皮膚瘙癢癥。外用制劑臨床使用方便、安全，較口服藥起效迅速。此外，乳膏劑為水包油型基質，與皮膚親和力強，透皮速度快，性質溫和，且易于洗滌。臨床用藥順應性良好［2］。本文采用高效液相色譜法測定糠酸莫米松乳膏有關物質及含量［3－4］，可有效控制該制劑產品質量，操作簡便，靈敏度高，專屬性強，結果準確。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(島津LC-10Avp，蘇州島津公司)，C8(5 μm，150 mm × 4.6 mm;Amethyst)，離心機(江蘇金壇市環宇科學儀器廠)，水浴鍋(上海博訊實業有限公司醫療設備廠)，抽濾裝置，AB135-S電子天平，超聲儀，試管、量瓶等玻璃儀器。

甲醇，乙腈，純化水，糠酸莫米松乳膏(上海仙靈保雅制藥有限公司，批號:121103)，糠酸莫米松乳膏工作對照品(批號:120305供含量測定用以99.5%計算)。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Amethyst C8(5 μm，150 mm ×4.6 mm)，流動相:甲醇 － 水(72∶28)，定量環:10 μL，運行時間:16 min，UV 檢測器(檢測波長 254 nm);流速:1.0 mL·min－1;積分參數:滿量程設置為對照溶液色譜峰高的4～5倍。

2.2 內標溶液的制備 取丙酸倍氯米松適量，加乙腈溶解并稀釋制成1 mL中約含0.5 mg的溶液，搖勻，即得。

2.3 對照品溶液制備 取糠酸莫米松對照品14 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。搖勻，精密量取15 mL，精密加入內標溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 供試品溶液制備 取本品適量(約相當于糠酸莫米松2 mg)，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入內標溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴加熱使融化，強力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

計算:含量(%)=供試品溶液主峰面積÷供試品溶液內標峰面積×對照品溶液內標峰面積÷對照品溶液主峰面積×對照稱重(mg)×對照純度÷取樣量(g)×15。

2.5 陰性干擾性試驗 取糠酸莫米松工作對照品2 mg、糠酸莫米松乳膏適量(約相當于糠酸莫米松2 mg)、處方比例的陰性樣品2 g，照含量測定方法測定。結果表明:在此色譜系統下，處方比例的陰性樣品在糠酸莫米松主峰位置上無任何色譜峰，糠酸莫米松原料和糠酸莫米松乳膏在糠酸莫米松主峰位置上一致，表明本法檢測本處方樣品陰性無干擾，見圖1。

圖1 糠酸莫米松乳膏含量方法學驗證——陰性樣品(含內標)

2.6 專屬性試驗 分別精密稱取本品2 g，置具塞試管中，照有關物質檢查方法學中的破壞條件進行破壞試驗后，分別轉移至50 mL具塞錐形瓶中，精密加入內標溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴中加熱使融化，強力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取糠酸莫米松對照品適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.14 mg的溶液，精密量取15 mL，精密加入內標溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，同法測定。結果顯示:各降解產物峰與主峰的分離度均符合規定，表明專屬性良好，見圖2、3。

圖2 糠酸莫米松乳膏含量方法學驗證——未破壞樣品

圖3 糠酸莫米松乳膏含量方法學驗證——強酸破壞樣品

2.7 系統適用性試驗 標準中對照品取樣量為約相當于糠酸莫米松14 mg(定容至100 mL)，因此三個濃度的稱量為 11.2、14、16.8 mg。取糠酸莫米松工作對照品(純度 99.5%)11.2、14、16.8 mg，各 3份，分別置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。精密量取15 mL，精密加入內標溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照含量測定方法進行測定。結果表明系統適用性良好。

2.8 線性及范圍考察 精密稱取糠酸莫米松工作對照品28.52 mg(純度99.5%)，置100 mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。分別精密量取2、3、4、5、6、7、8 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，精密加入內標溶液5 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品溶液。照含量測定項下色譜條件與方法注樣，各濃度注樣2針，取校正因子F平均值。以校正因子為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為F=17.603×C－0.002 6(R=0.999 98，n=7)。結果表明:糠酸莫米松在0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的濃度范圍內，線性良好，縱截距與標示濃度的校正因子的百分比為－0.42%，小于2%，說明曲線通過原點，可采用外標一點法進行計算。

