DNA-PKcs蛋白在食管癌組織中的表達及臨床病理相關性研究

王昆侖，徐曉霞，張忠獻，劉 楊，任景麗，袁 翎

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院放療科 河南鄭州 450008;2.鄭州大學第二附屬醫院病理科 河南鄭州 450014)

DNA雙鍵斷裂是細胞發生癌變和死亡的重要原因。DNA-PKcs是修復DNA雙鍵斷裂、維護生物體基因組穩定的關鍵酶。有研究顯示DNA-PKcs蛋白的分布和腫瘤的易感性、預后以及抗腫瘤治療的敏感性密切相關［1］，但和食管癌關系的報道較少見，因此了解DNA-PKcs在食管癌組織中的表達及其和臨床病理的關系對食管癌風險評估、預后判斷有現實的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集河南省腫瘤醫院2009年1月至2011年12月病理診斷確診并手術切除食管癌患者共41例，分別采集患者的食管癌組織、癌旁組織(距腫瘤邊緣約1～2 cm組織)以及正常組織(距腫瘤邊緣＞5 cm組織)。患者年齡 32～76歲，平均(51.27±7.19)歲，其中男性23例，女性18例，所有病例均有完整的臨床資料及完好的存檔蠟塊。病理類型為鱗狀細胞癌者28例，腺癌4例，其他病理類型9例(腺鱗癌3例，未分化癌2例，肉瘤1例，癌3例);低分化12例，中分化12例，高分化23例;病理分期為Ⅰ期5例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例。

1.2 方法和主要試劑 實驗采用免疫組化SP法，使用的主要試劑包括:DNA-PKcs濃縮型單克隆抗體、SP超敏試劑盒(鼠/兔抗)、胰酶消化試劑盒，DAB顯色液等。

1.3 免疫組化結果的評定 DNA-PKcs為核蛋白，細胞核被染色呈棕黃色即為陽性表達細胞。顯微鏡下觀察免疫組化染色后的病理切片，對每1張病理切片計數5個高倍視野(40×10)中細胞陽性表達數，以視野中陽性表達數占細胞總數的百分比來表示DNA-PKcs蛋白表達水平。“－”為陽性細胞表達率小于5%、“+”為5%～50%之間、“++”為50%～90%之間、“+++”為陽性表達細胞率大于90%。

1.4 統計學分析 采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行處理和分析，定性資料采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 癌組織、癌旁組織和正常組織中DNA-PKcs蛋白表達情況 癌組織DNA-PKcs蛋白表達陽性率最高(87.8%)，其次為癌旁組織(63.4%)，正常組織 DNAPKcs表達陽性率最低(51.2%)。癌組織、癌旁組織和正常組織3組比較DNA-PKcs蛋白表達差異有統計學意義(P＜0.05)，癌組織與癌旁組織和正常組織DNAPKcs表達兩兩比較差異均有統計學意義(P＜0.05);而癌旁組織陽性率高于正常組織，但差異無統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 癌組織、癌旁組織和正常組織中DNA-PKcs蛋白表達情況［n，(%)］

2.2 DNA-PKcs蛋白表達臨床病理特征的關系 DNA-PKcs蛋白表達在高分化組中陽性率為100%，在中分化組中陽性率為50%，在低分化組中陽性率為75%，3組間差別有統計學意義(P＜0.05);DNA-PKcs蛋白表達3組間兩兩比較高分化組與中分化組差異有統計學意義(P＜0.05)，而其他兩兩比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。DNA-PKcs蛋白表達與患者性別、年齡、病例類型和pTNM分期無關。見表2。

3 討論

DNA依賴蛋白激酶催化單位(DNA-PKcs)是DNA雙鏈損傷修復中關鍵酶。當各種因素引起DNA雙鏈斷裂時，DNA蛋白激酶的亞單位Ku70和Ku80迅速形成異源二聚體，與受損的DNA末端結合，通過非同源性末端接合(NHEJ)途徑激活DNA-PKcs組成DNA依賴蛋白激酶，在DNA修復中發揮重要作用。

研究結果表明，食管癌癌組織DNA-PKcs蛋白表達陽性率高于癌旁組織和正常組織，且差異有統計學意義，這與胡航榮［2］對食管癌不同組織之間 DNAPKcs蛋白表達陽性率研究結果一致，也與其在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌患者中不同組織表達情況一致［3-4］，提示 DNA-PKcs蛋白表達可能參與了食管正常細胞向惡性細胞轉變的過程。黃梅芳等［3］發現DNA-PKcs蛋白表達與肺癌病理類型和病理分期有關，病理分期越晚，其表達越強，細支氣管肺泡癌表達高于其它肺腺癌，且均高于肺腺鱗癌，而本研究結果顯示，食管癌DNA-PKcs蛋白表達與病理類型和病理分期無關，提示DNA-PKcs蛋白表達情況與癌癥類型有關。有研究［2］發現DNA-PKcs蛋白表達隨腫瘤分化程度增高而增高，本研究結果也顯示DNA-PKcs蛋白表達與食管癌組織的分化程度有關，高分化組表達強于中分化組和低分化組，且與中分化組差異有統計學意義，提示DNA-PKcs可能是預測食管癌分化程度的一項重要指標，有可能成為食管癌指示食管癌放療預后的生物學標志物。同時食管癌低分化組DNA-PKcs蛋白表達要高于中分化組，但差異無統計學意義，可能與分化程度各組樣本例數較少，產生統計學偏倚有關。

表2 DNA-PKcs蛋白表達臨床病理特征的關系［n，(%)］

綜上所述，DNA-PKcs蛋白表達與性別、年齡、病理類型和病理分期無關，與腫瘤分化程度有關，高分化組高于中分化組和低分化組，且癌組織表達高于癌旁組織和正常組織。這一結論可為食管癌的放療個體化治療方案的制定和預后判斷提供依據。

［1］蔡榮，張麗珍.DNA依賴蛋白激酶的研究新進展［J］.醫學綜述，2013，19(7):1182-1185.

［2］胡航榮.DNA-PK在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義［D］.重慶醫科大學，2007:11-12.

［3］黃梅芳，李文輝，楊振峰，等.DNA-PKcs在云南宣威富源肺腺癌組織中的表達與分期及病理相關性探討［J］.云南醫藥，2009，30(4):407-410.

［4］王萬鵬，宋德霸，趙龍栓.DNA-PKcs蛋白和MGMT蛋白在肝癌組織中的表達及意義［J］.山東醫藥，2010，50(7):70-71.