馬齒莧水提取物松弛氣管平滑肌作用與β受體的關系

王國玉，王浩宇，王英南

(承德醫學院附屬醫院，河北承德 067000)

馬齒莧是馬齒莧科馬齒莧屬一年生草本植物，分布廣泛［1］，生長迅速，營養豐富，可藥食兩用［2］;對于多種致病菌，如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌等有較強的抑制作用，稱之為“天然抗生素”。《中國藥典》收載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血等作用［3］，對癰腫疔瘡、濕疹、丹毒等也具有治療作用。現代藥理研究表明馬齒莧具有抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖、抗動脈硬化，抗衰老、抗氧化、提高機體免疫力等多種作用［4－6］，且無毒副作用。民間應用馬齒莧治療咳嗽、哮喘有明顯療效，經試驗證明，WEPO具有鎮咳平喘作用，本研究通過評價其對家兔離體氣管平滑肌張力、收縮頻率、收縮幅度的影響，觀察其β受體的關系，探討WEPO的平喘作用機制，為進一步研究及開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 藥物 馬齒莧干燥地上部分，采自河北省承德市。經承德醫學院藥用植物研究室趙春穎副研究員鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標本保存于承德醫學院中藥研究所藥理毒理研究室。

1.2 試劑 普萘洛爾(Propranolol，Pro)，丹陽市藥業有限責任公司生產，批號:20021124。氨茶堿溶液(Aminophylline，Ami)，內蒙古蒙欣藥業有限公司生產，批號:100904。

1.3 實驗儀器 MacLab/4e生理記錄儀，來自澳大利亞;恒溫離體浴槽，來自澳大利亞;張力換能器(Made in Spain by PRNL，S.L:LE 13206)澳大利亞。

1.4 實驗動物 承德種青紫蘭家兔，體重2.0～2.5 kg，來源承德醫學院動物研究所繁育場。

1.5 馬齒莧水提取物(WEPO)的制備 取50 g干燥馬齒莧干燥地上部分，加入8倍量的蒸餾水浸泡3 h，煎煮30 min，過濾。濾渣加適量蒸餾水再煎煮30 min，過濾，合并濾液，減壓濃縮至100 mL，得馬齒莧水提取液(含生藥0.5 g·mL－1)，備用，臨用時用蒸餾水稀釋為適當濃度。

1.6 克—亨溶液的配制 NaCl 6.9 g，KCl 0.35 g，MgSO4·7H2O 0.29g ，KH2PO40.16 g，NaHCO32.1 g，CaCl20.28 g，葡萄糖 2.0 g。加水到 1 L。

1.7 家兔離體氣管環實驗［7－8］

1.7.1 氣管環標本的制備 青紫蘭家兔，雌雄兼用。擊后腦致死，迅速切開頸部腹面正中的皮膚，分離出氣管，從甲狀軟骨下部至氣管下部分叉處剪取全部氣管，放4℃的通有氧氣的克－亨營養液中，仔細剔除氣管周圍結締組織，3個氣管軟骨分為一個氣管環，用細棉線將4個氣管環連接為一組，將穿好的氣管環通過張力換能器與MacLab/4e生理記錄儀鏈接，固定于盛有10 mL克－亨氏液的離體浴槽內，調定恒溫度(38±0.5)℃，通有適量的 O2(95%的 O2，5%CO2)，調節前負荷為1 g，穩定1 h，待基線穩定后，描記正常活動曲線。

1.7.2 分組 將氣管環隨機分為 WEPO 0.625、1.25、2.50 和5.00 g·L－1(終濃度，生藥)組，Pro+WEPO組及Ami組，每組10個氣管環。

1.7.3 給藥 WEPO各劑量組均待氣管環活動基線穩定后，描記藥前正常活動曲線，然后分別加入濃度為 62.5、125、250、500 g·L－1的 WEPO 溶液 0.1 mL，終濃度為分別為0.625、1.25、2.50、5.00 g·L－1，描記藥后氣管活動曲線;Ami組待基線穩定后，描記藥前正常活動曲線后，向營養液中加入Ami組(濃度為3 g·L－1)0.1 mL，終濃度為 0.03 g·L－1;Pro+WEPO組待標本基線平衡、穩定后，描記藥前正常活動曲線后，向營養液中加入濃度為1 g·L－1的Pro溶液0.1 mL，終濃度為0.003 g·L－1，孵育 5 min，向營養液中加入 WEPO(濃度500 g·L－1)0.1 mL，終濃度為5 g·L－1。各組均描記收縮曲線。計算給藥前后曲線的基線，頻率和幅度之差值。

