p85α基因在卵巢癌中表達及臨床意義研究

劉俊毅

[摘要] 目的 觀察p85α基因在卵巢癌組織中的表達，探討其與卵巢癌發生的關系及用于卵巢癌的早期診斷與治療的臨床意義。方法 選取檢測卵巢癌組織（66例）、癌旁組織（66例）及正常卵巢組織（17例）三個不同組織作為檢測對象，采用免疫組化檢測技術檢測p85α基因表達產物及探討p85α基因表達與卵巢癌臨床特征的關系。結果 p85α基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即為該基因在卵巢癌組織中與癌旁組織、正常卵巢組織相比都較高，差異有統計學意義（P<0.05），p85α基因表達與卵巢癌的發病年齡關系差異無統計學意義（P>0.05），而與不同的臨床分期、淋巴結的轉移情況比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 PI3K p85α基因的異常表達可以作為卵巢癌早期診斷和判斷其生物學特性的指標。

[關鍵詞] p85α基因；卵巢癌；表達率；臨床意義

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）07（c）-0017-02

[Abstract] Objective To observe the expression of p85α gene in ovarian cancer tissues and explore its relationship with the occurrence of ovarian cancer and its clinical significance for the early diagnosis and treatment of ovarian cancer. Methods We chose ovarian cancer tissues （66 cases）， ovarian cancer adjacent tissues （66 cases） and normal ovarian tissues （17 cases）， three different kinds of tissues as the detection objects. Immunohistochemical technique was used to detect p85α gene expression. The relationship between p85α gene expression and the clinical features of ovarian cancer was investigated. Results The expression rate of p85α gene in ovarian cancer tissues， ovarian adjacent cancer tissues and normal ovarian tissues was 68.2%， 59.1%， 11.8%， respectively， the expression rate of p85α gene in ovarian cancer tissues was higher than that in the ovarian adjacent cancer tissues and normal ovarian tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）； p85α gene expression had no significant correlation with the age of onset of ovarian cancer （P>0.05）， but in clinical stage and lymph node metastasis there was statistical significance （P<0.05）. Conclusion The abnormal expression of PI3K p85α genes can be used as the indicator for early diagnosis of ovarian cancer and determination of its biological characteristics.

[Key words] p85α gene； Ovarian cancer； Expression rate； Clinical significance

經研究表明，磷脂酸肌醇-3激酶（PI3Ks）和Ras通路與腫瘤疾病的發生發展關系較為密切，它是在Ras通路之后被發現的又一新的信號傳導通路[1]。該通路調節腫瘤細胞的增殖與分化，其活性異常不僅能導致正常細胞惡化，而且還與癌變細胞的粘附、遷移、腫瘤血管生成以及細胞外基質的降解等相關[2]。在PI3K家族中，IA型PI3K能被細胞表面酪氨酸激酶受體激活，它是由p85調節亞基和p110催化亞基組成，p85調節亞基和p110催化亞基具有協同作用，其中p85調節亞基對于p110催化亞基的穩定、聚集以及IA型PI3K的激活是必不可少的，PI3K基因的家族中表達最活躍的也為p85α基因，通過PIK3R1進行編碼；該基因在體內的表達或者突變都可對PI3K的傳導產生影響，與腫瘤的發生密切相關[3-4]。為觀察p85α基因在卵巢癌組織中的表達，探討其與卵巢癌發生的關系及用于卵巢癌的早期診斷與治療的臨床意義，該研究選取2010年12月—2012年12月間該院患者結合p85α基因在卵巢癌中的表達，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集婦產科卵巢癌手術切除病例66例，行全面分期手術，年齡35～77歲，平均年齡48.6歲。以上所有病例均經術后病理證實。取材后液氮保存。按照FIGO 2000年修訂的國際婦產科聯盟分期標準進行臨床分期： II期38例，III期28例；全部標本在手術前均沒有接受過化療和放療，所有組織均先用10%福爾馬林溶液固定，然后再用石蠟予以包埋，分別進行HE染色和免疫組織化學染色。取非腫瘤性原因切除的正常卵巢組織標本17例作為正常對照，濃縮型羊抗人ZNF217多克隆抗體和免疫組化試劑盒分別由abcam生物公司及北京中杉金橋公司生產。endprint

