OPN siRNA慢病毒載體的構建及其對大腸癌細胞增殖的抑制作用

邢譯文，白 靜，范維寧，劉 鑫，周林林，徐廣賢,2*

(寧夏醫科大學 1.檢驗學院; 2.總醫院 醫學實驗中心，寧夏 銀川 750004)

OPN siRNA慢病毒載體的構建及其對大腸癌細胞增殖的抑制作用

邢譯文1，白 靜1，范維寧1，劉 鑫1，周林林1，徐廣賢1,2*

(寧夏醫科大學 1.檢驗學院; 2.總醫院 醫學實驗中心，寧夏 銀川 750004)

目的構建OPN-siRNA的慢病毒載體，探討其對結腸癌SW480細胞增殖的調節作用。方法設計合成針對OPN的siRNA序列，退火形成雙鏈DNA并克隆到pSicoR質粒后，包裝重組慢病毒。應用Real-time PCR及Western blot檢測病毒刺激SW480細胞后OPN的mRNA和蛋白的表達水平，應用MTT法檢測慢病毒對SW480細胞增殖的調節作用。結果成功構建了攜帶OPN-siRNA的重組慢病毒。該重組慢病毒可使SW480細胞內OPN的mRNA和蛋白的表達降低，LV-siRNA-OPN慢病毒對SW480細胞增殖有明顯的抑制作用(Plt;0.05)。結論成功構建的LV-siRNA-OPN慢病毒可以有效抑制SW480細胞內OPN的mRNA和蛋白表達， 并抑制SW480細胞的增殖。

OPN； siRNA；慢病毒；SW480細胞

骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種具有多種功能的分泌型Ⅰ鈣結合磷酸化糖蛋白，OPN分布廣泛，并受多種因素的調控，能與多種物質結合，發揮不同的生物學作用。近年來有大量的研究表明，OPN可以參與腫瘤細胞的黏附、浸潤和轉移等過程，是一種與諸多腫瘤的發生、發展、浸潤、轉移相關的蛋白質[1]。其表達水平與腫瘤的惡性程度、預后和復發也具有密切的關系[2]。揭示OPN作為一個重要的腫瘤相關因子，具有重要的臨床意義。RNA干擾技術(RNA interference，RNAi)是近年來被公認的研究基因功能最重要的技術之一，在腫瘤的靶向研究中顯示了其強大的作用，RNA干擾技術能特異地抑制靶基因的轉錄，進而下調相應蛋白表達[3]。……