ACE、AT1R基因多態(tài)性與孕齡期子宮內(nèi)膜異位癥患者遺傳易感性的關(guān)系

劉 宏，陳素琴，劉 嵐

（河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，石家莊 050031）

研究發(fā)現(xiàn)，血管的形成和改變可能在子宮內(nèi)膜異位癥（Ems）的發(fā)生、侵襲過程中發(fā)揮重要作用［1，2］。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制劑培哚普利可以促進心肌的血管生成［4］。動物實驗表明，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）通過促進小動脈平滑肌細(xì)胞增殖刺激新血管形成［5］。由此推測，ACE和AngⅡ1型受體（AT1R）基因可能參與Ems的發(fā)病。本研究探討ACE基因A2350G、AT1R基因A1166C多態(tài)性與孕齡期婦女Ⅲ、Ⅳ期Ems遺傳易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年10月～2013年9月河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收治的經(jīng)腹腔鏡或剖腹手術(shù)治療，并經(jīng)大體及病理檢查診斷的Ems患者78例作為病例組，均為Ⅲ、Ⅳ期;年齡20～45歲。同期行輸卵管復(fù)通術(shù)，因不孕癥、縱隔子宮行腹腔鏡檢查，或因畸胎瘤、卵巢單純囊腫行腹腔鏡手術(shù)，術(shù)中肉眼及術(shù)后病理排除Ems者82例作為對照組，年齡20～45歲。排除標(biāo)準(zhǔn):嚴(yán)重的心血管疾病、腎病、乳腺癌及其他婦科惡性腫瘤，家族性糖尿病、高血壓等，近期服用激素類及免疫抑制類藥物者。兩組均為河北省漢族婦女，均無血緣關(guān)系，血壓均正常。兩組年齡、身高、體質(zhì)量等均具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及DNA提取 分別取肘靜脈血1～2 mL，EDTA抗凝，用全血基因組DNA提取試劑盒（北京普博欣生物科技公司）提取基因組DNA。

1.2.2 ACE基因A2350G基因型檢測 引物:上游:5＇-CTGACGAATGTGATGGCCGC-3＇;下游:5＇-TGATGAGTTCCACGTATTTCG-3＇;由上海生工合成。產(chǎn)物經(jīng)8%PAGE膠上加電壓100 V電泳60～80 min，紫外分析儀觀察酶切結(jié)果。A純合子為122 bp，G純合子為19、103 bp 2個片段，AG雜合子為122、103、19 bp 3個片段。

1.2.3 AT1R基因A1166C基因型檢測 引物:上游:5＇-CACCATGTTTTGAGGTTG-3;下 游:5＇-CGAGTTTCTGACATTGTTC-3＇;由上海生工合成。產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠上加電壓100 V電泳60～80 min，紫外分析儀觀察酶切結(jié)果。A純合子為274 bp，C純合子為165、109 bp 2個片段，AC雜合子為274、165、109 bp 3個片段。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。采用直接計數(shù)法計算等位基因的表型頻率，并行Hardy-Weinberg平衡檢驗，分析基因多態(tài)性與Ems的關(guān)系。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗 對兩組ACE基因A2350G、AT1R基因A1166C的基因型頻率分別進行Hardy-Weinberg平衡檢驗，P均＞0.05，表明在所選群體中ACE基因和AT1R基因的等位基因分布已達遺傳平衡，可進一步進行兩組間χ2檢驗。

2.2 兩組 ACE基因 A2350G、AT1R基因 A1166C的基因型分布比較 見表1。

表1 兩組ACE基因、AT1R基因的基因型比較

3 討論

人類ACE基因位于17號染色體長臂區(qū)23帶（17q23），由26個外顯子和25個內(nèi)含子組成，編碼序列長度4.3 kb。ACE常見的多態(tài)位點有插入/缺失（I/D）多態(tài)性、A2350G、A240T等10余個，而位于17號染色體上的A2350G是眾多多態(tài)位點中對血液ACE水平影響最大的。研究發(fā)現(xiàn)，ACE基因A2350G中的G等位基因與血壓和血液中ACE水平偏高明顯相關(guān)，而且這種關(guān)系在女性表現(xiàn)得尤其明顯;去除A2350G的影響因素后，I/D多態(tài)性與血液循環(huán)中ACE水平?jīng)]有相關(guān)性。ACE的活性與血管生成相關(guān)聯(lián)。研究證實，ACE抑制劑培哚普利可以促進心肌血管生成［6，7］。ACE抑制劑還能顯著抑制腫瘤生長和血管生成，并且抑制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達［8］。有研究稱，VEGF 與 Ems的發(fā)病密切相關(guān)［9］。ACE不僅能促進AngⅡ合成，還能降解緩激肽。緩激肽可以刺激有舒張血管功能的細(xì)胞因子的合成，如NO和前列腺素，二者均有抗生長特性。以上文獻均說明，ACE水平和活性的失衡可能會導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異常增生，參與Ems的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)，ACE基因A2350G等位基因G在兩例組的攜帶率要高于對照組，說明ACE基因多態(tài)性可能與Ems的遺傳易感性相關(guān)，與相關(guān)文獻研究結(jié)果一致［10］。由此推測，ACE基因多態(tài)性很可能參與Ems的發(fā)病，但因ACE基因多態(tài)性的分布受種族、地域、研究方法等多方面的影響，所以關(guān)于ACE基因多態(tài)性在Ems的發(fā)病機理中所起的作用仍需進一步研究證實。