2 結果

2.1 WEPO對離體氣管平滑肌張力的影響 應用WEPO藥后家兔離體氣管平滑肌收縮曲線基線低于藥前，差異具有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。Pro+WEPO組平滑肌收縮曲線基線與藥前比較差異無統計學意義(P＞0.05)，與WEPO組比較差異有統計學意義(P＜0.01)，提示 Pro可明顯拮抗WEPO松弛氣管平滑肌作用，結果見表1。

表1 WEPO對離體氣管平滑肌張力的影響(±s，n=10)

表1 WEPO對離體氣管平滑肌張力的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較 △△P＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1基線/mm差值/mm藥前 藥后0.48 ±0.06 WEPO 1.25 0.46 ±0.07 －0.02±0.01＊＊ 0.48 ±0.04 WEPO 2.5 0.46 ±0.04 －0.04 ±0.02* 0.50 ±0.03 WEPO 5.0 0.47 ±0.06 －0.05±0.01＊＊ 0.52 ±0.04 Pro+WEPO 0.003+5.0 0.49 ±0.02 0.47 ±0.09 0.02 ±0.01△△Ami 30 0.51 ±0.05 －0.04 ±0.01＊＊WEPO 0.625 0.46 ±0.07 －0.02 ±0.01＊＊0.55 ±0.12

2.2 對離體氣管平滑肌活動頻率的影響 應用不同劑量WEPO后家兔離體氣管平滑肌收縮頻率顯著低于藥前，差異有統計學意義(P＜0.05或 P＜0.01);Pro+WEPO組平滑肌收縮頻率藥前比較差異無統計學意義(P＞0.05)，與WEPO組比較，差異有統計學意義(P＜0.01)，提示 Pro可明顯拮抗WEPO松弛氣管平滑肌作用，結果見表2。

表2 WEPO對離體氣管平滑肌收縮頻率的影響(±s，n=10)

表2 WEPO對離體氣管平滑肌收縮頻率的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較 *P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較，△△P ＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1收縮頻率/次·min－1差值/次·min－1藥前 藥后1.16 ±0.31 WEPO 0.625 2.26 ±0.42 2.01 ±0.32 －0.25 ±011 WEPO 1.25 2.34 ±0.39 1.56 ±0.41* －0.78 ±013 WEPO 2.5 2.22 ±0.51 1.38 ±0.41＊＊ －0.84 ±0.15 WEPO 5.0 2.31 ±0.52 1.19 ±0.31＊＊ 1.12 ±0.24 Pro+WEPO 0.003+5.0 2.28 ±0.51 2.32 ±0.45 0.04 ±0.01△△Ami 30 2.26 ±0.48 1.10 ±0.29＊＊

2.3 對離體氣管平滑肌收縮幅度的影響 WEPO各劑量組藥后氣管平滑肌收縮幅度均顯著低于藥前，差異有統計學意義(P＜0.05或 P＜0.01);Pro+WEPO組平滑肌收縮幅度Pro+WEPO組平滑肌收縮曲線基線與藥前比較差異無統計學意義(P＞0.05)，與WEPO組比較差異有統計學意義(P＜0.01)，提示Pro可明顯拮抗 WEPO松弛氣管平滑肌作用，結果見表3。

表3 WEPO對離體氣管平滑肌收縮幅度的影響(±s，n=10)

表3 WEPO對離體氣管平滑肌收縮幅度的影響(±s，n=10)

注:與藥前比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與 WEPO 組比較，△△P ＜0.01。

組別 終濃度/mg·L－1收縮幅度/mm藥前 藥后差值/mm WEPO 0.625 0.31 ±0.07 0.26 ±0.05*0.2 ±0.04 0.17 ±0.05 WEPO 1.25 0.29 ±0.07 0.19 ±0.07* －0.2 ±0.03 WEPO 2.5 0.33 ±0.07 0.17 ±0.05* －0.2 ±0.03 WEPO 5.0 0.32 ±0.07 0.15 ±0.07＊＊ 0.17 ±0.04 Pro+WEPO 0.003+5.0 0.32 ±0.13 0.21 ±0.11 0.11 ±0.03△△Ami 30 0.31 ±0.05 0.11 ±0.05＊＊