1.2 免疫組化法

按即用型二步法檢測試劑盒說明進行抗PI3Kp85α（1：100）免疫組織化學染色，陰性對照組通過PBS來替代一抗。

1.3 結果評估標準

PI3Kp85α蛋白的顏色為棕黃色的顆粒物質。不同的染色顏色其計分的標準也不一致，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計分為0、1、2、3分；在物鏡一致的條件下根據陽性細胞數計分標準如下：≤25%記1分，26%～50%為記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。最終的計分結果為上述兩種方式分數的乘積，結果為陰性、弱陽性（+）、中等陽性（++）、強陽性（+++）所對應的分值分別為0、1～3、4～5、>5分。

1.4 統計方法

使用SPSS13.0對研究數據進行統計分析，所有的資料都服從正態分布，通過t檢驗分析計量資料間的差異，χ2檢驗分析計數資料之間的差異。

2 結果

2.1 不同組織中p85α基因的表達

p85α基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌組織中的表達率明顯高于癌旁組織和正常卵巢組織，差異有統計學意義（χ2=4.31，P<0.05），見表1。

3 討論

卵巢癌是發生于卵巢表面體腔上肢和其下方卵巢間質的惡性腫瘤，常發生于中年婦女，發病率僅次于子宮體癌和子宮頸癌，位居危害婦女健康疾病的第3位，目前該病的發生率有增無減，由于腫瘤細胞易擴散而使得化療不能徹底，也增加了靶向治療的難度，提高了卵巢癌患者的死亡率，這給婦女的生命健康帶來嚴重威脅[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦無明顯癥狀、體征，現今也缺乏早期診斷方法，雖然國內外有報道應用卵巢癌單克隆抗體等技術可發現早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就診時已屬晚期。其發病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環境等有關目前治療主要以手術為主[6]。

研究發現，PI3K基因的家族中表達最活躍的也為p85α基因，通過PIK3R1進行編碼；該基因在體內的表達或者突變都可對PI3K的傳導產生影響，與腫瘤的發生密切相關。激活PI3K基因可生成PIP3這一第二信使，接著在細胞中與信號蛋白AKT以及PDK 1相結合，從而活化AKT。研究發現，胃癌等很多惡性腫瘤的發生都與IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）關系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者觀察到在肺癌以及乳腺癌等腫瘤中其表達升高[7-8]。發生的機制是在DNA水平上其關鍵分子位置存在的編碼基因發生結構的改變，進而導致PI3K的活化，例如p85α基因在大腸癌或卵巢癌患者中其iSH2的區域部位發生突變或缺失都會引起PI3K的活化。也有文獻記載，某些信號蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大腸癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤中發生穩定、持續的活化，并且表達量顯著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種腫瘤中編碼基因發生突變或表達量增高，而抑制PI3K活性后細胞的增殖則被受阻，表現為細胞周期阻滯、Rb的磷酸化及CDK4表達量減少等，這種細胞周期的阻滯現象能在細胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表達的情況下得以恢復，提示PI3K可能在這些腫瘤中的原癌基因。

該研究的結果表明，卵巢癌患者與健康者卵巢組織中PI3Kp85α蛋白的表達差異很大，前者表現為過表達狀態，后者為低表達水平。提示該基因與卵巢癌的發生發展關系較為密切，臨床上在疾病發生的早期通過檢測PI3K p85α的水平，有助于及時篩選出卵巢癌。另外該研究還對PI3Kp85α蛋白的具體表達情況與卵巢癌疾病的生物學特征之間的聯系進行了深入分析。研究結果表明PI3Kp85α蛋白的表達水平上升與卵巢癌的不同臨床分期及轉移有關（P<0.05），而與患者性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表達水平上升其腫瘤病人出現惡化的可能性與程度也顯著增高，瘤細胞擴散好的范圍更廣。以往的研究表明，RNA干擾術對PI3Kp85α表達可產生抑制作用，以此對卵巢癌細胞的快速增殖以及分化進行抑制，說明可以以干預p85α基因的表達來治療卵巢癌，即其具有廣闊的應用前景。

[參考文獻]

