臍帶血標本用于檢測新生兒溶血三項的臨床價值

沈美萍，陳士華

(平湖市第一人民醫(yī)院，浙江 平湖 314200)

臍帶血標本用于檢測新生兒溶血三項的臨床價值

沈美萍，陳士華

(平湖市第一人民醫(yī)院，浙江 平湖 314200)

目的：分析新生兒臍帶血與靜脈血對其溶血病(HDN)檢測結(jié)果有無差異。方法對O型孕婦(丈夫非O型)進行產(chǎn)前IgG溶血性抗體效價的測定，對效價≥1∶128的孕婦，在分娩時留取新生兒臍帶血，同時采集出生后1～2天和3～4天、5～7天靜脈血，進行新生兒溶血三項(直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗和放散試驗)檢測并比較。結(jié)果同一患兒臍帶血與出生后1～2天采集靜脈血檢測結(jié)果無差異，與出生后3～4天、5～7天采集的靜脈血檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論臍帶血和靜脈血雖均可作為新生兒溶血病的檢測，但臍帶血陽性率高，而且取材方便，便于早診斷早治療，可作為診斷HDN的首選標本。

新生兒溶血病；溶血三項試驗；臍帶血；靜脈血；IgG抗體效價

Abstract： [Objective] To analyze the differences of umbilical cord blood and veinal blood in testing neonatal hemolysis. [Method] Prenatal determination of IgG antibody titer was tested in pregnant women with O-type blood (husband with non-O). For pregnant women with titer ≥1∶128, newborn cord blood specimens were collected in childbirth, meanwhile veinal blood were collected 1-2 days, 3 - 4 days, 5-7 days after born. The direct antiglobin test、indirect antiglobulin test and elution test were carried out to detect neonatal hemolysis with above blood specimens. [Result] There are no difference between cord blood and veinal blood that collected 1-2 days after born.There are significant difference between cord blood and veinal blood that collected 3-4 days or 5-7 days after born. [Conclusion] Although umbilical cord blood and venous blood can be used as the specimens for detection of hemolytic disease of the newborn, cord blood had higher positive rate and drawing convenience, ease of early diagnosis and treatment. It can be used as the preferred diagnostic specimens.

Keywords: hemolytic disease of newborn; hemolytic three test; umbilical cord blood; venous blood; IgG antibody titer

新生兒溶血病(Hemolytic Disease of Newborn，HDN)一般特指母嬰血型不合，母體內(nèi)的IgG溶血性抗體通過胎盤進入胎兒及新生兒血液循環(huán)，引起胎兒及新生兒紅細胞破壞的被動免疫性溶血性疾病[1]。HDN主要包括ABO血型系統(tǒng)和RH系統(tǒng)不合的溶血，在我國以ABO溶血病為主[2]。近年來在新生兒溶血病防治方面的進展已使該病的嚴重性和預后有了明顯改善，但它仍是新生兒期黃疸和貧血的重要原因。本文探究新生兒臍帶血與靜脈血對溶血三項(直接抗人球蛋白、游離抗體、放散試驗)結(jié)果的異同，以尋找一種準確、方便、快速的標本來檢測新生兒溶血病。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年6月至2013年3月在我院產(chǎn)前檢查、分娩的O型產(chǎn)婦(丈夫非O型)及其分娩的新生兒114例，已排除母嬰血型相同的標本。

1.2 儀器和試劑

新生兒血型檢測卡、新生兒溶血病胎(嬰)兒不完全抗體檢測卡、酸放散試劑盒、HDN母體IgG抗體效價檢測卡、0.2mol/L 2-巰基應用液、免疫微柱孵育器、血型血清學離心機均由長春博訊生物技術(shù)有限公司提供。ABO標準紅細胞為上海血液生物公司提供。膽紅素試劑由日本和光株式會社提供。

1.3 方法

參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[3]及試劑盒說明書。采集孕周20周以上的孕婦靜脈血進行IgG抗體效價測定，選擇效價≥1∶128的孕婦，在分娩時留取新生兒臍帶血和靜脈血，均用EDTA抗凝進行溶血三項的檢測，并對溶血三項陽性的新生兒追蹤高膽紅素血癥的發(fā)生率。

