微小RNA—21在乳腺癌細胞中的作用

李振宇+馮云+盧秀波

【摘要】 目的：探討微小RNA（miR）-21在乳腺癌細胞（MCF7）中的作用。方法：對MCF7細胞轉染miR-21，采用免疫組織化學法檢測轉染后程序性細胞凋亡4（PDCD4）表達；用噻唑藍（MTT）比色法測轉染miR-21后MCF7細胞增殖；流式細胞術檢測轉染后MCF7細胞凋亡。結果：經免疫組織化學檢測，轉染組未見染色，對照組細胞胞質呈棕褐色，轉染組PDCD4的表達明顯低于對照組，MTT法檢測轉染組細胞活力增加（P<0.05）。轉染組的凋亡率為（3.14±0.24）%，明顯低于空白組、空質粒組的（8.04±0.02）%、（9.41±0.53）%，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：PDCD4是miR-21的靶基因之一，miR-21的高表達可促進乳腺癌的發展。

【關鍵詞】 乳腺癌； 微小RNA-21； 程序性細胞死亡因子4

The Role of MicroRNA-21 in Human Breast Cancer Cells/LI Zhen-yu，FENG Yun，LU Xiu-bo.//Medical Innovation of China，2014，11（28）：004-006

【Abstract】 Objective：To investigate the role of microRNA（miR）-21 in the human breast cancercells（MCF7）.Method：The MCF7 transfection of miR-21 was transited，programmed cell death 4（PDCD4） expression after transfection was detected by immunohistochemical，transfected with miR-21 MCF7 cell proliferation measured by tetrazolium（MTT） assay；transfected MCF7 cells withered die was detected by flow cytometry.Result：The control group was detected by immunohistochemistry，cytoplasmic brown color，the transfection group showed no staining，transfected group programmed cell death 4（PDCD4） expression was significantly lower than the control group，MTT assay transfected cell viability was significantly be promoted（P<0.05）.Transfection group apoptosis rate was（3.14±0.24）%，it was significantly lower than （8.04±0.02）%，（9.41±0.53）% in a blank group and empty plasmid group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：PDCD4 is a miR-21 target genes of high expression of miR-21 can promote the development of human breast cancer.

【Key words】 Breast cancer； miRNA-21； PDCD4

First-authors address：Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Luoyang 471009，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.28.002

微小RNA（miRNAs）是一種在真核生物中發現的內生性RNAs，長度大約為21～25個核苷酸，廣泛存在于哺乳動物基因組中，具有高度的保守性[1]?，F已明確，miRNA在腫瘤的發生發展中起著關鍵的調控作用。筆者通過瞬時轉染miR-21于人乳腺癌細胞系MCF7中，檢測轉染前后細胞的增殖、凋亡及PDCD4的表達，探討兩者的關系及在乳腺癌中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料 人乳腺癌細胞系MCF7購自南京科諾生物有限公司、Hyclone胎牛血清、DMEM培養液購自TM公司（寶信生物科技有限公司分裝）、真核質粒pEZX-eGFP-miR-21（廣州復能基因有限公司）、質粒抽提試劑盒及無內毒素質粒提取試劑盒（北京康為公司）、膠回收試劑盒（TaKaRa公司）、兔PDCD4IgG（Abcam公司）、抗兔抗體（Santa Cruz公司）、0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，實驗室配制）、噻唑藍（MTT）試劑盒（Sigma公司）、膜聯蛋白V（Annexin V）細胞凋亡檢測試劑盒（凱基公司）。

1.2 MCF7細胞的培養與細胞瞬時轉染 MCF7細胞于含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素，100 g/L鏈霉素的DMEM培養基中，37 ℃、5%CO2孵箱內貼壁培養。細胞轉染利用轉染試劑LipofectamineTM2000，嚴格按說明書進行，熒光顯微鏡于轉染24 h內觀察并估算轉染效率。

1.3 免疫組織化學染色 細胞爬片用4%多聚甲醛固定后，在3%過氧化氫-甲醇溶液條件下，常溫孵育10 min；……