[1] 沈文潔，邢福祺，魯永鮮.印跡基因Lot在卵巢上皮性癌組織中的表達及其甲基化的研究[J].中華婦產科雜志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艷.PTEN和卵巢腫瘤[J].河北醫藥，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永寧，徐玲，沈悅.穩定轉染PTEN基因后對卵巢上皮性癌細胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信號傳導通路的影響[J].中華婦產科雜，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17號染色體基因變異與卵巢癌相關性研究[J].國際檢驗醫學雜志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文靜，戴冬秋，郭科軍.上皮性卵巢癌HIC1基因異常甲基化的檢測及其臨床意義的研究[J].中國現代醫學雜志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，鄭繪霞.HIC1、HOXA9基因啟動子甲基化在卵巢癌早期診斷中的意義[J].中國藥物與臨床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，劉曉力，陳國平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌發生、發展中的作用及其相互關系[J].海南醫學院學報，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠寧，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表達及其臨床意義[J].解放軍醫學雜志，2007，32（10）：1017-1020.

（收稿日期：2014-04-25）endprint

1.2 免疫組化法

按即用型二步法檢測試劑盒說明進行抗PI3Kp85α（1：100）免疫組織化學染色，陰性對照組通過PBS來替代一抗。

1.3 結果評估標準

PI3Kp85α蛋白的顏色為棕黃色的顆粒物質。不同的染色顏色其計分的標準也不一致，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計分為0、1、2、3分；在物鏡一致的條件下根據陽性細胞數計分標準如下：≤25%記1分，26%～50%為記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。最終的計分結果為上述兩種方式分數的乘積，結果為陰性、弱陽性（+）、中等陽性（++）、強陽性（+++）所對應的分值分別為0、1～3、4～5、>5分。

1.4 統計方法

使用SPSS13.0對研究數據進行統計分析，所有的資料都服從正態分布，通過t檢驗分析計量資料間的差異，χ2檢驗分析計數資料之間的差異。

2 結果

2.1 不同組織中p85α基因的表達

p85α基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌組織中的表達率明顯高于癌旁組織和正常卵巢組織，差異有統計學意義（χ2=4.31，P<0.05），見表1。

3 討論

卵巢癌是發生于卵巢表面體腔上肢和其下方卵巢間質的惡性腫瘤，常發生于中年婦女，發病率僅次于子宮體癌和子宮頸癌，位居危害婦女健康疾病的第3位，目前該病的發生率有增無減，由于腫瘤細胞易擴散而使得化療不能徹底，也增加了靶向治療的難度，提高了卵巢癌患者的死亡率，這給婦女的生命健康帶來嚴重威脅[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦無明顯癥狀、體征，現今也缺乏早期診斷方法，雖然國內外有報道應用卵巢癌單克隆抗體等技術可發現早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就診時已屬晚期。其發病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環境等有關目前治療主要以手術為主[6]。

研究發現，PI3K基因的家族中表達最活躍的也為p85α基因，通過PIK3R1進行編碼；該基因在體內的表達或者突變都可對PI3K的傳導產生影響，與腫瘤的發生密切相關。激活PI3K基因可生成PIP3這一第二信使，接著在細胞中與信號蛋白AKT以及PDK 1相結合，從而活化AKT。研究發現，胃癌等很多惡性腫瘤的發生都與IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）關系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者觀察到在肺癌以及乳腺癌等腫瘤中其表達升高[7-8]。發生的機制是在DNA水平上其關鍵分子位置存在的編碼基因發生結構的改變，進而導致PI3K的活化，例如p85α基因在大腸癌或卵巢癌患者中其iSH2的區域部位發生突變或缺失都會引起PI3K的活化。也有文獻記載，某些信號蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大腸癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤中發生穩定、持續的活化，并且表達量顯著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種腫瘤中編碼基因發生突變或表達量增高，而抑制PI3K活性后細胞的增殖則被受阻，表現為細胞周期阻滯、Rb的磷酸化及CDK4表達量減少等，這種細胞周期的阻滯現象能在細胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表達的情況下得以恢復，提示PI3K可能在這些腫瘤中的原癌基因。

