華游蛇PLIγ模擬肽的設(shè)計(jì)與活性驗(yàn)證

鐘立鵬，郭 薇，姚 敏，沈 婷，楊 武，黃春洪,2*

(南昌大學(xué) 1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室; 2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江西 南昌 330006)

研究論文

華游蛇PLIγ模擬肽的設(shè)計(jì)與活性驗(yàn)證

鐘立鵬1，郭 薇1，姚 敏1，沈 婷1，楊 武1，黃春洪1,2*

(南昌大學(xué) 1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室; 2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江西 南昌 330006)

目的設(shè)計(jì)華游蛇血清PLIγ模擬肽并研究其對(duì)PLA2抑制作用。方法用RT-PCR方法克隆華游蛇PLIγ基因并測(cè)序進(jìn)行序列比對(duì)。基于華游蛇PLIγ序列設(shè)計(jì)一個(gè)長(zhǎng)度為19個(gè)氨基酸的多肽。利用Auto dock分子對(duì)接分析該19肽與sPLA2相互作用，運(yùn)用瓊脂糖平板法驗(yàn)證其對(duì)sPLA2的抑制效果，并通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測(cè)其抗sPLA2出血毒性。利用LPS誘導(dǎo)小鼠Raw264.7細(xì)胞炎性反應(yīng)，檢測(cè)細(xì)胞花生四烯酸含量以評(píng)價(jià)19肽對(duì)細(xì)胞sPLA2酶活性抑制作用。結(jié)果設(shè)計(jì)得到的華游蛇PLIγ模擬肽序列為PGLPLSYPNGGGGSVAFRS。該19肽較好地抑制蛇毒PLA2 酶活性和出血毒性，并可以顯著減少LPS誘導(dǎo)Raw264.7炎性細(xì)胞中花生四烯酸含量，IC50為86.3μmol/L。結(jié)論本文設(shè)計(jì)的華游蛇PLIγ模擬肽，具備了天然PLIγ的活性，具有抗細(xì)胞炎性反應(yīng)和蛇毒出血毒作用。

華游蛇PLIγ，sPLA2，分子對(duì)接，炎性反應(yīng)

在蛇血清中存在一類(lèi)天然的PLA2抑制劑(phospholipase A2 inhibitor，PLI)，它可以抑制蛇毒PLA2毒性。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，蛇PLI具有 α、β及γ 3種類(lèi)型，其中PLI γ分布廣泛、對(duì)蛇毒PLA2抑制活性強(qiáng)而受到廣泛關(guān)注[1-2]。本實(shí)驗(yàn)前期從華游蛇(sinonatrix percarinata)血清中分離得到了一個(gè)PLIγ，在所篩選的6種蛇血清中，其PLA2抑制活性最強(qiáng)，可作為廣譜型抗炎性反應(yīng)和抗蛇傷藥物的前體[3]。然而，由于大分子蛋白質(zhì)的強(qiáng)免疫原性和不穩(wěn)定性，限制了蛋白質(zhì)藥物的開(kāi)發(fā)。……