miR-30a表達載體構建、病毒包裝和表達活性的檢測

劉 玥，帥 春，尹 虹，宋艷斌*，馬文麗*

(1.南方醫科大學 基因工程研究所， 廣東 廣州 510515; 2.廣東省婦幼保健院 新生兒科 越秀院區， 廣東 廣州 510000)

miR-30a表達載體構建、病毒包裝和表達活性的檢測

劉 玥1，帥 春2，尹 虹1，宋艷斌1*，馬文麗1*

(1.南方醫科大學 基因工程研究所， 廣東 廣州 510515; 2.廣東省婦幼保健院 新生兒科 越秀院區， 廣東 廣州 510000)

目的構建攜帶miR-30a的慢病毒表達載體，為研究miR-30a在慢性粒細胞白血病中的作用機制及對伊馬替尼耐藥性的影響奠定基礎。方法提取人骨髓細胞基因組DNA，擴增miR-30a的前體序列，克隆到plVTHM慢病毒表達載體上，測序鑒定。重組載體進行病毒包裝，感染K562細胞，測定病毒滴度。感染的K562細胞用流式細胞儀分選帶有綠色熒光的GFP陽性的細胞，對分選的細胞用實時熒光定量PCR法檢測miR-30a在細胞內的表達水平。最后用CCK-8法檢測各組細胞的增殖情況。結果重組慢病毒表達載體測序完全正確；病毒滴度檢測為6×106TU/mL；選用160 μL病毒液/1 mL培養基感染K562細胞；感染的K562細胞中miR-30a的表達水平顯著增強(Plt;0.05)；過表達miR-30a后K562細胞增殖水平顯著下降(Plt;0.05)。結論成功構建了miR-30a慢病毒表達載體，并可在K562細胞中穩定表達，且miR-30a有抑制K562細胞增殖的作用。

miR-30a；慢病毒表達載體；載體構建

miRNA是一類長21～25 nt的小分子非編碼單鏈RNA的總稱，不編碼任何蛋白質，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基互補配對，引起靶mRNA降解或者抑制其翻譯，從而對基因進行轉錄后的表達調控，在生物的各項生理活動和生長發育過程中發揮著重要作用[1]。miR-30a位于人6號染色體長臂(6q13)，和腫瘤的發生[2]、轉移[3]、侵襲[4]和治療[5]等有密切關系。……