維藥白花丹的質量標準

孫 宇，卿德剛，張 娟，倪 慧，賈曉光

(新疆維吾爾自治區中藥民族藥研究所，新疆烏魯木齊 830002)

白花丹Plumbago zeylanica L.系白花丹科植物，為維吾爾醫常用藥，維語名稱為夏特然吉印地，藥用部位為干燥莖枝［1］。白花丹具有消除異常體液，開通濕寒氣阻，清音利咽止痛，消食助陽療膚等功效。在維吾爾醫藥中常用于皮膚白斑，白癜風，癱瘓，面癱及關節疼痛等病的治療［2-4］。近些年來制劑產品快速發展，新疆地區白花丹藥材需求量逐年增加。由于質量標準不完善，現行標準中僅有性狀鑒別、顯微鑒別和性質、功能主治等內容，致使目前藥材市場上藥材來源混亂，質量參差不齊。為了進一步提高白花丹藥材的質量控制水平，本實驗首先確定了維藥中使用的白花丹藥材基源，后對不同產地藥材的性狀鑒別、顯微鑒別［5-6］、薄層鑒別［7-9］及水分、灰分、浸出物［10］及白花丹醌的量［11-13］等項目進行研究，為維藥白花丹質量標準的提高提供了的科學數據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010CHT型高效液相色譜儀;Mettler AE163電子天平;徠卡RM2245旋轉切片機;Olympus BX51光學顯微鏡。

1.2 試藥 白花丹醌對照品 (批號P7262)購自美國Sigma公司。液相用甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。白花丹藥材采購自新疆烏魯木齊、和田、喀什及廣西恭城、南寧等地，經新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所主任藥師劉勇民鑒定均為白花丹科植物白花丹Plumbago zeylanica L.不帶葉干燥莖枝。

2 方法與結果

2.1 藥材性狀鑒別 本品藥用部位為白花丹的干燥莖枝，莖呈長圓柱形，長短不一，有時可見明顯的節，具細縱棱，直徑2～8 mm，表面綠色、黃綠色至淡棕褐色。質輕，易折斷，斷面皮部纖維狀，內層顆粒狀，髓部類白色，海綿狀，松軟;氣微，味淡。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 白花丹莖橫切面顯微特征 表皮細胞1列，橢圓形，切線延長;外被角質層。皮內側有2～3列厚壁細胞，棱脊處多達6～8列;皮層為2～8列薄壁細胞，散有分泌細胞，內含棕黃色團塊;中柱鞘纖維3～6列，排列成波狀環形，棱脊處較多;維管束外韌性，導管單個或數個成群，徑向排列，形成層不明顯，髓部薄壁細胞呈長圓形，可見紋孔，老枝木部較寬。見圖1。

圖1 白花丹顯微鑒別莖橫截面切片圖Fig.1 Microscopic identification of Plumbago zeylanica L.stem cross-sectional slices

2.2.2 白花丹藥材粉末特征 粉末呈淡黃綠色至淡棕黃色。氣孔環式，副衛細胞多3個，大小近相等。惡腺 (硅質細胞)近圓形，直徑35～40微米;表面具“十”字交叉及類方形紋理;導管網紋、具緣紋孔或環紋，直徑10～45微米;髓細胞類長方形，長70～140微米，寬40～70微米，表面具圓形壁孔，纖維長梭形，直徑10～30微米，壁孔明顯。見圖2。

圖2 白花丹顯微鑒別粉末拼圖Fig.2 Microscopic identification of Plumbago zeylanica L.powder jigsaw

2.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末5 g，加甲醇50 mL，超聲提取30 min，放冷，濾過，取濾液加入50 mL水，混勻后，用三氯甲烷振搖提取2次，每次50 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取白花丹醌對照品，用甲醇配制成0.1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液15 μL，對照品溶液10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰乙酸 (7.5∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置氨水蒸氣中熏至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在于對照品相應的位置上，顯相同的紫色斑點。見圖3。

