ABCC4和CEA在胃癌中的作用

王曉亮 李紹剛 李賽飛 林寒冰 曹斌校 王 軍

奉化市人民醫院，浙江奉化 315500

據Pakin 研究報道，胃癌為高發生率腫瘤，其死亡例數排位世界第二[1]。流行病學顯示胃癌在我國是最常見的惡性腫瘤之一。雖然胃癌的診療技術有了很大的提高，但是多數患者就診時處于晚期，總體預后仍較差。ABCC4(ATP-binding cassette，subfamily C member 4)，是Cole 等研究小細胞肺癌時發現的耐藥基因家族成員[2]。CEA 為癌胚抗原,屬于CEA 基因家族成員。該研究通過檢測胃癌組織標本中的ABCC4、CEA 表達水平，分析其與胃癌臨床病理因素的相關性，以期作為評估治療及預后的標志物，現分析2010年1月—2013年1月間該院收治的100 例胃癌患者的臨床資料，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取在該院收治的胃癌患者100 例。病例特點：男性76例，女性24 例；年齡29～80 歲，平均年齡（61.23±10.4）歲。手術后病理結果：pT2 13 例，pT3 51 例，pT4?36 例；淋巴結pN0 28 例，pN1 21 例，pN2 26 例，pN3 25 例；pTNM 分期：IIA 期7 例，IIB 期23 例，IIIA 期19 例，IIIB 期21 例，V 期8 例；隨訪到2013年7月，隨訪期間死亡20 例。病例納入標準：符合美國癌癥聯合委員會(AJCC )(第7 版)進展（期）胃癌診斷標準。排除標準：術前化療，術前放療，術前行胸片、腹部CT 檢查肺部、肝臟、腹主動脈旁淋巴結等遠處轉移者。

1.2 試劑與方法

1.2.1 標本 所有組織蠟塊均由該院病理科包埋，每例胃癌組織病理切片均由兩位專家確診。胃粘膜組織取自上述100 例標本距癌組織3 cm 以上的癌旁胃粘膜組織。

1.2.2 試劑 ABCC4 單克隆抗體購自美國SantaCruz 公司，CEA單克隆抗體購自福州邁新生物開發公司。

1.2.3 方法 采用免疫組織化SP 法。將標本連續切片，常規脫蠟、水化，經3%的H2O2消化內源性過氧化物酶，高壓抗原修復，一抗(鼠抗人ABCC4、CEA 單克隆抗體)、二抗(生物素標記)作用后，用DAB 顯色，蘇木素復染后脫水透明，常規中性樹膠封固后顯微鏡下觀察。以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 免疫組化結果判定

ABCC4 陽性表達定位于細胞膜或漿，呈現棕黃色或棕褐色顆粒，取5 個高倍視野，每個視野分別計數100 個細胞，計算陽性細胞所占百分率。染色結果根據陽性細胞占比率分為4 個等級，<5%為0 分；6～25%為1 分；26～50%為2 分，51～75%為3 分；≥76%為4 分。按著色程度計分：未著色為0 分；淡黃色為1 分；棕黃色為2 分，棕褐色為3 分，兩種記分所得分值之和：0～1 分為陰性（0）；2 分為弱陽性（+）；3～4 分為中度陽性（++）；≥5 分為強陽性（+++）。

CEA 陽性表達定位與胞漿，呈現棕黃色或棕褐色顆粒，取5個高倍視野，每個視野分別計數100 個細胞，以切片中陽性數大于25%為陽性。

1.4 統計方法

所有數據均經SPSS17.0 軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗。相關性采用Spearman 法分析。

2 實驗結果

2.1 ABCC4 在胃癌組織和癌旁胃粘膜組織中的表達

100 例胃癌組織中ABCC4 陽性表達19 例，陽性表達率為19%；100 例癌旁胃粘膜組織中ABCC4 陽性表達1 例,陽性表達率為1%.ABCC4 在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于胃粘膜組織中的陽性表達率，差異有統計學意義(t=4.263，P=0.039＜0.05)，見圖1，圖2。

圖1 ABCC4 在胃癌癌旁胃粘膜組織的陰性表達

圖2 ABCC4 在胃癌組織的陽性表達

2.2 ABCC4 在胃癌中的表達與臨床病理因素的關系

在100 例胃癌標本中，ABCC4 陽性表達率在T2、T3、T4 分別為0%、17.6%、27.8%，差異無統計學意義(P>0.05)；ABCC4 陽性表達率在N0、N1、N2、N3 分別為17.9%、19.0%、23.1%、16.0%，差異無統計學意義(P>0.05)；ABCC4 陽性表達率在胃低分化腺癌、高分化腺癌中分別為11.3%、27.7%，差異有統計學意義(P<0.05)，ABCC4 陽性表達率在是否復發中分別為17.4%、19.5%，差異無統計學意義(P>0.05)，見圖3，圖4，表1。

