海藻消瘤膠囊的質(zhì)量控制

焦玉 胡然

海藻消瘤膠囊處方為湖北省中醫(yī)名師內(nèi)分泌科專家胡思榮主任醫(yī)師集多年臨床經(jīng)驗，自擬所得。全方以軟堅散結(jié)，祛瘀通絡(luò)治其標(biāo)，疏肝解郁，消痰祛濕治其本，由海藻、昆布、浙貝母、土鱉蟲、制鱉甲、生牡蠣、三棱、莪術(shù)、桃仁、白花蛇舌草、半枝蓮、夏枯草、黃柏、川厚樸、白芍藥、延胡索、金銀花、陳皮、焦山楂、茯苓、生甘草組成。功效軟堅散結(jié)，化痰消瘤，祛瘀通脈，用于乳腺增生、甲狀腺瘤。為控制該制劑的質(zhì)量，更好的應(yīng)用于臨床，對其進行了質(zhì)量控制方法研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料(1)處方:海藻、昆布、浙貝母、土鱉蟲、制鱉甲、生牡蠣、三棱、莪術(shù)、桃仁、白花蛇舌草、半枝蓮、夏枯草、川厚樸、黃柏、白芍藥、延胡索、金銀花、陳皮、焦山楂、茯苓、生甘草。(2)制備工藝:將處方量藥材浸泡半小時后，加10 倍量水煎煮2 次，2 h/次，濾過，合并濾液，濃縮成浸膏，加淀粉適量，混勻，于60℃干燥后，粉碎，過80 目篩，整粒，分裝，即得。

1.2 儀器與試藥

1.2.1 儀器:高效液相色譜儀(2910 泵，2930UV 檢測器，N2000 工作站，上海天普精密科學(xué)儀器有限公司);C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，江蘇漢邦科技有限公司);ZF-1 三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)，TG328A 型光學(xué)讀數(shù)分析天平(湘儀天平儀器廠)。

1.2.2 試藥:①材料:聚酰胺薄膜(規(guī)格:10 cm×10 cm，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)。②試劑:甲醇、乙腈(色譜級，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，注射用水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司)。甲醇(分析純，西隴化工股份有限公司)，乙酸乙酯(分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司)，氨水(分析純，襄樊市樊城福利化工廠)，蒸餾水(自制)。③藥品:三批海藻消瘤膠囊樣品(規(guī) 格:0.26 g/粒，批號:20120706、20130122、20130208)。貝母素甲對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:110750-200609)，貝母素乙對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:110751-200709)，橙皮苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:0721-200010)，柚皮苷對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:110722-200610)，綠原酸對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:110753-200413)，鹽酸小檗堿對照品(購自中國藥品生物制品檢定院，批號:110713-200911，純度86.8%)。缺浙貝母、金銀花、陳皮和黃柏的陰性對照分別按制法自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 浙貝母的薄層鑒別:取本品10 g，加水30 ml，加熱使溶解，放至室溫，加濃氨試液調(diào)pH 值至11 ～12，用二氯甲烷振搖提取2 次，40 ml/次，合并二氯甲烷液，蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml 使溶解，作為供試品溶液。另取貝母素甲、貝母素乙對照品，加無水乙醇制成每1 毫升各含2 mg 的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010 年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。斑點分離度好，缺浙貝母的陰性樣品無干擾。薄層色譜圖見圖1。

2.1.2 金銀花的薄層鑒別:取本品5 g，加甲醇50 ml，加熱回流30 min，放冷，濾過，蒸干，殘渣加水20 ml 使搖提取2 次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 毫升含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010 年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶3.5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。缺金銀花的陰性樣品無干擾。薄層色譜圖見圖2。

圖1 海藻消瘤膠囊中浙貝母的薄層鑒別

圖2 海藻消瘤膠囊中金銀花的薄層鑒別

2.1.3 陳皮的薄層鑒別:取2.1.2 鑒別項下的供試品溶液，作為供試品溶液。取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。另取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成過飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010 年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各2 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-冰醋酸(5∶1∶1∶0.02)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。缺陳皮的陰性樣品無干擾。薄層色譜圖見圖3。

圖3 海藻消瘤膠囊中陳皮的薄層鑒別

2.2 黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:C18 色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，ODS 預(yù)柱，流動相:乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0)(30∶70)，流速1.0 ml/min，檢測波長∶270 nm，進樣:20 μl，柱溫:室溫。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于3 000。拖尾因子小于1.05，主峰鹽酸小檗堿峰與雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。

2.2.2 溶液的制備:①對照品溶液的制備:精密稱取鹽酸小檗堿峰對照品3.70 mg(純度86.8%)，置10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，作為對照品儲備液。精密吸取該儲備液3 ～50 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 毫升含19.27 μg 的溶液。②供試品溶液的制備:取本品，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 ml，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇溶液(1∶100)補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 專屬性試驗:將2.2.2 項下制備缺黃柏的陰性樣品溶液，按2.2.1 項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，陰性樣品溶液色譜圖在與對照品和供試品溶液色譜圖相同的保留時間未見鹽酸小檗堿色譜峰，表明陰性無干擾。對照品溶液、供試品溶液及缺黃柏的陰性樣品溶液色譜圖見4 ～6。

