GATA-6蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

岳文慧，張立廣，于鐵莉，陸鴻略，梁 媛，張淑君，趙瑞力

(1承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000;2河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院)

喉癌是頭頸部常見(jiàn)惡性腫瘤之一，90%以上為鱗狀細(xì)胞癌。GATA-6是GATA家族成員之一，具有高度保守的鋅指結(jié)構(gòu)，能夠通過(guò)識(shí)別GATA序列并與之結(jié)合，啟動(dòng)報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄。已有研究表明，在一些腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中GATA-6具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)喉鱗狀細(xì)胞癌組織中GATA-6蛋白的表達(dá)情況，探討GATA-6蛋白的表達(dá)與喉癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2008年1月～2012年4月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科住院手術(shù)治療的48例喉癌患者手術(shù)切除癌組織(喉癌組)，患者術(shù)前均未行放、化療及免疫治療。男45例、女3例，年齡為44～78歲;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例(根據(jù)術(shù)后病理決定有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移);喉癌分型:聲門上型16例，聲門型32例;腫瘤長(zhǎng)徑＜3 cm 20例，≥3 cm 28例;病理學(xué)分級(jí):高分化鱗癌15例，中分化鱗癌20例，低分化鱗癌13例;臨床分期采用2002年UICC TNM分類分期標(biāo)準(zhǔn)，臨床Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期22例，Ⅳ期10例。吸煙量(每天量×年×365)≤20萬(wàn)支者11例，＞20萬(wàn)支者37例。另收集20例非喉癌患者的喉部正常黏膜組織作為對(duì)照，其性別、年齡與喉癌組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 新鮮組織均在取材離體后馬上放入10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，制成5 μm厚切片。主要試劑為GATA-6兔抗人多克隆抗體(sc-9055)，來(lái)源于美國(guó)Santa Cruz公司;即用型快捷免疫組化Max Vision試劑盒為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;即用型DAB顯色試劑盒來(lái)源于北京四正柏生物科技有限公司。采用免疫組織化學(xué)法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書進(jìn)行。每批實(shí)驗(yàn)均參照美國(guó)Santa Cruz公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。一抗稀釋比例為1∶100。

1.2.2 結(jié)果判定 分別由3名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生獨(dú)立閱片，根據(jù)其評(píng)分的平均值采用Volm雙評(píng)分法進(jìn)行判定。①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分:光鏡10×20倍下，隨機(jī)選擇5個(gè)染色均勻視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分率≤25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率26%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率＞50%為3分;②按染色強(qiáng)度評(píng)分:無(wú)顯色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將上述兩項(xiàng)得分相加:0～2分判為+，3～4分判為++，5～6分判為 +++。++和+++為陽(yáng)性表達(dá)，+為陰性表達(dá)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GATA-6蛋白在喉癌組織的表達(dá)情況 GA-TA-6蛋白陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒狀。GATA-6蛋白在喉癌組織及正常喉部黏膜中均有表達(dá)，在喉癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常喉部黏膜組織(75.00%vs 35.00%，P＜0.05)。

2.2 GATA-6蛋白表達(dá)與喉癌臨床病理因素的關(guān)系 GATA-6蛋白在喉癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級(jí)有關(guān)(P均＜0.05)，與臨床分型、腫瘤大小、吸煙量、年齡和性別無(wú)關(guān)。見(jiàn)表1。

表1 GATA-6蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

3 討論

GATA家族共有6個(gè)成員，分為兩類，GATA-1/-2/-3和GATA-4/-5/-6，它們有完全不同且又相互重疊的作用模式。每一個(gè)GATA轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域均含有2個(gè)相似的Ⅳ型鋅指結(jié)構(gòu)，羧基端的鋅指結(jié)構(gòu)是結(jié)合DNA的主要結(jié)構(gòu)，氨基端的鋅指結(jié)構(gòu)與結(jié)合穩(wěn)定性和特異性相關(guān)［1］。GATA家族在人體的各種生理病理過(guò)程中的作用已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)，其中GATA-6蛋白由Tamura等［2］首次在兔的胃組織中發(fā)現(xiàn)。人類GATA-6基因編碼595個(gè)氨基酸，在來(lái)源于中胚層和內(nèi)胚層的各種不同組織中表達(dá)，調(diào)節(jié)胃腸、心臟和性腺等多個(gè)器官的正常發(fā)育和功能形成［3］。

Zhong等［4］研究發(fā)現(xiàn)GATA-6作為癌基因在胰腺導(dǎo)管癌中呈高表達(dá)，尤其在晚期腫瘤中表達(dá)更為明顯，其通過(guò)激活Wnt信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Adachi等［5］研究發(fā)現(xiàn)，致癌通路Ras/Raf/MEK/ERK中Nox 1與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，而 GATA-6蛋白的磷酸化，可能是維持這一通路持續(xù)上調(diào)的原因之一。Shureiqi等［6］研究表明，GATA-6蛋白通過(guò)與組蛋白去乙酰化酶相互協(xié)同作用，進(jìn)而抑制15-脂氧合酶-1的表達(dá)，降低了過(guò)氧化物酶增殖體對(duì)受體的激活，從而發(fā)揮抑制結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用。Gorshkova等［7］在小鼠肺癌基因K-RAS的12號(hào)密碼子外顯子上發(fā)現(xiàn)存在可與GATA-6相結(jié)合的位點(diǎn)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，給肺癌非易感性小鼠C57BL注射致癌物3-MC，DNA與GATA-6的結(jié)合活性無(wú)明顯變化。而給肺癌易感性小鼠ICR注射致癌物3-MC后，DNA與GATA-6的結(jié)合活性明顯增強(qiáng)，表明GATA-6蛋白與肺癌的發(fā)生有關(guān)。Belaguli等［8］發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌中 GATA-6蛋白可正向調(diào)控尿激酶型纖溶酶原激活物的基因表達(dá)，增強(qiáng)結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞的侵襲性。本研究發(fā)現(xiàn)GATA-6在喉癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常喉部黏膜組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ～Ⅳ期者高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化者高于高分化者和中分化者。提示GATA-6作為癌基因誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞生長(zhǎng)，隨著GATA-6蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，喉癌細(xì)胞侵襲性和轉(zhuǎn)移能力明顯增強(qiáng)，表明GATA-6在喉癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起一定的作用，這可能與一些相關(guān)的抑癌基因作用被抑制，致癌通路的異常激活及腫瘤轉(zhuǎn)移因子作用增強(qiáng)有關(guān)。

總之，喉癌組織中GATA-6蛋白高表達(dá)，通過(guò)測(cè)定GATA-6蛋白的表達(dá)量及研究其與臨床病理特征之間的關(guān)系，進(jìn)一步深入了解相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制，有望為喉癌診斷、治療技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展奠定理論基礎(chǔ)。

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