AT1R介導(dǎo)RAS的主要生物效應(yīng)。人類AT1R是一種G蛋白耦聯(lián)受體，位于3號染色體長臂21～25區(qū)，為單拷貝基因，長度超過55 kb，包括5個外顯子和4個內(nèi)含子。編碼區(qū)位于第5個外顯子中，而前4個外顯子編碼5＇-非翻譯序列。AT1R基因A1166C多態(tài)性是指其第1 166位核苷酸發(fā)生了AC的置換，由于該多態(tài)性位于3＇-非編碼區(qū)，其確切的生理作用尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)，AngⅡ與AT1R結(jié)合可以刺激人乳腺癌細(xì)胞增殖，這可能與Ems癌前病變的發(fā)病機理有關(guān)。AngⅡ可以誘導(dǎo)NO的生成［11］，而NO被證實參與子宮內(nèi)膜的異位種植、生長和轉(zhuǎn)移［12］。AngⅡ還可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞間黏附因子來促進子宮內(nèi)膜的轉(zhuǎn)移。而AngⅡ與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達的受體結(jié)合可以增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平［13］。這都說明AngⅡ可能參與Ems的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，Ems患者攜帶AT1R基因C等位基因的概率與對照組差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，說明AT1R基因多態(tài)性可能不是Ems獨立的危險因素。但是該結(jié)果也可能與我國漢族人群發(fā)生A1166C位點突變的機率較低有關(guān)，今后還需收集大規(guī)模的人群資料進行深入研究。

總之，本研究結(jié)果表明，攜帶ACE基因G等位基因的孕齡期婦女患Ⅲ、Ⅳ期Ems的危險性增加，ACE基因多態(tài)性可能參與Ems的發(fā)病，但AT1R基因多態(tài)性可能不是Ems發(fā)生的獨立危險因素。

［1］Yoshino O，Osuga Y，Koga K，et al.Concentrations of inter feronginduced protein-10，an antiangiogenic substance，are decreased in peritoneal fluid of women with advanced endometriosis［J］.Am J Reprod Immunol，2003，50（1）:60-65.

［2］雷小敏，龔毅.血清血管內(nèi)皮生長因子水平與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性［J］.山東醫(yī)藥，2006，46（23）:41.

［3］Zhu X，Bouzekri N，Southam L，et al.Linkage and association analysis of angiotensinⅠ-converting enzyme（ACE）-gene polymorphisms with ACE concentration and blood pressure［J］.Am J Hum Genet，2001，68（5）:1139-1148.

［4］Yasumatsu R，Nakashima T，Masuda M，et al.Effects of the angiotensin-Ⅰconverting enzyme inhibitor perindopril on tumor growth and angiogenesis in head and neck squamous cell carcinoma cells［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2004，130（10）:567-573.

［5］Hsieh YY，Chang CC，Tsai FJ，et al.T allele for VEGF gene-460 polymorphism at the 5＇-untranslated region:association with a higher susceptibility to endometriosis［J］.J Reprod Med，2004，49（6）:468-472.

［6］Hsieh YY，Chang CC，Tsai FJ，et al.AngiotensinⅠ-converting enzyme ACE 2350*G and ACE-240*T-related genotypes and alleles are associated with higher susceptibility to endometriosis［J］.Mol Hum Reprod，2005，11（1）:11-14.

［7］Hsieh YY，Lee CC，Chang CC，et al.Angiotensin Ⅰ-converting enzyme insertion-related genotypes and allele are associated with higher susceptibility of endometriosis and leiomyoma［J］.Mol Reprod Dev，2007，74（7）:808-814.

［8］Saridogan E，Djahanbakhch O，Puddefoot JR，et al.TypeⅠ angiotensinⅡ receptors in human endometrium［J］.Mol Hum Reprod，1996，2（9）:659-664.

［9］De Paepe B，Verstraeten VM，De Potter CR，et al.Increased angiotensinⅡ type-2 receptor density in hyperplasia.DCIS and invasive carcinoma of the breast is paralleled with increased iNOS expression［J］.Histochem Cell Biol，2002，117（1）:13-19.

［10］Hsieh YY，Chang CC，Tsai FJ，et al.Angiotensin I-converting enzyme ACE 2350*G and ACE-240*T-related genotypes and alleles are associated with higher susceptibility to endometriosis［J］.Mol Hum Reprod，2005，11（1）:11-14.

［11］Gupta S，Agarwal A，Krajcir N，et al.Role of oxidative stress in endometriosis［J］. Reprod Biomed Online，2006，13（1）:126-134.

［12］Braileanu GT，Simasko SM，Hu J，et al.Effects of arginine-and lysine-vasopressin on phospholipase C activity，intracellular calcium concentration and prostaglandin F2alpha secretion in pig endometrial cells［J］.Reproduction，2001，121（4）:605-612.

［13］Liu Y，Zhuoma C，Shan G，et al.A1166C polymorphism of the angiotensinⅡtype 1 receptor gene and essential hypertensionin Han，Tibetan and Yi populations［J］.Hypertens Res，2002，25（4）:515-521.