賴諾普利片近紅外光譜法定性模型的建立

江蘇省鹽城市藥品檢驗所（224002）袁步娟 王梅娟

賴諾普利（lisinopril）屬N-羧烷基取代的二肽類血管緊張素轉換酶（ACE）抑制劑，是繼卡托普利、依那普利后第三個上市的口服有效的ACE抑制劑。適應于高血壓、高血壓腎病、急性心肌梗死、腎病內科、心血管內科。賴諾普利在1987年底首次在新西蘭上市，1991年在美國ACE抑制劑市場中占24.4%的份額，與已上市的其他ACE抑制劑比較，本品具有長效、強效、治療費用低等優點，應用日趨廣泛。現用近紅外光譜分析技術進行鑒定，具有分析速度快、效率高、分析成本低等特點。樣品測量不需要進行預處理，光譜測量過程中也不消耗樣品，是典型的無損和綠色分析技術。

1 儀器及樣品

1.1 儀器 Matrix-F傅里葉變換近紅外光譜儀( 德國BRUKER 公司)，手持光纖探頭，半導體制冷 INGAAS檢測器，Opus5.0光譜工作站,Agilent高效液相色譜儀 (美國Agilent公司)

1.2 樣品 江蘇黃河藥業股份有限公司賴諾普利片12批（編號 1～12，批號分別是：120401、120304、120502、120303、120101、120203、121201、121202、120402、130301、130302、130201），假冒產品 2批（編號為：13和14，批號分別為130215、120720）。

2 實驗方法

2.1 樣品制備 除去藥品的鋁塑包裝 即得

附圖1 賴諾普利片原始光譜圖

附圖2 近紅外光譜特征曲線

附圖3 正品的一階導數+矢量歸一光譜

附圖4 正品和假冒品的一階導數+矢量歸一光譜

2.2 近紅外光譜的采集與處理 將近紅外光譜儀的光纖探頭貼緊藥片，原始光譜波數范圍為12000～4000cm-1, 分辨率為8cm-1，每批樣品測定 3次，收集樣品編號，1～12的光譜信息，在Opus的 Setup Conformity Test模塊中，取9000～4200cm-1譜段范圍對原始光譜進行一階導數化(17 點平滑)加矢量歸一化數據前處理后建立判別模型。

2.3 高效液相色譜圖掃描 取編號為11、13、14的樣品按國家標準賴諾普利片含量測定項下的方法[2]。取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量，（約相當于賴諾普利無水物20mg），置100ml量瓶中，加水適量，振搖使賴諾普利溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖溶液（0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液，用氫氧化鈉溶液調節pH值至5.0）-乙腈（92：8）為流動相，檢測波長為215nm；柱溫為50℃。取賴諾普利與2-氨基-4-苯基丁酸適量，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中分別含1mg與0.01mg的混合溶液，取20ul，注入液相色譜儀，賴諾普利與2-氨基-4-苯基丁酸的分離度應大于3.0，理論板數按賴諾普利峰計算不低于700。

3 結果

3.1 正品與假冒品近紅外光譜圖的差異 樣品編號1～12在波數范圍為12000～4000cm-1的近紅外光譜見附圖1。

以Opus軟件對賴諾普利片正品與假冒品的近紅外原始光譜進行分析[3]，正品在波數范圍為9000～4200cm-1的近紅外光譜圖有明顯的特征曲線，與假冒品在8 0 0 0～6 0 0 0 c m-1有明顯差異（見附圖1）。將正品與假冒品的近紅外原始圖譜進行一階求導+矢量歸一，其光譜見附圖2～4。

3.2 正品與假冒品高效液相色譜圖的差異為進一步求證，取賴諾普利片正品與假冒品掃描高效液相色譜。

3.3 建立一致性檢驗模型進行篩查

在Opus的一致性檢驗模型設置模塊[4]，取江蘇黃河藥業股份有限公司的12批賴諾普利片（編號1～12）的近紅外光譜圖作參考圖譜，一階導數（1 7點平滑）加矢量歸一化預處理數據，取10000～4200cm-1波段范圍。設定CI值為6，建立一致性檢驗模型。另取江蘇黃河藥業股份有限公司的2批樣品（編號12、13），假冒品2批（編號14、15）對模型進行驗證，結果見圖5。由圖可見，12批樣品均在模型設定的CI限度范圍內，而2批假冒品均在模型設定的CI限度范圍外。見附圖5。

3.4 模型耐用性驗證 取在不同條件下近紅外光譜作為驗證光譜，結果見附圖6。不同操作者、濕度、溫度環境等變化下測定的光譜均在所設定的CI限度之下。驗證結果說明上述因素變化對模型判別影響不大。

4 討論

近紅外光譜分析技術具有分析成本低、分析速度快、效率高等特點。光譜測量過程中也不消耗樣品，樣品測量一般不需要進行預處理，是典型的無損和綠色分析技術，近年該技術逐漸應用于藥品的快篩，由附圖1～4可見，正品在波數范圍為9000～4200cm-1的近紅外光譜圖有明顯的特征曲線，與假冒品在8000～6000cm-1有明顯差異，結果為該品牌藥品建立模型提供了可行性依據。實驗中樣品按法定標準掃描高效液相色譜圖，發現正品在10.25和11.14min處有特征峰，進一步證明了該鑒別方法的可靠性。本文建立的定性模型,只適合江蘇黃河藥業股份有限公司生產的賴諾普利片。該方法容易收集正品樣品，可快速建立模型，以針對市面上造假嚴重的品牌藥品，使該模型覆蓋其他廠家的賴諾普利片產品，還需定量收集全國各廠家有代表性的樣品。建立該品種廣泛的有效的模型。

附圖5 一致性檢驗模型的檢驗結果

附圖6 耐用性試驗CI示意圖