FEZ1基因在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及其意義

周紅艷 郭艷風(fēng)

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)第二大常見惡性腫瘤[1]，嚴(yán)重威脅著婦女的健康與生命。宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)多階段、多基因變異的結(jié)果，癌基因的激活與抑癌基因的失活在這一過程中起了重要作用。FEZ1基因是從8p22上分離而得出的一個(gè)抑癌基因，在一些惡性腫瘤中表現(xiàn)為抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用[2]。研究已證實(shí)，F(xiàn)EZ1在多種惡性腫瘤組織如乳腺癌、卵巢癌、肺癌等中，F(xiàn)EZ1均存在不同程度的缺失或表達(dá)減少，但其在宮頸鱗癌中的作用尚不明確[3-5]。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2005年6月-2012年6月在本院住院患者的宮頸組織蠟塊共208例，其中宮頸鱗癌102例，CIN66例，正常宮頸組織40例。術(shù)前患者均未接受放療及化療。102例宮頸鱗癌患者中，年齡34～65歲，中位年齡43歲，其中浸潤淺層42例，深層60例；按WHO標(biāo)準(zhǔn)分級，高分化32例，中分化44例、低分化26例；按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）臨床分期（2003）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，Ⅰ期56例，Ⅱ期21例，Ⅲ期17例，Ⅳ期8例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的69例。CIN66例，其中CINⅠ級12例，CINⅡ級24例，CINⅢ級30例；正常宮頸組織40例（同期住院因子宮良性疾病行子宮全切術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)宮頸正常者）。

1.2 主要試劑及試劑盒 FEZ1鼠抗人多克隆抗體購自美國SANTA CRUZ生物公司，工作濃度為1：50；SP免疫組化試劑盒（PV9000）購自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 IHC染色 采用免疫組化SP法，步驟如下：石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后，PBS清洗，抗原修復(fù)，3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS清洗，山羊血清封閉，滴加一抗工作液（1∶50），室溫孵育10 min后置于濕盒內(nèi)，4 ℃冰箱過夜（12 h），PBS清洗，滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液，PBS沖洗，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，PBS沖洗，DAB工作液顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作陰性對照，結(jié)果陰性。

1.4 IHC結(jié)果判定 FEZ1蛋白陽性信號為棕黃色顆粒樣物質(zhì)，主要位于細(xì)胞質(zhì)，少部分位于細(xì)胞核；參照有關(guān)文獻(xiàn)[6]，在高倍視野下（400×）隨機(jī)選取5個(gè)視野（每個(gè)視野觀察不少于200個(gè)細(xì)胞），按陽性細(xì)胞所占的百分比及著色強(qiáng)度進(jìn)行結(jié)果判定：（1）按著色強(qiáng)度評分：0分為無著色；1分為淺黃色；2分為黃色；3分為棕黃色。（2）按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細(xì)胞數(shù)≤10%，2分為陽性細(xì)胞數(shù)11%～50%，3分為陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%，4分為陽性細(xì)胞數(shù)>75%。取（1）、（2）兩項(xiàng)評分的乘積作為總積分，0～3分為陰性（-），3分以上為陽性（+）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件處理所有數(shù)據(jù)，兩樣本率的比較采用四格表資料的 字2檢驗(yàn)；多樣本率的比較采用行列表資料的 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FEZ1蛋白在宮頸鱗癌、CIN及正常宮頸組織中的表達(dá) FEZ1蛋白陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞質(zhì)，在宮頸正常黏膜上皮中組織中，F(xiàn)EZ1陽性細(xì)胞存在于上皮全層，CIN中則以彌散分布為主，在宮頸鱗癌中常表現(xiàn)為淡染或無著色，見圖1～3。FEZ1蛋白在正常宮頸組織、CIN及宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率分別為92.5%、68.2%和52.0%（P<0.05），結(jié)果見表1。

圖1 FEZ1蛋白在正常宮頸組織中的表達(dá)（SP×400）

2.2 宮頸鱗癌組織中FEZ1蛋白的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系 在宮頸鱗癌組織中，F(xiàn)EZ1蛋白的表達(dá)隨著癌組織分化程度的降低而顯著降低（P<0.05），而與年齡、浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05），結(jié)果見表2。

圖2 FEZ1蛋白在CIN中的表達(dá)（SP×400）

圖3 FEZ1蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)（SP×400）

表1 FEZ1蛋白在正常宮頸、CIN及宮頸鱗癌組織中的表達(dá)

