Ki-67在乳腺癌中的表達及臨床價值

魯亮，張漢群，楊飛月，張赟，羅旻，曹輝

(貴州省人民醫院腫瘤科，病理科,貴州550002)

孕激素受體(progesterone receptor，PR)、雌激素受體(estrogen receptor，ER)和人類表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)是評價乳腺癌治療效果和判定預后的生物學指標。而Ki-67漸漸成為近年來一個新的研究熱點。本文通過對86例乳腺癌病人的臨床資料進行分析，探討Ki-67于乳腺癌各亞型中的表達及臨床價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集貴州省人民醫院腫瘤科2011年1月-2012年12月收治的86例乳腺癌患者，篩出滿足下列條件的病例：(1)女性；(2)有手術指征；(3)術后病理診斷為乳腺癌；(4)手術行了腋窩淋巴結清掃；(5)術前未行化放療和內分泌治療。共86例患者的臨床病理資料(我院病理科出示的病理報告)?；颊吣挲g20～76歲，中位年齡49歲，年齡≤35歲者9例(10.5%)，>35歲者 77例(89.5%)。 Tis 5例(5.8%)，T1 46 例(53.5%)，T2 29 例(33.7%)，T3 4 例(4.7%)，T4 2例(2.3%)。腋窩淋巴結有轉移者36例(41.9%)，無轉移者50例(58.1%)。按照第7版AJCC乳腺癌TNM病理分期標準：0期5例(5.8%)，Ⅰ期24例 (27.9%)，Ⅱ期41例 (47.7%)，Ⅲ期16例(18.6%)。組織學類型：浸潤性導管癌75例(87.2%)，浸潤性小葉癌6例(7.0%)，導管原位癌5例(5.8%)。

1.2 免疫組化檢測 使用免疫組化二步法進行病理診斷。石蠟切片脫蠟后，用蒸餾水沖洗，PBS液浸泡5 min，置于pH 6.0的枸櫞酸液中，于120℃的高壓鍋中抗原修復6 min，冷卻至常溫。使用3%H2O2于常溫下溫育5～10 min，為消除內源性過氧化物酶的活性，用PBS沖洗3次，每次2 min。分別滴加 Ki-67、PR、ER、HER-2 一抗工作液，于 37 ℃溫育1～2 h。用PBS沖洗3次，每次2 min。滴入試劑 1(Polymer Helper)，37℃溫育 20 min，用 PBS 沖洗3次，每次2 min。滴入試劑2(多聚過氧化物酶抗兔及抗鼠抗體)，常溫溫育20～30 min，用PBS沖洗3次，每次2min。使用DAB顯色劑顯色5～8 min。清水充分沖洗，采用蘇木素復染，脫水至透明、封片。

1.3 結果評定 PR及ER陽性判斷標準：腫瘤細胞少于5%的細胞核呈較弱棕黃色或無細胞核呈棕黃色為陰性，>5%的細胞核呈棕黃色為陽性。Ki-67陽性定位于細胞核染色，以視野中出現陽性細胞所占的比例進行計數，任意每5個高倍視野中出現陽性細胞數所占比例的平均值為陽性細胞數百分比并作為判定依據。HER-2陽性評定標準：細胞膜呈現棕黃染色為陽性。<10%的細胞膜呈較弱染色或無細胞膜染色為(-)；>10%的細胞膜呈現部分較弱染色為(+)；>10%的細胞膜完全呈較弱至中等染色為(++)；>10%的細胞膜呈現全強染色為(+++)。因未對HER-2(++)的病例行進一步FISH檢測，故將結果(++)及以者下定為陰性，(+++)者定為陽性。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析，資料計數比較采用χ2檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結果

臨床病理特征和Ki-67指數的關系:>35歲與≤35歲的患者間Ki-67指數無統計學意義 (P=0.078)。腫瘤直徑≤2 cm的患者Ki-67指數低于腫瘤直徑>2 cm患者(P=0.002)。淋巴結有轉移與無轉移者Ki-67指數無差異(P=0.214)。病理分期為Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期患者的Ki-67指數均明顯高于病理分期為0期者(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期三者間的Ki-67指數無差異(P>0.05)。PR(-)患者Ki-67指數明顯高于 PR(+)者(P<0.001)；ER(-)患者 Ki-67 指數明顯高于 ER(+)患者(P<0.001)；HER-2(+)患者的 Ki-67指數明顯高于 HER-2(-)者(P=0.011，表1)。

表1 乳腺癌臨床病理特征與Ki-67的關系

3 討論

Gerdes等于1983年發現Ki-67，是細胞增殖中表達的一種核抗原。Ki-67在細胞分裂中的S期后期及G2期表達明顯增加，M期時達到高峰，細胞分裂的后期及末期快速下降；而在S期早期及G1期表達水平較低，在G0期基本不表達。對于Ki-67的這個顯著特點，被認為是能夠有效評估細胞增殖的一個重要指標。文獻報道，正常乳腺組織和乳腺癌組織中Ki-67的表達存在明顯差異，正常乳腺組織 Ki-67顯低表達(<3%)[1，2]。 Fasanella等[3]報告315例乳腺癌的Ki-67陽性指標為36%±14%，與本研究結果類似。在本項研究中，不同年齡的患者Ki-67之間無差異(P=0.078)。對于腫瘤大小與Ki-67的關系，較早報道兩者呈正相關[4]，而Inwald等報道兩者間無關[5]。該研究顯示腫瘤較大者Ki-67指數增高(P=0.002)。對于腋窩淋巴結轉移和Ki-67的關系，部分研究認為，Ki-67和淋巴結轉移呈正相關[6]。Park等報道兩者無關[7]，本項研究的結果顯示，Ki-67指標與淋巴結轉移無明顯相關(P=0.214)。 Ki-67與病理分期相關(P=0.001)，進一步分析顯示，病理分期為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期Ki-67指數均明顯高于病理分期為0期者(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期三者間的Ki-67指數無差異(P>0.05)。結果提示，Ki-67指標主要與腫瘤局部的增殖相關，并不能反應區域淋巴結的情況。

關于Ki-67與ER、PR的關系，有報道呈正相關[8]；也有報道呈負相關[9]。本研究結果顯示，ER、PR表達為陰性者，Ki-67指數明顯高于ER、PR表達陽性者(P<0.001)。因ER、PR陽性的乳腺癌對內分泌治療有效，預后比ER、PR陰性的乳腺癌較好，故可以推測Ki-67高表達的乳腺癌患者預后可能較差。關于Ki-67和HER-2表達有報道呈正相關[10]，也有呈負相關的報道[11]。本研究顯示HER-2陽性者Ki-67指數明顯高于HER-2陰性者 (P=0.011)。若HER-2呈過度表達，患者預后較差已成定論，由此可以推測Ki-67高表達的患者預后較差。

本項研究提示，乳腺癌的發生、發展過程中，Ki-67和ER、PR、HER-2之間可能存在著某種關系，Ki-67的高度或高表達可能是一個不良預后因素。目前仍缺乏統一的Ki-67檢測和評估方案，尚缺乏大樣本的前瞻性研究，現Ki-67不能成為公認的乳腺癌預后指標。盡管如此，Ki-67很可能是繼HER-2之后又一個重要的生物預后指標[12]，將在乳腺癌的預測預后和指導治療方面發揮著重要的作用。

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