補(bǔ)中益氣丸對(duì)膀胱出口梗阻大鼠膀胱逼尿肌的影響

梁良 劉麗芳 王喆 陳晶 楊欣 趙永芳

補(bǔ)中益氣丸源自金代李東垣《脾胃論》補(bǔ)中益氣湯，為方便臨床應(yīng)用，經(jīng)現(xiàn)代制劑工藝制備成丸劑。該方是補(bǔ)中益氣、升陽(yáng)舉陷、甘溫除熱法的代表方?，F(xiàn)代藥理研究證明，補(bǔ)中益氣丸具有增加免疫機(jī)能、保護(hù)胃粘膜，以及調(diào)節(jié)體溫，改善心血管功能等多種作用。同時(shí)，補(bǔ)中益氣丸強(qiáng)健脾腎，在泌尿系統(tǒng)的應(yīng)用亦應(yīng)受到廣泛關(guān)注，但相關(guān)研究筆者所見(jiàn)較少［1］，尚未見(jiàn)補(bǔ)中益氣丸對(duì)膀胱出口梗阻作用的研究。本研究建立大鼠膀胱出口梗阻模型，并觀察補(bǔ)中益氣丸對(duì)膀胱逼尿肌收縮功能的影響，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、藥品與動(dòng)物MedLab-U/4cs 生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，南京市美易科技有限公司;FA2004 型電子分析天平，上海良平儀器儀表有限公司。補(bǔ)中益氣丸、癃閉舒膠囊(市售);水合氯醛，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。SPF 級(jí)SD 大鼠，雄性，體重200 ～250 g，河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK(冀)2008-1-003。

1.2 動(dòng)物模型建立及標(biāo)本制備40 只大鼠水合氯醛(300 mg/kg，腹腔注射)麻醉，75%酒精消毒后，沿下腹部正中腹白線縱行切口，暴露膀胱，建立膀胱出口梗阻模型［2］。另取10 只大鼠，手術(shù)暴漏膀胱后即縫合，作為假手術(shù)組。術(shù)后大鼠肌內(nèi)注射硫酸慶大霉素注射液(20 mg/kg)，每天1 次，連續(xù)3 d。給藥4 周后，取出膀胱，制備1.5 mm×4 mm 的膀胱肌條標(biāo)本。標(biāo)本置于含10 ml K-H 液的浴槽中，施以1.0 g 前負(fù)荷。浴槽溫度(37±0.5)℃，標(biāo)本平衡1.0 h，期間每15 分鐘換一次營(yíng)養(yǎng)液，持續(xù)通含有95%O2和5%CO2的混合氣體。改良K-H 液成分為(mmol/L):NaCl 133，KCl 4.7，NaH2PO41.35，NaHCO316.3，MgSO40.61，glucose 7.8，CaCl22.52，pH 值7.2。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥實(shí)驗(yàn)分5 組，即假手術(shù)組、模型組、補(bǔ)中益氣丸大、中、小劑量組。根據(jù)藥品說(shuō)明書(shū)，折合大鼠給藥量后，補(bǔ)中益氣丸設(shè)5.4 g/kg、1.8 g/kg和0.6 g/kg 3 個(gè)劑量組，按藥容積100 g 體重給予1 ml以蒸餾水稀釋配制藥液濃度。假手術(shù)組合模型組給予等容量的蒸餾水。5 組動(dòng)物每天給藥1 次，連續(xù)4 周。每周稱量1 次體重，根據(jù)體重調(diào)節(jié)給藥劑量。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)標(biāo)本平衡1 h 后，建立第1 輪卡巴膽堿累積給藥量效曲線，給藥濃度0.01 ～100 μmol/L。為保證數(shù)據(jù)穩(wěn)定，第1 輪數(shù)據(jù)棄去。標(biāo)本平衡45 min后，期間每15 分鐘換一次營(yíng)養(yǎng)液，建立第2 輪累積給藥量效曲線，觀察不同濃度下肌條反應(yīng)情況，記錄收縮反應(yīng)，并計(jì)算Emax 和EC50值。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將標(biāo)本用濾紙吸干，稱其濕重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析膀胱體濕重以實(shí)測(cè)值(mg)表示;卡巴膽堿誘發(fā)的大鼠膀胱肌條的收縮反應(yīng)以mg 張力/mg 肌條濕重表示;所用數(shù)據(jù)均以實(shí)測(cè)值的±s 表示。EC50 值以計(jì)算值［log(E/(Emax－E)= logClogK(E，收縮反應(yīng);Emax，最大收縮反應(yīng);C，激動(dòng)藥的濃度;K，解離常數(shù))］表示。采用GraphPad Prism 4.0軟件，組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，P ＜0.05 時(shí)，進(jìn)一步采用Dunnett-t 檢驗(yàn)比較兩對(duì)應(yīng)劑量點(diǎn)間的藥物效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)中益氣丸對(duì)大鼠膀胱肌條濕重的影響梗阻模型組和補(bǔ)中益氣小劑量組大鼠膀胱肌條濕重明顯大于假手術(shù)組(P ＜0.05)，其他各組膀胱體濕重與假手術(shù)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 補(bǔ)中益氣丸對(duì)大鼠膀胱肌條濕重影響 mg，±s