該研究的結果表明，卵巢癌患者與健康者卵巢組織中PI3Kp85α蛋白的表達差異很大，前者表現為過表達狀態，后者為低表達水平。提示該基因與卵巢癌的發生發展關系較為密切，臨床上在疾病發生的早期通過檢測PI3K p85α的水平，有助于及時篩選出卵巢癌。另外該研究還對PI3Kp85α蛋白的具體表達情況與卵巢癌疾病的生物學特征之間的聯系進行了深入分析。研究結果表明PI3Kp85α蛋白的表達水平上升與卵巢癌的不同臨床分期及轉移有關（P<0.05），而與患者性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表達水平上升其腫瘤病人出現惡化的可能性與程度也顯著增高，瘤細胞擴散好的范圍更廣。以往的研究表明，RNA干擾術對PI3Kp85α表達可產生抑制作用，以此對卵巢癌細胞的快速增殖以及分化進行抑制，說明可以以干預p85α基因的表達來治療卵巢癌，即其具有廣闊的應用前景。

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[1] 沈文潔，邢福祺，魯永鮮.印跡基因Lot在卵巢上皮性癌組織中的表達及其甲基化的研究[J].中華婦產科雜志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艷.PTEN和卵巢腫瘤[J].河北醫藥，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永寧，徐玲，沈悅.穩定轉染PTEN基因后對卵巢上皮性癌細胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信號傳導通路的影響[J].中華婦產科雜，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17號染色體基因變異與卵巢癌相關性研究[J].國際檢驗醫學雜志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文靜，戴冬秋，郭科軍.上皮性卵巢癌HIC1基因異常甲基化的檢測及其臨床意義的研究[J].中國現代醫學雜志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，鄭繪霞.HIC1、HOXA9基因啟動子甲基化在卵巢癌早期診斷中的意義[J].中國藥物與臨床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，劉曉力，陳國平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌發生、發展中的作用及其相互關系[J].海南醫學院學報，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠寧，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表達及其臨床意義[J].解放軍醫學雜志，2007，32（10）：1017-1020.

（收稿日期：2014-04-25）endprint

1.2 免疫組化法

按即用型二步法檢測試劑盒說明進行抗PI3Kp85α（1：100）免疫組織化學染色，陰性對照組通過PBS來替代一抗。

1.3 結果評估標準

PI3Kp85α蛋白的顏色為棕黃色的顆粒物質。不同的染色顏色其計分的標準也不一致，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計分為0、1、2、3分；在物鏡一致的條件下根據陽性細胞數計分標準如下：≤25%記1分，26%～50%為記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。最終的計分結果為上述兩種方式分數的乘積，結果為陰性、弱陽性（+）、中等陽性（++）、強陽性（+++）所對應的分值分別為0、1～3、4～5、>5分。

1.4 統計方法

使用SPSS13.0對研究數據進行統計分析，所有的資料都服從正態分布，通過t檢驗分析計量資料間的差異，χ2檢驗分析計數資料之間的差異。

2 結果

2.1 不同組織中p85α基因的表達

p85α基因在卵巢癌組織、癌旁組織、正常卵巢組織中的表達率分別為68.2%、59.1%、11.8%，即在卵巢癌組織中的表達率明顯高于癌旁組織和正常卵巢組織，差異有統計學意義（χ2=4.31，P<0.05），見表1。

3 討論

卵巢癌是發生于卵巢表面體腔上肢和其下方卵巢間質的惡性腫瘤，常發生于中年婦女，發病率僅次于子宮體癌和子宮頸癌，位居危害婦女健康疾病的第3位，目前該病的發生率有增無減，由于腫瘤細胞易擴散而使得化療不能徹底，也增加了靶向治療的難度，提高了卵巢癌患者的死亡率，這給婦女的生命健康帶來嚴重威脅[5]。卵巢癌的病因尚不清楚，早期亦無明顯癥狀、體征，現今也缺乏早期診斷方法，雖然國內外有報道應用卵巢癌單克隆抗體等技術可發現早期病灶，但尚未普及，故大部分卵巢癌患者就診時已屬晚期。其發病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環境等有關目前治療主要以手術為主[6]。