2.9 回收率試驗 標準中供試品取樣量為約相當于糠酸莫米松2 mg，因此回收率加入量為1.6、2、2.4 mg。取糠酸莫米松工作對照品(純度99.5%)1.6、2、2.4 mg，各 3 份，分別置 50 mL 具塞錐形瓶中，再分別加入2 g的糠酸莫米松陰性樣品，精密加入內標溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴中加熱使融化，強力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照含量測定方法進行測定。按測得量與加入量的比值計算回收率，得平均回收率為100.7%，RSD 為1.26%(n=9)。

2.10 重復性試驗 取同批均質樣品連續取樣6份，分別照上述含量測定方法測定每份樣品含量，計算RSD為0.24%(n=6)，重復性良好。結果表明:本法測定糠酸莫米松乳膏含量重復性良好。

2.11 精密度試驗 取重復性項的均質樣品，照含量測定項下的方法連續進樣6次，進行測定。RSD為0.47%(n=6)，兩組測定結果含量差異無顯著性，表明儀器精密度良好。

2.12 穩定性試驗 取供試品溶液與對照品溶液，分別于 0、1、2、4、8、24 h 注樣分析，測定峰面積，RSD為0.12%(n=6)，表明穩定性良好。

2.13 樣品含量測定 精密量取2.2.2項的樣品溶液和2.2.3項的對照品溶液各注入液相色譜儀，按上述選定的色譜條件測定，記錄主峰面積，按內標法計算峰面積，結果見表1。

表1 含量測定方法學驗證——含量

由表1可知，糠酸莫米松注射液的含量在98%～102%之間，符合規定。

3 討論

在糠酸莫米松乳膏含量方法學驗證中，糠酸莫米松乳膏含量專屬性試驗是基于強制降解試驗結果所得圖譜進行判斷的。含量條件使主成分含量加有關物質總雜質達到90%～110%。實驗可以通過調整強制降解試驗的破壞條件使有關物質總雜質達到規定要求。雜質峰與主峰間的分離度應符合要求。若主成分含量加有關物質總雜質達不到90%～110%，可能是由于實驗的色譜條件不符合要求，可以通過PAD掃描，重新確定糠酸莫米松的最大吸收波長。

在糠酸莫米松乳膏含量方法學驗證中，由結果可知本法的專屬性良好，各降解產物峰與主峰的分離度均符合規定，表明在含量測定中，本法的專屬性良好。由糠酸莫米松線性關系考察可知本法測定糠酸莫米松含量在 0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的濃度范圍內，本法的線性良好，回歸方程為F=17.603 ×C －0.002 6(R=0.999 98，n=7)。縱截距與標示濃度響應值比值(B/Y)為 －0.42%小于2%，可采用外標一點法進行計算。由糠酸莫米松乳膏6份樣品含量測定的RSD=0.24%小于1%可知本法的重復性良好。由測得量與加入量的比值計算本法的回收率，RSD=1.26%小于2%表明本法測定糠酸莫米松乳膏含量方法的回收率良好，方法準確度高。由中間精密度試驗中兩組數據相對標準偏差為0.32%，本法中間精密度良好。由糠酸莫米松峰面積與內標溶液主峰面積在24 h內相對標準偏差均小于1.0%，其比值小于1.0%以及三柱耐用性結果可知本色譜系統穩定，且供試品溶液與對照品溶液在24 h內穩定性良好。因而本色譜條件可用于糠酸莫米松乳膏含量的測定。

［1］ 陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學［M］.17版.北京:人民衛生出版社，2011:616.

［2］ 張建中.幾種新的外用糖皮質激素［J］.中國藥物應用與監測，2005，2(5):30 －31.

［3］ 劉 園，吳 燕，張福成.HPLC法同時測定復方痤瘡凝膠中三種藥物的含量［J］.安徽醫藥，2012，16(7):920 －921.

［4］ 劉 亭.一階導數分光光度法測定自制糠酸莫米松微乳的含量［J］.藥學與臨床研究，2010，18(1):86 －87.

［5］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄VD.