原發免疫性血小板減少癥患者血小板表面CD41、CD62P及T淋巴細胞亞群水平變化

張 恒，潘 歆，陳志剛，吳廣勝

(石河子大學醫學院第一附屬醫院，新疆石河子832000)

原發免疫性血小板減少癥(ITP)是臨床上常見的出血性疾病，發病機制尚未完全明確，目前認為，ITP是體液免疫和細胞免疫異常，導致血小板破壞增多、生成減少而最終以外周血血小板減少、皮膚黏膜出血為特征的疾病。血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(CD41/CD61)復合物是血小板主要的膜糖蛋白，ITP患者體內特異性的自身抗體主要針對該復合物［1，2］。CD62P是血小板 α 顆粒膜糖蛋白，又稱 P-選擇素，它在血小板活化時從α顆粒轉到細胞膜上，是血小板活化的靈敏標記物［3］。有文獻報道，ITP患者CD62P表達不同程度升高［4］。2012年1月～2013年8月，我們應用流式細胞術(FCM)對ITP患者血小板表面CD41、CD62P的表達情況及T淋巴細胞亞群水平進行檢測，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 石河子大學醫學院第一附屬醫院收治的血小板減少患者91例。其中，ITP患者54例(ITP組)，男19例，女35例;年齡15～84歲，中位年齡50歲;診斷均符合文獻標準［5］。非免疫性血小板減少患者37例(非免疫血小板減少組)，男18例，女19例;年齡39～101歲，中位年齡62歲;其中急性白血病5例、巨幼細胞性貧血6例、再生障礙性貧血11例、骨髓增生異常綜合征13例、骨髓纖維化2例，均經骨髓穿刺或病理明確診斷。正常對照26例(健康對照組)，男9例，女17例;年齡21～75歲，中位年齡53歲，均為體檢中心健康體檢者，均無特殊疾病史。

1.2 方法

1.2.1 外周血血小板CD41、CD62P檢測 采用FCM檢測。研究對象均清晨空腹，不扎止血帶，大號針管抽取靜脈血2 mL，EDTA抗凝，2 h內進行檢測。取混勻的全血5 μL加入FCM專用管中，實驗管中分別加入5 μL的CD41-FITC和CD62P-PE單克隆抗體，對照管中加入5 μL同型對照熒光抗體。混勻后室溫(20～25℃)避光放置20～30 min，加入2 mL PBS混勻后上機檢測。通過Partec Flomax軟件處理分析，結果以CD41、CD62P陽性表達率表示。

1.2.2 外周血T淋巴細胞亞群檢測 采用FCM檢測。取100 μL受試者新鮮抗凝全血于FCM專用管中，加10 μL抗人 CD-4FITC/CD-8PE/CD-3PE-CY5單克隆抗體，混勻后室溫避光放置20～30 min，固定、溶血后，FCM檢測。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料用±s表示，組間比較采用多個樣本比較的秩和檢驗(Kruskal-Walis法)和多個樣本兩兩比較的秩和檢驗(Nemenyi法)。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血小板表面CD41、CD62P陽性表達率比較見表1。

表1 各組血小板表面CD41、CD62P陽性表達率比較(%，±s)

表1 各組血小板表面CD41、CD62P陽性表達率比較(%，±s)

注:與健康對照組比較，*P ＜0.05;與 ITP組比較，△P ＜0.05

組別 n CD+41 CD+62P ITP 組 54 45.60 ±19.99* 29.16 ±18.81*非免疫血小板減少組 37 65.93±21.89＊△ 26.62±14.97*健康對照組26 92.04 ± 4.35 4.02 ± 2.13

2.2 各組T淋巴細胞亞群檢測結果 見表2。

3 討論

ITP是一種獲得性自身免疫性出血性疾病，約占出血性疾病總數的1/3，國外流行病學統計，歐美國家成人ITP年發病率為5～10/10萬［1］，兒童ITP年發病率為 1.9～6.4/10 萬［6］。目前，ITP 的病因仍不清楚，認為抗體介導的血小板清除、細胞免疫紊亂、T淋巴細胞及細胞因子平衡改變等多種因素參與ITP的發?。?］。臨床上 ITP的診斷缺乏“金標準”，需要排除自身免疫性疾病和其他原因所致繼發性血小板減少之后才能診斷ITP［8］，故有效的輔助檢查成為必要。本研究中，FCM檢測結果表明，ITP組血小板表面CD41陽性表達率明顯低于非免疫血小板減少組和健康對照組，與常麗賢等［9］結果一致。分析ITP患者血小板表面CD41陽性表達率減低的原因，主要有以下幾方面:①ITP患者體內存在抗CD41的自身抗體，自身抗體與CD41的表位結合后，阻止CD41單抗與之結合。②ITP患者血小板活化后，CD41構象發生改變，從而隱藏與CD41單抗結合的抗原表位。③ITP患者巨核細胞功能受抑、發育異常，導致其產生的血小板表達CD41減少。

表2 各組T淋巴細胞亞群檢測結果(±s)

表2 各組T淋巴細胞亞群檢測結果(±s)

注:與健康對照組比較，*P＜0.05

組別 n CD+3(%) CD+4(%) CD+8(%) CD+4/CD+8 ITP 組 54 63.32 ± 7.30* 32.73 ± 6.41* 26.71 ±5.61* 1.29 ±0.42*非免疫血小板減少組 37 64.02 ±14.90 33.57 ±11.65* 23.60 ±6.85 1.51 ±0.43*健康對照組 26 71.75 ± 9.42 41.68 ± 6.25 22.06 ±4.38 1.95 ±0.37

CD62P作為血小板活化的分子標志物，在靜息血小板上表達很少。本研究結果顯示，ITP患者血小板表面CD62P陽性表達率比健康對照組高，提示在ITP患者血小板存在一定程度的活化。但本研究ITP組與非免疫血小板減少組CD62P陽性表達率無統計學差異，提示CD62P表達受多種因素影響。高血壓、糖尿病、多發性硬化等及危重患者［10～12］都可以出現CD62P的高表達，另外，標本采集、處理等對血小板活化有一定的影響［13］，也會影響CD62P的表達，故不建議將CD62P作為診斷ITP的輔助檢測指標。

T淋巴細胞亞群檢測結果顯示，與健康對照組比較，ITP組CD+3、CD+4T淋巴細胞百分比及CD+4/CD+8均降低，CD+8T淋巴細胞百分比增高，提示細胞免疫參與ITP發病，T淋巴細胞比例失調、免疫耐受丟失，導致B淋巴細胞增殖并激活，產生抗血小板抗體，而破壞血小板可能是其發病機制之一［14］。因而，檢測外周血T淋巴細胞亞群水平有助于ITP的診斷及鑒別［15］。

總之，ITP的發病機制復雜，臨床診斷缺乏既敏感又特異的方法，仍為排除性診斷。應用FCM檢測外周血血小板CD41及T淋巴細胞亞群水平對ITP診斷具有一定的臨床價值，而更為有效的實驗室診斷方法有待建立。

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