圖3 ABCC4 陽性表達率在胃低分化腺癌的陽性表達

圖4 ABCC4 陽性表達率在胃高分化腺癌的陽性表達

2.3 CEA 在胃癌中的表達與臨床病理因素的關系

在100 例胃癌標本中，CEA 陽性表達率在T2、T3、T4 分別為38.5%、33.3%、36.1%，差異無統計學意義(P>0.05)；CEA 陽性表達率在N0、N1、N2、N3 分別為28.6%、42.9%、26.9%、44.0%，差異無統計學意義(P>0.05)；CEA 陽性表達率在胃高分化腺癌、低分化腺癌中分別為23.4%、45.2%，差異有統計學意義(P<0.05)，CEA陽性表達率在是否復發中分別為30.4%、36.4%，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 ABCC4 與胃癌臨床病理因素的關系

表2 CEA 與胃癌臨床病理因素的關系

2.4 胃癌組織中CEA 與ABCC4 表達水平的相關性分析

在CEA 表達陽性的35 例中，ABCC4 陽性表達占6 例；在CEA 表達陰性65 例中，ABCC4 陽性表達占13 例，Spearman 法分析顯示CEA 和ABCC4 在胃癌組織中表達無相關性，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 胃癌組織中CEA 與ABCC4 表達水平的相關性分析

3 討論

ABCC4 在人類中定位于染色體13q32，長312kb，含有31 個外顯子[3]，是ABC 家族中結構最簡單的蛋白[4]，廣泛分布于胰腺和腸等多種組織中[5-6]。結直腸癌、頭頸鱗癌細胞中ABCC4 強表達[7-8]，提示ABCC4 與腫瘤的發生發展相關。佟柏峰等[9]通過ABCC4 基因RNAi 有效靶點慢病毒(ABCC4siRNA)感染SGC-7901 細胞的研究表明，ABCC4 基因能促進胃癌細胞增殖。本研究通過免疫組化法發現ABCC4 在胃癌組織中呈高表達，并且陽性率明顯高于癌旁胃粘膜組織，說明了ABCC4 與胃癌的發生相關。

此外，該研究還發現，ABCC4 表達水平與胃癌組織分化程度相關。在高分化胃癌組織中ABCC4 表達的陽性率明顯高于低分化胃癌，提示隨著胃癌的惡性程度進展,ABCC4 陽性表達率下降。臨床發現某些分化程度低、惡性程度高的癌癥患者較分化程度高的患者對化療敏感,結合Yasui 等[10]比較順鉑耐藥腫瘤細胞KK47/cDDP1O 的ABCC4 拷貝數高于順鉑敏感腫瘤細胞的ABCC4 拷貝數，提示ABCC4 在癌組織中的陽性表達率增高可能是腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性的原因之一，有待進一步分組研究證實。

CEA 是癌細胞膜上的一種結構蛋白，通常在體內濃度極低，但來自內胚層組織惡變時，如胃癌、肝癌、肺癌等組織中濃度可升高[1，11]。該研究發現胃高分化腺癌的CEA 陽性表達率高低于低分化腺癌的陽性表達率，這提示胃癌分化程度越低,CEA 陽性表達率越高，與王海燕等[12]的報道相符。

目前對腫瘤發生機制的研究已從單一基因發展到多基因協同作用和互相調節的研究。該研究發現CEA 和ABCC4 表達水平與胃癌的分化程度有關，但用Spearman 法分析發現CEA 和ABCC4 在胃癌組織中的表達無相關性，這提示CEA 和ABCC4對胃癌細胞的調控可能沒有協同作用，可能通過不同的調控機制起作用。如CEA 可誘導CEACAM1 介導的凋亡途徑[13]，ABCC4可通過參與轉運細胞cAMP 和cGMP 等內源性分子，調控細胞內的環核苷酸水平，調節細胞凋亡[14]。

綜上所述，該研究通過免疫組化法觀察ABCC4 和CEA 在胃癌組織中的表達水平，分析其與胃癌臨床病理因素的關系,證明了ABCC4 和CEA 表達與胃癌的分化程度有關，但二者的調控沒有協同作用，聯合檢測ABCC4 和CEA，可能有助于對胃癌分化程度做出準確的評價。

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