MUC1和PINCH蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達

胡兆鵬 肖 波 (萍鄉市人民醫院病理科，江西 萍鄉 337055)

非小細胞肺癌 (NSCLC)為高發惡性病變肺部腫瘤，患者預后較差，5年生存率可能性與是否發生淋巴結轉移等密切相關，因此，準確評估NSCLC患者病變程度，評估患者預后有重要意義〔1〕。黏蛋白-1(MUC1)和PINCH蛋白表達情況可與腫瘤生長以及轉移情況有必要關聯，逐漸被應用到臨床病變組織的檢測之中。MUC1分子量高，在癌細胞浸潤的組織中可明顯發生異常表達，尤其是來源于上皮細胞的腫瘤，如NSCLC為此類代表性腫瘤〔2〕。PINCH蛋白是近期發現的腫瘤生長刺激因子，參與細胞增殖以及遷移等作用，并起到一定的調節作用，在腫瘤組織中也可高度表達。因此，MUC1和PINCH蛋白在NSCLC患者肺部癌變組織中表達情況備受關注，成為研究靶點，本文旨在探討MUC1和PINCH蛋白的表達意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 抽選2011年1月至2013年1月本院收治的35例NSCLC患者，均進行手術治療，其中男19例，女16例，年齡42～65歲，平均(51.4±3.5)歲，治療前 NSCLC 病程 4～8年，平均(6.3±2.4)年。將患者手術肺癌組織標本冰凍保存，記為觀察組，另外留取35例正常肺部組織標本進行通用方法保存，記為對照組。患者病勢控制良好，腫瘤病灶清晰，PS評分均低于2分，生存期均超過3個月。患者肝腎功能未受明顯影響，凝血功能正常，均可耐受手術切除治療，并且與治療前未接受其他治療干預。患者均可主動配合完成手術治療，并且取得患者監護人或患者本人的書面知情同意。癌變組織高、中、低分化者分別為7、15、13 例，分期為Ⅰ ～ Ⅳ期8、10、9、8 例。根據術后病理報告詳細記錄組織學類型、是否伴有淋巴轉移等情況。

1.2 MUC1檢測方法

1.2.1 試劑 RT-PCR RNA試劑盒(華美生物工程公司)、MUC-1RT-PCR試劑盒(Gibco BRL公司)、兔抗人MUC-1IgG(腫瘤研究室提供)、免疫組化卵蛋白-生物素-過氧化物酶復合物(ABC)法試劑盒(DAKO公司)。

1.2.2 方法 應用RT-PCR檢測MUC-1mRNA表達:首先制備標本總RNA，選擇相關試劑盒;并且擴增MUC-1，65℃后采取退火，之后進行3%瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠圖像分析。MUC-1/B-actin陽性表達指標為在0.5以上。應用免疫組化方法檢測MUC-1蛋白，首先制備合格要求的冰凍切片(5 μm)，置于處理后的載玻片上并固定，加兔抗人 MUC-1IgG之后進行過夜并洗滌。應用ABC法試劑盒染色，篩選出陽性表達組織。陽性癌細胞達全部的20%以上，定為陽性患者。

1.3 PINCH蛋白檢測方法 同樣方法將冰凍標本進行10%甲醛固定，并且進行石蠟包埋，連續切片。其表達應用免疫組化EnVision法檢測，選用試劑:PV9000試劑盒(北京中杉生物技術有限公司)、二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑(同上)、兔抗人PINCH蛋白多克隆抗體(博士德公司)。嚴格按照試劑盒說明書操作。PINCH表達以組織間質中成纖維細胞樣細胞的胞膜及胞質出現棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞達總數的25%以上為陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS15.0軟件進行分析，計數資料用χ2檢驗，計量資料以s表示，行t檢驗。

2 結果

2.1 兩組標本中MUC1和PINCH蛋白表達情況 對照組標本中均無MUC1和PINCH蛋白的陽性表達，觀察組中MUC1和PINCH蛋白的陽性表達率分別為62.9%(22/35)和57.1%(20/35)，與對照組比較差異明顯(P＜0.05)，MUC1和 PINCH蛋白的陽性表達水平間無明顯差異。

2.2 MUC1和PINCH表達與NSCLC患者病理特征間的關系MUC1和PINCH蛋白表達情況與NSCLC患者性別差異、年齡、分型、分期等因素無關，與淋巴結轉移發生與否密切相關，有淋巴結轉移者的MUC1和PINCH蛋白陽性表達明顯高于未淋巴結轉移者。見表1。

表1 MUC1和PINCH表達情況與NSCLC患者病理特征間關系〔n(%)〕

2.3 MUC1和PINCH蛋白表達情況與患者5年生存率關系MUC1和PINCH蛋白陽性表達者的術后5年生存率為22.7%(5/22)和30%(6/20)，明顯低于 MUC1和PINCH蛋白陰性表達者的77.3%(17/22)和70%(14/20)(P ＜0.05)。見圖1。

