實驗蝗蟲精巢的壓片及觀察實施措施

何生祥

摘 要：本文從蝗蟲染色體組成、蝗蟲性成熟時間、雌雄蝗蟲分辨、解剖方法、精巢的識別和固定、保存等方面對教材進行了詳細的補充，有助于實驗教師方便、有效地備課和準備實驗，有利于推動生物實驗的普及和開展。

關鍵詞：實施；措施

中圖分類號：G632 文獻標識碼：B 文章編號：1002-7661（2014）08-226-01

北師大版高中生物教材必修2中的實驗“蝗蟲精巢的壓片及觀察”選取性成熟的雄蝗蟲為觀察減數分裂的實驗材料，主要是因為蝗蟲精巢取材方便，標本制備方法簡單，染色體數目較少，分裂過程清楚。蝗蟲初級精母細胞染色體數2n=22+X，經過減數分裂形成四個精細胞，每個精細胞染色體數為n=11+X或n=11，分裂各期圖像明顯，實在是不可多得的材料（蝗蟲的性別決定與人類不同，雌性有兩條XX染色體，雄性為XO，即只有一條X染色體，沒有Y染色體）。

但此實驗卻往往難以開展，主要原因在于：1實驗時間與雄蝗蟲性成熟時間不一致（雄蝗蟲性成熟時間為8月—9月，而必修2教材的上課時間為3月—6月），實驗材料難以采集；2如想另選材料，則難以找到合適的替代材料；3 北師大版教材配套的教師用書上對此實驗沒有完善的補充資料，而且在網上查不到北師大版教材的相關資料，不利于實驗教師備課和準備實驗。

經過兩年來的實驗探索、參考相關資料和對新教材進行研究，本人找到了解決問題的一些方法，在此詳述如下，以供大家探討，并期待指正。

一、捕捉雄蝗蟲

雄蝗蟲性成熟時間8月—9月，以8月15日至20日之間捕捉為宜。此時蝗蟲精母細胞正處于減數分裂旺期，為利于學生完成實驗，可適當延長到9月10日，但此時的減數分裂高峰期已過，處于分裂期的細胞數量相對較少。蝗蟲雌雄個體的區別方法：一般雄蟲個體較小，其腹部末端為交配器，形似船尾，而雌體較大，腹部末端分叉。

二、蝗蟲的解剖和精巢的固定：

要制作清晰、處于分裂期細胞較多的蝗蟲精巢減數分裂裝片，必須要活體解剖蝗蟲：捕捉后將雄蟲麻醉，去掉第一對步足及翅，在翅基部后方，用解剖剪將其體壁剪開，可見到在其上部兩側各有一塊黃色的團塊，這便是蝗蟲的精巢（精巢由許多排列在一起的精巢小管組成，這些小管就是精細管），取出精巢，去除脂肪，立即放入CarnoyⅠ固定液（冰醋酸：乙醇=1：3）中固定12小時，用吸水紙吸去固定液，然后分別用95%和85%乙醇脫水各30min（解離、脫水并利于保存組織中的核酸），最后放在70%乙醇中，于4℃冰箱中保存，時間不能超過一年。

固定的目的是采用滲透力強大的固定液能迅速穿透細胞將細胞殺死，使蛋白質沉淀，盡量保持原有的狀態并維持染色體結構的完整性，還能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染色效果。這樣把活細胞固定后，有利于后續的解離和染色。

解決了材料的采集和固定問題，在什么時間進行實驗，就可以根據教學進度來安排了。到時按照教材上的實驗方法完成實驗。

三、實驗

1、染色

挑取一段精細管，置染色皿上，洗去保存液并吸干，滴加一滴醋酸洋紅染色液，鑷子輕輕撕開稍稍搗碎，染色5～15 min。

2、壓片

將染了色的精細管，置載玻片上，進一步搗碎，再滴加一滴醋酸洋紅染色液，加蓋玻片，在酒精燈上快速通過2-3次，蓋上吸水紙，用拇指隔著吸水紙將材料適當用力壓之，再用帶橡皮頭的鉛筆輕輕敲擊蓋片，使細胞分散成單層細胞（敲擊時勿使蓋片移動）。

3、觀察

對照教材上圖2-8，在低倍鏡下找到蝗蟲精母細胞減數分裂的各個時期，再轉到高倍鏡下仔細觀察。

通過顯微鏡，可看到除正在進行湊數分裂的細胞外，還可看到精原細胞的有絲分裂，其細胞肥大，屬于體細胞的一般有絲分裂，染色體看上去比減數分裂細胞為多，因此要注意區分。

通過以上方法，既保證了實驗效果，又使得實驗時間不愛限制，有助于實驗教師方便、有效地備課和準備實驗，有利于推動生物實驗的普及和開展。

參考文獻：

[1] 王蕓慶 謝榮林《細胞生物學實驗手冊》第四版.人民教育出版社，1995（1）

[2] 彩萬志《普通昆蟲學》中國農業大學出版社，2001（7）

[3] 《水稻根尖染色體標本制備》

[4] 《病理制片技術手冊》第二章組織固定