慢性胃炎及胃癌組織中膜聯蛋白A1 mRNA的表達變化及意義

楊 華，楊風琴，廖國玲，劉學英

(1寧夏醫科大學檢驗學院，銀川750004;2寧夏檢驗醫學研究所)

膜聯蛋白A1(ANXA1)是一種鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，參與抗炎反應及細胞分化、遷移、增殖、凋亡［1］，是細胞內介導糖皮質激素抗炎作用的一種效應因子［2，3］。ANXA1除具有明顯的抗炎作用外，還與胃癌的發生、發展及轉移有關［4，5］，但其具體作用機制尚不清楚。因此，我們采用熒光實時定量PCR(q-PCR)檢測胃癌及慢性胃炎組織中ANXA1 mRNA的表達，分析其表達與胃癌臨床病理因素的關系，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 寧夏醫科大學總醫院2011年11月～2013年12月收治的手術治療的胃癌患者40例(胃癌組)，取其手術切除的癌組織;20例慢性胃炎組織(胃炎組)取自胃鏡檢查患者;均經病理證實，標本術后0.5～1 h凍存于-70℃冰箱備用。胃癌組男28、女12 例，年齡(58.1 ±9.02)歲;高、中分化腺癌23例，低分化腺癌17例;TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期10例，Ⅲ期19例;胃壁侵犯:T14例、T24例、T312例、T420例;淋巴轉移20例，無淋巴轉移20例。胃炎組男 14例、女 6例，年齡(54.95±10.83)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 組織標本用Trizol提取總RNA。檢測A260～280處吸光值，計算 RNA含量。q-PCR法測定，按試劑說明操作合成cDNA第1鏈。ANXA1 mRNA上游引物為5'-CCACAACTTCGCAGAGTG-3'，下游引物為 5'-CAGAACGGGAAACCATAA-3';βactin上游引物為5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3'，下游引物為 5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT-3'。q-PCR 反應總體積 50 μL，含 2.5 × RealMasterMix/20 × SYBR solution 22.5 μL，0.3 μmol/L 的引物 1.5 μL，cDNA模板2 μL。每次檢測均同法加入陰性對照(不加cDNA)。參照說明書設定PCR程序:預變性95 ℃、2 min;95 ℃、15 s，60 ℃、30 s退火，68 ℃、60 s延伸，共40個循環。每個樣本設3個重復。ANXA1 mRNA相對表達量采用 Pfaffl法［6］進行分析，如果相對表達量＞2.0則為高表達。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。數據資料以±s表示，比較采用Mann-Whitney檢驗。P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組ANXA1 mRNA表達比較 胃癌組ANXA1 mRNA 相對表達量為3.89 ±2.06，90%(36/40)的患者ANXA1 mRNA高表達;慢性胃炎組ANXA1 mRNA相對表達量為 3.74 ±4.69，75%(15/20)的患者ANXA1 mRNA高表達;兩組比較，P均＞0.05。

2.2 ANXA1 mRNA表達與胃癌臨床病理參數的關系 ANXA1 mRNA表達與胃癌患者的年齡、性別及胃壁侵犯、TNM分期、組織分化、淋巴結轉移無關(P均 ＞0.05)。見表1。

表1 ANXA1 mRNA表達與胃癌臨床病理參數的關系(± s)

表1 ANXA1 mRNA表達與胃癌臨床病理參數的關系(± s)

臨床病理參數 n ANXA1 mRNA P年齡(歲)＜60 22 3.68 ±2.25≥60 18 4.14 ±1.84 0.28性別男12 3.72 ±1.50 0.71胃壁侵犯T1 4 3.47 ±0.77 T2 4 3.75 ±2.26 T3 12 4.32 ±2.48 0.58 T4 20 3.74 ±2.02淋巴結轉移N0 20 3.64 ±2.16 N123 20 4.14 ±1.98 0.64 TNM分期Ⅰ11 3.27 ±2.40Ⅱ10 3.72 ±1.27 0.60Ⅲ19 4.34 ±2.17組織分化高、中 23 3.93 ±2.23低17 3.83 ±1.87 28 3.96 ±2.68女0.76

3 討論

慢性炎癥可促進腫瘤的發生，并與腫瘤細胞形成、逃逸、浸潤、血管生成、轉移等多個環節相關，但確切機制尚未明確。例如，幽門螺桿菌感染導致的炎癥過程，可由慢性胃炎發展到胃黏膜萎縮、腸上皮化生、不典型增生，最后可發展為胃癌［7］。

ANXA1是一種抗炎蛋白。在炎癥反應中，ANXA1可以從胞質轉移至胞膜，使損傷部位炎性細胞減少［8］。而且，ANXA1通過抑制磷脂酶A2和誘導型一氧化氮合酶的活化發揮抗炎作用［3］。此外，ANXA1也參與細胞的分化、遷移、生長與凋亡［8］。一些研究組通過DNA芯片技術發現，ANXA1基因在胃癌發生中是一個潛在的標記［9，10］。然而，ANXA1在胃癌組織中的作用是不確定的。

在本研究中，我們檢測了胃炎組織與胃癌組織中ANXA1 mRNA的表達情況，結果發現ANXA1 mRNA在胃癌組織中相對高表達，用β-actin參照基因標準化處理后，其中90%的病例呈高表達水平。同樣，慢性胃炎組織中75%的病例ANXA1 mRNA高表達(平均相對表達量為3.74)，二者之間差異沒有統計學意義。

ANXA1 mRNA在腫瘤中的表達過程仍然有限，其結果是相互矛盾的。例如，在食管鱗狀細胞癌［11］、鼻腔鼻竇腺癌［12］和乳腺癌［13］等腫瘤中，ANXA1 mRNA 表達缺失;然而，在腸腺癌［14］、尿道上皮癌［15］和肺腺癌［16］等腫瘤中，ANXA1 mRNA 過度表達。從而表明，ANXA1表達水平可能與組織或腫瘤類型有關。

本研究中，我們也分析了ANXA1 mRNA表達與胃癌臨床病理參數的關系。結果顯示ANXA1 mRNA表達與胃癌患者的年齡、性別及胃壁侵犯、TNM分期、組織分化、淋巴結轉移等沒有相關性。這可能與樣本數量過少有關，進一步研究中應增大樣本量。

總之，本研究顯示ANXA1 mRNA在慢性胃炎及胃癌組織中均高表達，提示可能在胃癌發生的早期階段ANXA1就上調表達，但其具體作用機制還有待于進一步探討。

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