TNF-α、IL-8在潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型中的表達

范玉晶 裴鳳華 宋吉濤 劉冰熔

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)屬于炎癥性腸病，它是一種慢性的、非特異性的結(jié)腸炎癥，其病因和發(fā)病機制目前尚不清楚。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣的改變，UC的發(fā)病率逐年上升。有研究發(fā)現(xiàn)，細胞因子的表達異常在UC的疾病進程中發(fā)揮重要作用［1］。本研究通過檢測UC大鼠模型結(jié)腸組織中TNF-α、IL-8的表達情況，探討其在UC發(fā)病中的作用和臨床意義。

資料與方法

一、實驗動物及模型制備

清潔級SD大鼠30只(由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院實驗動物中心提供)，隨機抽取20只為模型組，另外10只作為對照組。體重200～250 g，體質(zhì)健康。SD大鼠首先適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，正常進食、進水，保持飼養(yǎng)環(huán)境適宜。確定大鼠健康后，全部禁食、不禁水24h。腹腔注射10%水合氯醛(0．2 ml/100 g)將大鼠麻醉，固定。將外徑2．0 mm，長約15 cm左右的輸液管，用液體石蠟浸潤后，從大鼠肛門逆行插入結(jié)腸內(nèi)約 8．0 cm處，一次性將100 mg/kg 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)和 50% 乙醇的TNBS/乙醇液0．25 ml注入大鼠結(jié)腸內(nèi)，用棉簽堵住大鼠肛門，輕揉大鼠腹部1 min，使TNBS/乙醇液均勻地與大鼠結(jié)腸粘膜接觸。然后將大鼠頭向下，身體傾斜45度，放置1 min，再將大鼠放平自然清醒。3 d后，腹腔注射10%水合氯醛(0．2 ml/100 g)，將大鼠麻醉，剖開大鼠腹腔，剪取直腸和結(jié)腸組織，清洗后肉眼觀察結(jié)腸組織，并取腸段(10%甲醛溶液中固定)作組織切片以確定造模是否成功。造模組肉眼觀查可見結(jié)腸粘膜充血、水腫、糜爛、出血、潰瘍;顯微鏡下顯示隱窩有急性炎細胞浸潤，固有膜內(nèi)有慢性炎細胞浸潤。

二、標(biāo)本采集和檢測方法

取正常組及模型組4 mm×10 mm大小的結(jié)腸黏膜組織。勻漿后，分離上清液，置入－80℃冰箱待檢。三硝基苯磺酸(TNBS)購自Sigma公司;檢測TNF-α、IL-13均采用 ELISA 法。TNF-α 試劑盒、IL-13試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。操作按說明書嚴格進行。所有標(biāo)本均同批檢測。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS16．0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以均數(shù)±SD表示，兩組間資料比較采用t檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

20例潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型結(jié)腸組織中TNF-α、IL-13水平有明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)(表 1)。

表1 對照組與UC組中TNF-α、IL-8水平比較表± s，ng/L)

表1 對照組與UC組中TNF-α、IL-8水平比較表± s，ng/L)

組別 對照組 UC組 t值 P值10 20 TNF-α 20．4 ±4．6 35．3 ±2．6 2．154 0．020例數(shù)IL-18 28．4 ±3．6 40．2 ±3．2 1．727 0．048

討 論

UC是一種病因未明的腸道非特異性慢性炎癥。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣的改變，潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率逐年上升。由于本病具有治愈難度大，容易反復(fù)發(fā)作且有并發(fā)結(jié)腸癌的特點，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。因此，查找病因進而尋找有效地治療方法已成為潰瘍性結(jié)腸炎研究的一項重要任務(wù)。

UC的發(fā)病機制目前尚不清楚，環(huán)境、遺傳、感染和免疫因素等多因素的相互作用被認為導(dǎo)致了疾病的發(fā)生和發(fā)展，大多數(shù)學(xué)者認為具有免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子(cytokines，CK)在UC的發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮著不可替代的重要作用［1］。正常人群細胞因子中促炎因子和抗炎因子的平衡狀態(tài)一旦被打破，將會導(dǎo)致疾病的發(fā)生［2］。目前認為促炎因子和抗炎因子之間的失衡是UC發(fā)病的重要機制之一。

IL-8主要的生物學(xué)作用是激活中性粒細胞，促進中性粒細胞的溶酶體酶活性和吞噬作用，趨化嗜堿性粒細胞和T細胞。它是由單核細胞、上皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞及T淋巴細胞在IL-1、TNF和外源性因子細菌多糖(LPS)的刺激下產(chǎn)生的，目前認為TNF、IL-1、IL-6誘發(fā)的炎癥反應(yīng)在很大程度上是通過誘導(dǎo)產(chǎn)生以IL-8為代表的趨化因子所介導(dǎo)的［3］。

TNF-α是一種促炎癥細胞因子，又被稱為分化誘導(dǎo)因子，是機體炎癥反應(yīng)與免疫反應(yīng)應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子之一［4］。TNF-α主要表達在巨噬細胞、中性粒細胞及淋巴細胞的胞漿中。TNF-α可使中性粒細胞聚集產(chǎn)生呼吸爆發(fā)，脫顆粒，它不僅能刺激巨噬細胞、纖維母細胞、平滑肌細胞、上皮細胞和內(nèi)皮細胞分泌花生四烯酸代謝物、細胞因子和蛋白酶，還能吞噬細胞產(chǎn)物和補體片段引起細胞壞死、間質(zhì)中蛋白質(zhì)破壞和水腫的發(fā)生，從而在腸道免疫反應(yīng)中介導(dǎo)黏膜損傷的發(fā)生發(fā)展，繼而參與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病過程。

本研究發(fā)現(xiàn)，UC組TNF-α、IL-8水平明顯高于對照組，有顯著性差異(P＜0．05)。因此考慮TNF-α、IL-8表達水平的增加可能參與了UC的發(fā)生、發(fā)展。綜上所述，TNF-α、IL-8參與了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生及發(fā)展過程，但其具體機制尚未明了，所以需要進一步研究探討，以期為UC的臨床及藥物治療手段提供新的理論依據(jù)。

［1］ 桑力軒，劉漢立，姜敏．潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制研究進展．世界華人消化雜志，2007，15(2):2249-2254．

［2］ 林平，伍楊，黃華，等．細胞因子與潰瘍性結(jié)腸炎．湖北民族學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2003，20(4):28-30．

［3］ ReddyKP，Markowitz JE，RuchelliED，et al．Lamina propria and circulating interleukin-8 in newly and previously diagnosed pediatric inflammatory bowel disease patients· Dig Dis Sci，2007，52(2):365-372．

［4］ 王萬卷，陳麗，王曉鵬，等．尋常型銀屑病皮損中腫瘤壞死因子-α、基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制劑-1的表達．西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2007，28(3):322-324．

范玉晶，裴鳳華，宋吉濤，等．TNF-α、IL-8與潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型中的表達［J/CD］．中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2014，3(2):102-103．