3 討論

支氣管哮喘是多種細胞和細胞組分參與、涉及多種炎性介質和細胞因子的慢性非特異性氣道炎癥性疾病［9］。His、Ach、TAX2 和白三烯是慢性氣道炎癥的主要介質，引起支氣管痙攣、黏膜水腫、氣道炎癥和氣道高反應性，屬于Ⅰ型超敏反應［10］。

哮喘發病機制復雜［11］，目前研究免疫炎癥機制是哮喘的本質，細胞免疫、體液免疫參與哮喘的發生發展，氣道高反應性是哮喘發生、發展的另一重要因素，神經機制被認為是哮喘發病的重要環節，臨床表現為反復發作的喘息、氣急、呼吸困難或咳嗽，常在夜間或清晨發作，多數患者可經治療緩解或自行緩解，哮喘被公認為是“頑癥”，至今尚無根治方法［12］。

哮喘治療主要包括擴張支氣管和抗炎兩方面。β2-R激動劑是臨床普遍應用的擴張支氣管藥物之一［13］，通過激動氣道平滑肌上的腎上腺素能受體，增加平滑肌細胞內CAMP的濃度，激活下游的信號通路，使平滑肌松弛，達到治療目的。

本研究采用家兔離體氣管平滑肌實驗，以藥前后離體氣管平滑肌張力、收縮頻率、收縮幅度的變化為指標，結果證實WEPO對家兔離體氣管平滑肌有顯著的松弛作用，β受體阻斷劑Pro可明顯拮抗WEPO對氣管平滑肌的松弛作用，說明WEPO舒張氣管平滑肌作用是通過興奮β受體產生的，至于WEPO中何種成分、通過何種途徑對β受體產生興奮作用待進一步深入研究。

［1］ 王國玉，王浩宇，佟繼銘.馬齒莧的化學成分與藥理作用研究現狀［J］.承德醫學院學報，2012，29(1):82 －85.

［2］ 權美平，郝曉寧.馬齒莧藥用價值及其保健制品的研究進展［J］.保鮮與加工，2012，12(5):44 －47.

［3］ 尹彥杰，鄒曉征，朱 云.馬齒莧的藥理作用再識［J］.中國中醫藥，2011，9(1):84.

［4］ 趙 明，季巧遇，顏 梅，等.馬齒莧降血脂作用的研究進展［J］.江西中醫學院學報，2011，23(5):99 －100.

［5］ 楊 柳，陳承杰，辛海量，等.馬齒莧提取物體外清除自由基活性的研究［J］.藥學服務與研究，2011，11(3):186 －188.

［6］ 趙仁宏，趙心亮，賀圣文，等.馬齒莧脂肪油對動脈粥樣硬化大鼠膽固醇逆向轉運相關基因表達的影響［J］.中國慢性病預防與控制，2013，21(1):12 －14.

［7］ 王海靜，趙 卉，劉宇牛，等.牛磺酸對大鼠離體氣管平滑肌舒張作用及機制的研究［J］.中國現代醫生，2012，50(10):11 －13.

［8］ 周述芝，馬 楠，廖常莉，等.氯胺酮對哮喘大鼠離體氣管平滑肌的舒張作用及機制探討［J］.山東醫藥，2012，52(47):24 －26.

［9］ 岳晨莉，呂韶敏，王 陵.舒利迭50/500聯合塞曲司特治療中、重度支氣管哮喘25例［J］.陜西醫學雜志，2011，40(10):1439－1440.

［10］ 高海玲，王迪生，龍子江，等.補腎平喘方對腎虛哮喘模型大鼠的作用及其機制的實驗初探［J］.安徽醫藥，2013，17(12):2028－2030.

［11］ 龍海燕.孟魯司特納片聯合沙美特羅替卡松粉吸入劑對支氣管哮喘的臨床療效觀察［J］.大家健康，2014，8(4):185.

［12］ 蔡喜萍.中醫藥治療哮喘的實驗研究進展［J］.中醫學報，2013，28(10):1461 －1463.

［13］ 胡 海，葉遠鵬.淺談支氣管哮喘的臨床觀察與藥物治療［J］.醫藥前沿，2012，2(5):333.