老年甲狀腺癌超聲影像與腫瘤血管內皮生長因子表達的相關性

趙 琴 王曉榮 (新疆醫科大學第一附屬醫院超聲診斷科，新疆 烏魯木齊 830054)

甲狀腺腫瘤是頭頸部較常見的實體腫瘤，其種類較多，有良性和惡性之分。臨床研究表明，甲狀腺癌病理類型與患者預后密切相關，其中良性腫瘤切除后即可治愈，預后良好;而惡性腫瘤預后不如良性腫瘤，且惡性程度越高，預后越差〔1〕。因此，早期鑒別出良惡性甲狀腺腫瘤對指導臨床治療和判斷預后有一定的參考價值〔2〕。而血管內皮生長因子(VEGF)在甲狀腺癌中呈高水平表達，且其表達水平與腫瘤的分化程度、轉移及預后顯著相關。本研究采用多普勒超聲對甲狀腺腫瘤的宏觀血管變化進行觀察及應用免疫組化法檢測腫瘤組織VEGF的表達情況，以探討超聲影像和VEGF在甲狀腺腫瘤良惡性鑒別方面的意義，并分析其相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2010年1月至2013年7月經手術及穿刺病理證實的84例甲狀腺腫瘤患者，其中甲狀腺腺瘤23例，乳頭狀癌47例，濾泡狀癌14例;其中男20例，女64例;年齡55 ～76〔(平均64.3±8.9)〕歲。術前均未給予任何治療，術后取腫瘤切除標本進行VEGF的免疫組化染色。

1.2 超聲檢查 術前7 d內行多普勒超聲檢查，采用西門子Acuson Sequoia型及美國GE Logic-7型多普勒超聲診斷儀，探頭頻率為5～12 MHz，對頸部、甲狀腺及其周圍行灰階超聲檢查，以了解甲狀腺癌的一般情況，調整多普勒超聲血流技術參數，然后觀察并記錄腫瘤內部及周圍血流分布情況。Ⅰ級:結節內和周邊血流信號分布范圍小于結節面積或結節周長的1/3;Ⅱ級:結節內和周邊血流信號分布范圍大于結節面積或結節周長的1/3;Ⅲ級:結節內和周邊血流信號分布幾乎充滿結節或占據整個周長。并觀察結節內搏動性血流，以收縮期最高峰值流速對應的RI為記錄值〔3〕。

1.3 免疫組化法 鼠抗人VEGF單克隆抗體、SP試劑盒和二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒均由武漢博士德公司提供。術后取腫瘤切除標本，常規石蠟包埋，連續厚切片(5 μm)，貼附于載玻片。采用SP法行VEGF的免疫組化染色，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，復染、脫水、封片。VEGF陽性染色顆粒多位于胞質內，并以＞10%的腫瘤細胞的胞質內染成棕褐色或棕黃色顆粒判斷為VEGF表達陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS16.0軟件進行分析，計量資料以s表示，組間比較采用t檢驗;率的比較采用χ2檢驗;血流阻力指數(RI)與VEGF的相關性分析采用Spearman相關分析。

2 結果

2.1 不同血流信號分級的VEGF陽性表達比較 不同血流分級的甲狀腺腫瘤彩色多普勒顯像;Ⅰ級陽性率為28.00%(7例)，Ⅱ級為50.00%(16例)，Ⅲ級陽性率為77.78%(21例)，組間比較差異有統計學意義(χ2=5.472，P ＜0.05)。

2.2 不同類型甲狀腺癌RI及VEGF陽性表達比較 濾泡狀癌組織中 VEGF表達(92.86%)顯著高于甲狀腺腺瘤(21.74%)和乳頭狀癌(55.32%);甲狀腺腺瘤、乳頭狀癌及濾泡狀癌組織 RI值分別為(0.78 ± 0.07)、(0.70 ± 0.06)和(0.59 ±0.06)，見圖1。

圖1 VEGF在不同類型甲狀腺癌中的表達

2.3 VEGF表達與RI的關系分析 甲狀腺癌患者中VEGF陽性表達組RI值為0.72±0.07，顯著高于陰性表達組的0.61±0.06，差異均有統計學意義(P＜0.05);經 Spearman相關分析發現，RI與 VEGF陽性表達呈顯著正相關(r=0.732，P＜0.05)。

3 討論

正常生理狀況下，機體血管生成因子與抑制因子形成一種相對平衡的狀態，但在特殊病理情況下，如細胞惡化轉移過程中，癌細胞將釋放大量VEGF等以啟動癌細胞“血管生成開關”，從而形成腫瘤新生血管并進一步生長，導致不平衡狀態的加劇，最終形成腫瘤無限制生長的惡性循環〔4，5〕。VEGF是目前參與腫瘤血管生成特異性最高且作用最強的血管生成因子〔6〕。有研究表明，VEGF在多種腫瘤中均呈高水平表達，且其表達水平與腫瘤的分化程度、轉移及預后密切相關〔7〕。因此，檢測甲狀腺腫瘤組織VEGF的表達情況，對鑒別良惡性腫瘤具有重要的臨床意義。