研究發現，PI3K基因的家族中表達最活躍的也為p85α基因，通過PIK3R1進行編碼；該基因在體內的表達或者突變都可對PI3K的傳導產生影響，與腫瘤的發生密切相關。激活PI3K基因可生成PIP3這一第二信使，接著在細胞中與信號蛋白AKT以及PDK 1相結合，從而活化AKT。研究發現，胃癌等很多惡性腫瘤的發生都與IA型的PI3K及其下游分子中所含的蛋白激酶（指的是PI3K/Akt通路）關系密切。尤其是PI3K/Akt通路，研究者觀察到在肺癌以及乳腺癌等腫瘤中其表達升高[7-8]。發生的機制是在DNA水平上其關鍵分子位置存在的編碼基因發生結構的改變，進而導致PI3K的活化，例如p85α基因在大腸癌或卵巢癌患者中其iSH2的區域部位發生突變或缺失都會引起PI3K的活化。也有文獻記載，某些信號蛋白如NF-ka-ppaB/p65及PI3K等在大腸癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤中發生穩定、持續的活化，并且表達量顯著上升[9-10]。p110和Akt2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種腫瘤中編碼基因發生突變或表達量增高，而抑制PI3K活性后細胞的增殖則被受阻，表現為細胞周期阻滯、Rb的磷酸化及CDK4表達量減少等，這種細胞周期的阻滯現象能在細胞中活性Akt及其下游分子p70S6K表達的情況下得以恢復，提示PI3K可能在這些腫瘤中的原癌基因。

該研究的結果表明，卵巢癌患者與健康者卵巢組織中PI3Kp85α蛋白的表達差異很大，前者表現為過表達狀態，后者為低表達水平。提示該基因與卵巢癌的發生發展關系較為密切，臨床上在疾病發生的早期通過檢測PI3K p85α的水平，有助于及時篩選出卵巢癌。另外該研究還對PI3Kp85α蛋白的具體表達情況與卵巢癌疾病的生物學特征之間的聯系進行了深入分析。研究結果表明PI3Kp85α蛋白的表達水平上升與卵巢癌的不同臨床分期及轉移有關（P<0.05），而與患者性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05）。由此可提示PI3Kp85α蛋白的表達水平上升其腫瘤病人出現惡化的可能性與程度也顯著增高，瘤細胞擴散好的范圍更廣。以往的研究表明，RNA干擾術對PI3Kp85α表達可產生抑制作用，以此對卵巢癌細胞的快速增殖以及分化進行抑制，說明可以以干預p85α基因的表達來治療卵巢癌，即其具有廣闊的應用前景。

[參考文獻]

[1] 沈文潔，邢福祺，魯永鮮.印跡基因Lot在卵巢上皮性癌組織中的表達及其甲基化的研究[J].中華婦產科雜志，2007，42（5）：339-342.

[2] 褚艷.PTEN和卵巢腫瘤[J].河北醫藥，2009，31（23）：3292-3294.

[3] Schondorfd T，Distal A，Grabmann J， et al. Single mutation of the PTEN gene imrecurrent ovarian carcinomas[J].Soc Gynecol invest，2000，34（7）：31-36.

[4] 瞿永寧，徐玲，沈悅.穩定轉染PTEN基因后對卵巢上皮性癌細胞磷酸酰肌醇3激酶、蛋白激酶B信號傳導通路的影響[J].中華婦產科雜，2010，45（9）：682-685.

[5] 郝明.第17號染色體基因變異與卵巢癌相關性研究[J].國際檢驗醫學雜志，2008，29（2）：151- 154.

[6] Jinsong L，Weiwei S. Epithelial ovarian cancer Focus on genetics and animal models[J] .Landes Bioscience， 2009，8（5）：731-735.

[7] 沈文靜，戴冬秋，郭科軍.上皮性卵巢癌HIC1基因異常甲基化的檢測及其臨床意義的研究[J].中國現代醫學雜志，2009，19 （4）：590-592.

[8] 段再康，粱建芳，鄭繪霞.HIC1、HOXA9基因啟動子甲基化在卵巢癌早期診斷中的意義[J].中國藥物與臨床，2010，10（6）：615-618.

[9] 夏立平，劉曉力，陳國平，等.TGF2J31、TGF2J3R1、Smad4在乳腺癌發生、發展中的作用及其相互關系[J].海南醫學院學報，2010，16（6）：693-696.

[10] 王莉，惠寧，唐亮.GPC3在卵巢癌中的表達及其臨床意義[J].解放軍醫學雜志，2007，32（10）：1017-1020.

（收稿日期：2014-04-25）endprint