圖1 肺癌組織Muc-1基因表達

3 討論

NSCLC是常見肺部腫瘤病變類型，其發病率可達肺部腫瘤的80%以上，遠期預后較差，5年存活率較低。腫瘤預后正確評估可有效為臨床治療提供思路和啟發，可制定合理治療方案，提升患者的生活質量〔3〕。對NSCLC預后的傳統評價方法為基本病理學方法，以腫瘤病理分型以及分期等作為病變程度評估指標。但是，腫瘤病情發展是一個漫長而復雜的過程，腫瘤分期處于動態變化中，缺乏一定穩定性，并不能確切評估腫瘤病變預后，存在一定局限性。NSCLC病變組織的異質性明顯，因此，即便同期腫瘤組織病變，甚至分化程度相似的組織病變中，均可出現不同檢測結果，影響病情預后的評估〔4〕。對于潛在浸潤的組織或者發生微轉移的組織分期并不明顯，但是仍存在一定危險性，不能單憑病理結果進行分析。因此，為提升NSCLC病變預后評測的準確性，需要更具有代表性的評測指標。

隨著分子生物學的進一步發展，技術不斷提升，大量研究發現，分子生物MUC1和PINCH蛋白與NSCLC預后密切相關。MUC1為跨膜黏蛋白，基因定位于染色體1q21，明顯具有多態性。MUC1主要表達于組織的上皮細胞，可在多種腫瘤中異常表達(如乳腺癌、卵巢癌)，MUC1骨架由胞內外段和跨膜段組成，最先接觸細胞免疫系統，參與細胞黏附及細胞間的信號傳導，促進腫瘤細胞增殖和活化。有學者認為〔4，5〕，黏附過程預示腫瘤侵襲轉移的開始，因此MUC1與腫瘤細胞轉移密切相關。PINCH是黏著斑蛋白(含有5個LIM結構域)，在正常組織中表達不明顯，通過與Nck-2結合過程，為細胞生長因子提高導聯，為細胞黏附過程進行調節，同時參與細胞轉移過程，同樣在多種腫瘤組織中異常表達〔6，7〕。本研究結果與其他研究者結果相似，說明MUC1和PINCH蛋白的陽性表達可作為腫瘤浸潤和轉移的重要標志物，具有一定代表性。另外，有學者認為〔8，9〕，MUC1和PINCH蛋白的異常表達，可使 E-鈣黏蛋白表達水平下調，后者是抑制腫瘤細胞轉移的重要黏附因子，同樣說明MUC1和PINCH參與腫瘤細胞轉移過程，在淋巴結轉移者中可高度表達。

1 牛中喜，周清華，徐 鵬，等.非小細胞肺癌患者淋巴結、外周血、骨髓微轉移的MUC1基因診斷臨床意義〔J〕.中國癌癥雜志，2004;14(6):497-500.

2 Rahn JJ，Dabbagh L，Pasdar M，et al.The importance of MUC1 cellular localization in patients with breast carcinoma:an immunohistologic study of 71 patients and review of the literature〔J〕.Cancer，2010;91(11):1973-82.

3 Huang L，Ren J，Chen D，et al.Muc-1 cytoplas m ic domain coactivates Wnt target gene transcription and confers transformation〔J〕.Cancer Biol Ther，2010;2(6):702-6.

4 Jessica WR，Anna D，Ghazwan M，et al.The signaling adapter protein PINCH is up-regulated in the stroma of common cancer，notably at invasive edges〔J〕.Cancer，2002;95(6):1387-95.

5 王寶山，宋冬梅，段惠軍，等.PINCH蛋自在人喉鱗狀細胞癌中的表達以及低氧對其表達的影響〔J〕.中國腫瘤臨床，2006;33(5):267-9.

6 Zhang JT，Li Qx，Wang D，et al.Up-regulation of PINCH in the stroma of oral squamous cell carcinoma predicts nodal metastasis〔J〕.Oncol Rep，2010;14(6):1519-22.

7 趙 健，趙振興，袁鳳輝.PINCH蛋白在預測非小細胞肺癌淋巴結轉移及預后的作用研究〔J〕.實用預防醫學，2011;18(7):1198-200.

8 Velyvis A，Yang YW，Wu CY，et al.Solution structure of the focal adhension adaptor PINCH LIM1 domain and characterization of its inter action with the integrin-linked Killase ankyrjn repeat domain〔J〕.J Biol Chem，2010;276(6):4932-9.

9 Lagow EL，Carson DD.Synergistic stimulation of Muc-1 expression in nor mal breast epithelia and breast cancer cells by interferon-gamma and tumor necrosis factor alpha〔J〕.J Cell Biochem，2012;86(4):759-72.