彩色多普勒超聲是目前應用最廣泛的超聲波檢查，不僅能清晰顯示腫瘤內完整的血管結構，展現腫瘤內新生微血管，還可觀察到腫瘤形態的大小、特征、血管網絡及與周邊血管結構的三維位置關系〔8，9〕。故多普勒彩超是一種能夠直觀、立體顯示腫瘤血流情況的非創傷性技術。本研究提示甲狀腺癌的多普勒超聲表現與VEGF表達水平密切相關，腫瘤內血流越豐富，VEGF表達越高，能夠在一定程度上反映腫瘤血管的生成情況〔10〕。RI是反映血流阻力的重要參數，其客觀性較強，測量時不因角度的變化而受影響〔11〕。本文發現，甲狀腺癌惡性程度越高，RI值越高，且RI值越高的部位VEGF呈陽性表達，提示腫瘤的分化程度與血管形成有一定的相關性〔12〕。Salajegheh等〔13〕報道，甲狀腺癌組織通過分泌大量的VEGF以誘導產生功能結構異常的新生血管，呈不規則密集網絡狀分布，促成血流紊亂，使RI值增高。本研究結果與上述報道相吻合。

綜上，多普勒彩超檢測血流分級對老年甲狀腺癌具有較高的診斷價值，而血流分級和RI能反映甲狀腺癌VEGF的表達情況，多普勒超聲影像和VEGF對甲狀腺腫瘤良惡性的鑒別具有重要的臨床意義。

1 Budiawan H，Salavati A，Kulkarni HR，et al.Peptide receptor radionuclide therapy of treatment-refractory metastatic thyroid cancer using(90)Yttrium and(177)Lutetium labeled somatostatin analogs:toxicity，response and survival analysis〔J〕.Am J Nucl Med Mol Imaging，2013;4(1):39-52.

2 韋 力，周 軍，梁前暉，等.超聲評分鑒別甲狀腺實性結節良惡性的應用價值〔J〕.中華超聲影像學雜志，2012;21(12):1084-6.

3 郭 艷，潘如鳳，宋 偉，等.彩色多普勒超聲對甲狀腺癌診斷的臨床應用價值〔J〕.中華全科醫學，2013;11(9):1454-5.

4 Kamat A，Rajoria S，George A，et al.Estrogen-mediated angiogenesis in thyroid tumor microenvironment is mediated through VEGF signaling pathways〔J〕.Arch Otolaryngol Head Neck Surg，2011;137(11):1146-53.

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6 吳澤建，謝楚平，蔣基令，等.甲狀腺癌中survivin與VEGF因子的表達及其臨床意義〔J〕.中國現代醫學雜志，2011;21(10):1158-60.

7 Jia W，Gao XJ，Zhang ZD，et al.S100A4 silencing suppresses proliferation，angiogenesis and invasion of thyroid cancer cells through downregulation of MMP-9 and VEGF〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2013;17(11):1495-508.

8 Jolink WM，Heinen R，Persoon S，et al.Transcranial doppler ultrasonography CO2 reactivity does not predict recurrent ischaemic stroke in patients with symptomatic carotid artery occlusion〔J〕.Cerebrovasc Dis，2013;37(1):30-7.

9 何志唯，杜文華.彩色多普勒超聲在33例甲狀腺癌診斷與鑒別診斷中的應用〔J〕.重慶醫學，2011;40(7):692-4.

10 單叔煤，王玉成，奚克敏，等.彩色多普勒超聲表現與VEGF在甲狀腺腫瘤中的表達〔J〕.醫療衛生裝備，2009;30(11):71-3.

11 Kurt S，Tokg?z O，Tokg?z H，et al.Evaluation of effects of extracorporeal shock wave lithotripsy on renal vasculature with Doppler ultrasonography〔J〕.Med Ultrason，2013;15(4):273-7.

12 Karaca Z，Tanriverdi F，Unluhizarci K，et al.VEGFR1 expression is related to lymph node metastasis and serum VEGF may be a marker of progression in the follow-up of patients with differentiated thyroid carcinoma〔J〕.Eur J Endocrinol，2011;164(2):277-84.

13 Salajegheh A，Pakneshan S，Rahman A，et al.Co-regulatory potential of vascular endothelial growth factor-A and vascular endothelial growth factor-C in thyroid carcinoma〔J〕.Hum Pathol，2013;44(10):2204-12.