圖4 對照品色譜圖

圖5 海藻消瘤膠囊樣品色譜圖

圖6 缺黃柏的陰性樣品色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察:精密吸取3.2.2 項下對照品儲備液10 ml，至50 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 毫升含64.2 μg 的溶液。分別精密吸取該溶液1、2、4、6、8 ml 置10 ml 量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成進樣 濃 度 為6.42、12.84、25.68、38.52、51.36、64.2 μg/ml的溶液，按3.2.1 項下色譜條件進樣，測定鹽酸小檗堿峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線y =18291x－12624，R2 =0.9991，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在進樣濃度6.42 ～64.2 μg/ml 范圍內(nèi)進樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。見圖7。

2.2.5 精密度試驗:精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣5 次。計算鹽酸小檗堿峰面積RSD 為0.51%，表明儀器精密度良好，見表1。

圖7 鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 精密度試驗結(jié)果

2.2.6 穩(wěn)定性試驗:取同一批樣品(批號:20120706)，按2.2.2 項下制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h 進樣，測定鹽酸小檗堿峰面積，計算RSD 為0.80%，表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.2.7 重復(fù)性試驗:取同一批樣品(批號:20120706)6 份按2.2.2 項下制備供試品溶液，進樣，測定鹽酸小檗堿的峰面積，計算RSD 為0.98%，表明重復(fù)性良好。見表3。

表3 重復(fù)性試驗結(jié)果

2.2.8 加樣回收率試驗:精密稱取已知鹽酸小檗堿含量的樣品(批號:20120816，含量為1.299 μg/g)0.25 g 6 份，置具塞錐形瓶中，并加入精密量取的鹽酸小檗堿對照品儲備液(濃度為38.52 μg/ml)10 ml，加甲醇至刻度，按2.2.2 項下制備供試品溶液，并按2.2.1 項下色譜條件測定，計算回收率。見表4。

表4 鹽酸小檗堿的回收率 n=6

2.3 樣品測定精密稱取三批樣品各0.5 g，按2.2.2項下制備供試品溶液，并按2.2.1 項下色譜條件測定，計算鹽酸小檗堿的含量。見表5。

表5 三批樣品中鹽酸小檗堿的含量

3 討論

海藻消瘤膠囊方選海藻、昆布、浙貝母、制鱉甲軟堅散結(jié)，消痰祛濕;黃柏、夏枯草清熱散結(jié);柴胡、厚樸疏肝解郁，理氣止痛;神曲、焦山楂、茯苓健脾消食;黃芪、甘草補脾益氣，緩急止痛，調(diào)和諸藥，且甘草與海藻相反為用，因堅積之病。非和平之藥所能取捷，必令其反伍而獲其功，取其相反相成之妙用。為控制該制劑的質(zhì)量，對方中的浙貝母、金銀花、陳皮進行了鑒別，制劑中鹽酸小檗堿的含量進行了測定。

浙貝母性微寒，味苦。清熱散結(jié)，化痰止咳。浙貝母中含多種甾體生物堿，如貝母素甲、貝母素乙、浙貝丙素、貝母新堿、貝母定堿、貝母替定堿等。其公認(rèn)的主要藥效成分為貝母素甲和貝母素乙，藥理作用明確，故以此為對照品鑒別方中藥味浙貝母。

陳皮中的主要成分為揮發(fā)油類、黃酮類等。《中國藥典》2010 年版一部中以橙皮苷為對照進行鑒別，由于陳皮中也存在大量的柚皮苷成分，二者同為黃酮類化合物，因此一并作為鑒別的指標(biāo)。陳皮中的橙皮苷、柚皮苷和金銀花中的綠原酸均含有酚羥基，中等極性，因此供試品溶液制備過程中調(diào)酸后采用乙酸乙酯溶劑萃取，聚酰胺薄膜為吸附劑進行鑒別。相比《中國藥典》中對于橙皮苷的鑒別采用硅膠G 吸附劑，二次展開的方法［1］，此鑒別方法更為簡便，快速，準(zhǔn)確。

黃柏苦寒，清泄燥濕，善除下焦?jié)駸幔谔到Y(jié)祛除，為方中臣藥。鹽酸小檗堿為黃柏中的主要藥效成分，因此將其作為含量測定的指標(biāo)。方法學(xué)研究中，先后試驗了流動相乙腈－0.1%磷酸溶液(50:50)(每100毫升加十二烷基磺酸鈉0.1g)［1］、乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0)(25∶75)［1］，發(fā)現(xiàn)后者流動相系統(tǒng)組成下峰形好，柱壓較前者低，因此采用后者系統(tǒng)組成為流動相。并對其比例進行了優(yōu)化，最終采用乙腈－0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0)(30 ∶70)，出峰時間適合，分離度好。

醫(yī)院驗方大多根據(jù)臨床經(jīng)驗自擬總結(jié)得到，由此開發(fā)出的制劑密切結(jié)合臨床，品種多，規(guī)格齊，因此深受患者歡迎。該制劑所建立的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好，為不同制劑中含有相同藥味的制劑的質(zhì)量控制方法提供參考和借鑒。

1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社.2010，176-177，286-287，1000-1001.