3 討論

抑癌基因功能的缺失在腫瘤的發(fā)生與演進(jìn)過程中起著重要作用。FEZ1基因是從8p22上分離而得出的一個(gè)抑癌基因。研究顯示，F(xiàn)EZ1在多種正常組織中普遍表達(dá)，而在許多惡性腫瘤組織如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌等中均存在不同程度的缺失或表達(dá)減少[3-5，7]。FEZ1基因可能通過促進(jìn)凋亡，影響細(xì)胞周期，使細(xì)胞產(chǎn)生G2/M期阻滯；抑制細(xì)胞生長和調(diào)節(jié)有絲分裂而發(fā)揮抑癌作用的[8]。

Vecchione等[9]研究表明，F(xiàn)EZ1蛋白表達(dá)缺失或顯著減少的病例在原發(fā)性胃癌中占44%（39/88），且與不同的組織類型有顯著相關(guān)性，而在研究的8例胃癌細(xì)胞系中幾乎均檢測不到FEZ1蛋白的表達(dá)；在原發(fā)性膀胱移行細(xì)胞癌中占62%（37/60）并與腫瘤的病理分級顯著相關(guān)。在對肺癌的研究中，F(xiàn)EZ1蛋白表達(dá)缺失或顯著減少的病例占68%（70/103）并與腫瘤分級呈正相關(guān)[2，10]。王洪興等[11]報(bào)道FEZ1蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率（55.6%）明顯低于正常胃組織（86.1 %），并且其在胃癌組織中的陽性表達(dá)率與分化程度密切相關(guān)（P<0.05）。以上研究均表明，F(xiàn)EZ1蛋白表達(dá)缺失或下降在多種人類腫瘤的發(fā)生中起著重要作用。研究還顯示，將FEZ1基因轉(zhuǎn)染入FEZ1陰性表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系（MCF7）中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入FEZ1基因的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與對照組相比增殖能力明顯下降。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入FEZ1基因的MCF7細(xì)胞的腫瘤形成能力也較對照組明顯下降[12]，提示FEZ1的表達(dá)在體外可抑制細(xì)胞增殖，在體內(nèi)可抑制腫瘤的形成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)EZ1蛋白在宮頸正常組織中的陽性表達(dá)率顯著高于其在宮頸鱗癌及CIN組織中的陽性表達(dá)率（P<0.05），與上述研究結(jié)果相似，進(jìn)一步說明FEZ1是一重要的抑癌基因，其表達(dá)缺失或減少與宮頸鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。

表2 宮頸鱗癌組織中FEZ1蛋白的陽性表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

此外，筆者還研究了FEZ1蛋白的表達(dá)與宮頸鱗癌主要臨床病理特征間的關(guān)系，結(jié)果顯示，在宮頸鱗癌組織中，F(xiàn)EZ1蛋白的表達(dá)隨著癌組織分化程度的降低而顯著降低（P<0.05），而與患者年齡、癌組織的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)（P>0.05），這一結(jié)果說明FEZ1表達(dá)缺失或下降可能與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Vecchione等[10]研究FEZ1在膀胱癌中的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，與正常移行上皮比較，60%的原發(fā)膀胱癌的FEZ1蛋白表達(dá)減少或缺失，并且與腫瘤的分期之間存在顯著相關(guān)性。Nigg[13]在對11例腎集合管癌的研究中發(fā)現(xiàn)有7例（64%）存在FEZ1蛋白的表達(dá)減少或缺失，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。原志慶等[14]研究FEZ1基因在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果，F(xiàn)EZ1蛋白在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺腺瘤中的陽性表達(dá)率明顯低于正常甲狀腺組織，并且其在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達(dá)率與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05）。

綜上所述，在宮頸鱗癌中，F(xiàn)EZ1基因表達(dá)缺失或下調(diào)，且其陽性表達(dá)與宮頸鱗癌的組織學(xué)分級有關(guān)，提示FEZ1基因不僅與宮頸癌的發(fā)生與演進(jìn)有關(guān)，而且可能成為宮頸癌一個(gè)新的治療靶點(diǎn)，但FEZ1基因的表達(dá)缺失或下調(diào)的原因及機(jī)制還需要進(jìn)一步去研究和探討，這對于完善宮頸癌的發(fā)生機(jī)制并作為腫瘤診斷和指導(dǎo)個(gè)性化治療的分子靶點(diǎn)具有重要意義。

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