泛素連接酶MDM2促進(jìn)外源NOLC1的泛素化和降解

王小蓉，郭正光，高友鶴

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 生理與病理生理系 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點實驗室， 北京 100005)

泛素連接酶MDM2促進(jìn)外源NOLC1的泛素化和降解

王小蓉，郭正光*，高友鶴*

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 生理與病理生理系 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點實驗室， 北京 100005)

目的研究泛素連接酶MDM2對其調(diào)節(jié)因子NOLC1的泛素化和降解。方法克隆原核表達(dá)了NOLC1全長蛋白和其核定位信號區(qū)域，在體外泛素化體系中利用有泛素連接酶活性的重組MDM2研究其對NOLC1的泛素化。在哺乳動物細(xì)胞中，研究MDM2對外源轉(zhuǎn)染的NOLC1的降解。結(jié)果在體外泛素化體系中MDM2泛素化NOLC1全長和其核定位信號區(qū)域；在哺乳動物細(xì)胞中，MDM2促進(jìn)外源NOLC1降解超過70%，且NOLC1的降解通過蛋白酶體途經(jīng)實現(xiàn)。結(jié)論MDM2促進(jìn)外源NOLC1的泛素化和降解，為研究MDM2-TP53-NOLC1之間的相互調(diào)節(jié)提供了新的線索。

泛素連接酶；泛素化；MDM2；NOLC1

MDM2是一種重要的RING FINGER類單亞基泛素連接酶。MDM2基因最早從NIH3T3細(xì)胞系中分離出來，在小鼠腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)MDM2作為一種泛素連接酶， 參與著名抑癌基因P53/TP53的泛素化，并導(dǎo)致其通過蛋白酶體途經(jīng)降解[3-4]。 除了P53/TP53之外，近年研究還鑒定到更多MDM2的底物，包括CDKN1A、 HIPK2、RB1、CDH1、DLG4、IGF1R、APEX1、ADRBK1、ARRB、ARRB2、CREBBP、EID1、IRS1、JMY、KAT2B、KAT5、MDM4、NFATC2、NOL3、RPL26和MDM2自身[5]。MDM2作為一個癌基因，通過與其他蛋白相互作用，和泛素化它的底物參與許多細(xì)胞的生理和病理過程，包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和腫瘤發(fā)生。

NOLC1是一個具有類轉(zhuǎn)錄因子活性的蛋白，參與細(xì)胞核組裝[6]和前體rRNA剪切[7]，參與細(xì)胞周期和細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)[8]。NOLC1參與多種信號傳導(dǎo)通路，如NF-kB信號通路、PKA信號通路[9]和CK2的激活[10]。……