表1 補(bǔ)中益氣丸對(duì)大鼠膀胱肌條濕重影響 mg，±s

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05

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2.2 補(bǔ)中益氣丸對(duì)大鼠膀胱逼尿肌收縮功能的影響卡巴膽堿(0.01 ～100 μmol/L)可誘發(fā)假手術(shù)及膀胱出口梗阻各組大鼠離體膀胱肌條濃度依賴性收縮反應(yīng)。梗阻模型組膀胱肌條收縮反應(yīng)明顯弱于假手術(shù)組標(biāo)本收縮反應(yīng)(P ＜0.05 或＜0.01)，其量效曲線右移，Emax 值增小，EC50值變大，與梗阻模型組相比，補(bǔ)中益氣丸大劑量組、中劑量組標(biāo)本收縮反應(yīng)Emax 值增大，EC50值變小(P ＜0.05 或＜0.01);與梗阻模型組相比，補(bǔ)中益氣丸小劑量組Emax 值和EC50值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見(jiàn)表2、圖1。

表2 補(bǔ)中益氣丸對(duì)膀胱出口梗阻模型大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)Emax 值和EC50值的影響 ±s

表2 補(bǔ)中益氣丸對(duì)膀胱出口梗阻模型大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)Emax 值和EC50值的影響 ±s

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01;與梗阻模型組比較，△P ＜0.05，☆P ＜0.01

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3 討論

膀胱出口梗阻會(huì)引起膀胱組織結(jié)構(gòu)和生理功能的異常改變，如膀胱肥厚，排尿壓升高及逼尿肌不穩(wěn)定等，從而導(dǎo)致下尿路的梗阻和刺激癥狀，若出口梗阻持續(xù)不能解除，將會(huì)引起膀胱組織結(jié)構(gòu)和生理功能發(fā)生異常改變，如膀胱肥厚、排尿壓升高、逼尿肌不穩(wěn)定及膀胱順應(yīng)性降低等［3］。本實(shí)驗(yàn)成功地建立了大鼠膀胱出口梗阻模型，觀察了補(bǔ)中益氣丸對(duì)出口梗阻大鼠膀胱逼尿肌收縮反應(yīng)的影響。本結(jié)果顯示，梗阻模型大鼠膀胱肌條濕重明顯高于假手術(shù)組(P ＜0.05)，表明膀胱出口梗阻4 周后，膀胱體明顯增生。膀胱出口梗阻會(huì)導(dǎo)致尿道阻力增加，引起膀胱過(guò)度擴(kuò)張，BOO早期的代償期，膀胱功能可維持正常，逼尿肌收縮反應(yīng)亦增強(qiáng);如果梗阻癥狀持續(xù)不能解除，膀胱進(jìn)入失代償期，則會(huì)引起膀胱增生、順應(yīng)性下降，逼尿肌收縮反應(yīng)明顯降低［4］。

圖1 假手術(shù)及梗阻模型組大鼠離體膀胱肌條收縮反應(yīng)曲線

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，小便頻作是機(jī)體體質(zhì)虛弱、膀胱約束無(wú)能、腎氣不固其化不宣所致，同時(shí)由于脾肺二臟俱虛，膀胱氣化無(wú)力，進(jìn)而發(fā)生小便頻作［5］。補(bǔ)中益氣丸由人參、黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸、升麻、柴胡、炙甘草八味草藥組成，其中黃芪為主藥具有補(bǔ)中益氣、升陽(yáng)舉陷固表等作用［6］，能對(duì)機(jī)體的泌尿系統(tǒng)、免疫功能、消化系統(tǒng)功能具有較好的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而從整體上提高機(jī)體的非特異性免疫力。本文通過(guò)建立大鼠膀胱出口梗阻模型，證實(shí)了補(bǔ)中益氣丸可顯著提高梗阻膀胱的收縮反應(yīng)，提高順應(yīng)性，為補(bǔ)中益氣丸在下尿路方面的研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 閆軍.補(bǔ)中益氣丸用分心木泡水送服治療前列腺術(shù)后小便頻作34例.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，28:89-90.

2 Usta C，Kukul E，Yalcmkaya M.Doxazosin effects on cholinergic and adrenergic response in rat isolated detrusor smooth muscle preparations from obstructed bladder.J Pharmacol Sci，2004，95:305-310.

3 吳士良，肖云翔，段繼宏，等.膀胱出口部分梗阻后膀胱功能和組織學(xué)變化的相關(guān)性研究.中華泌尿外科雜志，2006，27:308-310.

4 Gosling JA，Kung LS，Dixon JS，et al.Correlation between the structure and function of the rabbit urinary bladder following partial outlet obstruction.J Urol，2000，163:1349-1356.

5 余望貽，卓暉，孟瓊.補(bǔ)中益氣丸脾腎相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)醫(yī)藥指南，2008，6:25-26.

6 黃國(guó)東，馬曉露，梁愛(ài)武.知柏地黃丸和補(bǔ)中益氣丸配合腎上腺皮質(zhì)激素治療原發(fā)性腎病綜合征臨床觀察.中國(guó)臨床醫(yī)生，2001，29:53-54.