圖3 白花丹藥材薄層色譜圖Fig.3 TLC chromatograms of Plumbago herbs

2.4 水分、總灰分和醇溶性浸出物測定 水分測定、灰分測定、醇溶性浸出物測定分別按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨH(烘干法)、附錄ⅨK、附錄ⅩA(醇溶性浸出物測定法)等項下方法進行測定。結果含水量為5.8% ～8.3%，總灰分含有量2.97%～8.75%，醇溶性浸出物含有量為9.92% ～17.46%。

2.5 樣品中白花丹醌測定

2.5.1 色譜條件 島津 LC solution工作站;Waters XTerra RPC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇-水 (60∶40)為流動相;紫外檢測器，檢測波長270 nm;柱溫25℃;進樣量10 μL。對照品及樣品的HPLC圖見圖4。

圖4 白花丹藥材及白花丹醌對照品色譜圖Fig.4 HPLC chromatogramsofPlumbagoherbs and plumbagin

2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取白花丹醌對照品1.74 mg，加25 mL甲醇溶解制成每1 mL含69.6 μg的溶液，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 取白花丹藥材粉末(過二號篩)約 1.5 g(廣西南寧產，批號20120310)，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入30 mL甲醇，精密稱定，超聲提取30 min，取出，待冷卻后，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，過0.45 μm濾膜，作為供試品溶液。

2.5.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μL，在色譜條件下，依次進樣，以對照品進樣量 (μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程，Y=414893X －103703，r=0.9998。結果表明白花丹醌在0.0286～0.4576 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液10 μL，按“2.5.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，計算，RSD為0.13%，表明儀器精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取同一批次樣品6份，按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣，測定白花丹醌的峰面積，計算，結果RSD為1.3%。

2.5.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在制備后0、2、4、8、10、12、24 h進樣測定，測定白花丹醌峰面積的RSD值為0.82%。表明樣品溶液在24 h內穩定。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含有量的樣品(廣西南寧產，批號20120310)1.5 g共6份，精密稱定，分別加入相同量的質量濃度為69.6 μg/mL的對照品溶液。按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果Tab.1 Results of recovery tests

2.5.9 樣品測定 取12批白花丹樣品，精密稱定，分別按“2.5.3”項下制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，計算，結果見表2。

3 結論與討論

3.1 本實驗對收集到的白花丹藥材進行了性狀鑒別及顯微鑒別實驗，發現藥材性狀特征基本一致;藥材莖橫截面顯微圖譜中發現皮層細胞中常含有棕黃色分泌細胞;藥材粉末鑒別中發現呈“十”字交叉及類方形紋理，近圓形的惡腺 (硅質細胞)，以上特征穩定，可作為維藥白花丹藥材顯微鑒別的主要特征。

表2 12批白花丹藥材來源及測定結果Tab.2 Medicinal sources of 12 batches of Plumbago herbs and measurement results

3.2 分別考察了三氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯等不同薄層展開體系;分別對10批樣品進行鑒別實驗，結果表明石油醚-乙酸乙酯-冰乙酸 (7.5∶1∶0.5)作為展開劑，實驗結果分離度好，斑點相對位置和重復性好。比較了國家藥典規定使用的5種硅膠板，結果表明均可對白花丹中的白花丹醌進行定性鑒別。

3.3 采用國家藥典附錄方法，對藥材的水分、灰分、浸出物及有效成分的量進行了檢查，根據所測結果，擬定:白花丹藥材 (主要是新疆地區)水分不得過9.0%;總灰分不得過9.0%;醇溶性浸出物不得少于10.0%。

3.4 對提取溶劑 (甲醇、乙醇、三氯甲烷等)、提取方法 (冷浸、超聲、回流提取)、提取時間、提取溶劑進行考察，最終建立了白花丹藥材中白花丹醌的HPLC定量測定的方法，對12批白花丹藥材進行了定性定量分析，結果表明各樣品均可檢出白花丹醌，其在不同產地的樣品中含有量差異較大，有必要進行質量控制。

本研究建立的維藥白花丹的定性、定量檢測方法具有簡便、準確、靈敏度高、重復性好等特點，可為維吾爾藥白花丹質量標準的提升、促進其深層次的開發利用提供一定的科學依據。

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