1.4 診斷標準

(1)HDN診斷標準[4]：母嬰血型不合；抗體放散試驗和直接抗人球蛋白試驗其中一項陽性者；發(fā)生高膽紅素血癥為臨床型，否則為亞臨床型；(2)足月新生兒高膽紅素血癥的診斷標準[5]：24h內(nèi)>103μmol/L；48h內(nèi)>154μmol/L；3天以上>220.6μmol/L；主要為間接膽紅素。

1.5 統(tǒng)計學處理

應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理，采用χ2檢驗和Fisher確切檢驗法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 臍帶血與不同采集時間靜脈血的溶血三項陽性結(jié)果比較

60例新生兒的臍帶血與其出生1～2天時的靜脈血比較溶血三項陽性率，差異均無統(tǒng)計學意義(χ2分別為0.817、0.034、0.358，P>0.05)。同理，33例新生兒的臍帶血與其出生3～4天時的靜脈血比較這三項的陽性率，直抗試驗和游離抗體在這組間差異無統(tǒng)計學意義(P分別為0.108、0.783)。放散試驗結(jié)果有統(tǒng)計學意義(P=0.024)。21例新生兒的臍帶血與其出生5～7天時的靜脈血比較，游離抗體在這組間差異也無統(tǒng)計學意義(P=0.159)。直抗試驗和放散試驗有統(tǒng)計學意義(P分別為0.021、0.004)。結(jié)果見表1。

表1臍帶血與不同采集時間靜脈血的溶血三項陽性結(jié)果[N(%)]

檢測項目臍血靜脈血(1～2天)N=60臍血靜脈血(3～4天)N=33臍血靜脈血(5～7天)N=21直抗試驗 (+)12(20．0)11(18．3)9(27．3)3(9．1)6(28．5)0(0．0)游離抗體試驗(+)25(41．7)25(41．7)10(30．3)8(24．2)8(38．1)3(14．3)放散試驗 (+)36(60．0)31(51．7)22(66．7)13(39．4)13(61．9)3(14．3)

2.2 臍帶血與不同采集時間靜脈血檢測診斷HDN結(jié)果的比較

分別用114例新生兒臍帶血與靜脈血檢測溶血三項，根據(jù)診斷HDN的血清學標準，相同結(jié)果92例，HDN陽性52例，不同結(jié)果22例。經(jīng)四格表配對比較χ2檢驗，后2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 114例患兒分別采取臍帶血和靜脈血檢測診斷HDN的結(jié)果比較

臍帶血靜脈血(1～2天)+-靜脈血(3～4天)+-靜脈血(5～7天)+-合計+35414831074-0210110840合計35251419318114

注: χ2分別為2.25(P>0.05)，6.125(P<0.05)、8.1(P<0.05)。 “+”表示確診HDN陽性，“-”表示確診HDN陰性。

3 討論

當胎兒紅細胞所具有的血型抗原為母體所缺少時， 胎兒紅細胞通過胎盤進入母體循環(huán)，可使母體產(chǎn)生對胎兒紅細胞抗原相應的抗體，此抗體又經(jīng)胎盤循環(huán)作用于胎兒紅細胞導致紅細胞破壞產(chǎn)生溶血，可致早期流產(chǎn)或新生兒黃疸、貧血、肝脾腫大，嚴重者可有核黃疸，甚至死亡[6]。核黃疸一旦發(fā)生，其治療效果甚微，僅能以預防為主，因此，對ABO-HDN的早期診斷和早期治療具有重要意義。

傳統(tǒng)的ABO-HDN診斷方法是在患兒出現(xiàn)黃疸后查母嬰血型，血型不合再查溶血三項，若確診再進行治療，往往已在出生后2～3天，其治療效果明顯低于48h內(nèi)進行干預者[7]。再者HDN的臨床表現(xiàn)輕重不一，輕癥僅出現(xiàn)輕度黃疸，臨床上對沒有明顯溶血征象的新生兒并不采取特殊干預，易被視為生理黃疸而漏診，可能造成新生兒神經(jīng)系統(tǒng)不可逆損傷。所以為避免HDN的漏診和誤診，我們在孕婦圍產(chǎn)期體檢時就檢查夫妻血型，當孕婦為O型，其丈夫非O型時，用微柱凝膠法進行IgG抗A(B)的抗體效價測定。因微柱凝膠法比經(jīng)典的抗人蛋白法敏感，以1∶128效價作為臨界值有臨床意義[8]。故選擇抗體效價≥1∶128的孕婦分別在分娩時留取臍帶血，在新生兒出生1～7天中采集靜脈血進行溶血三項測定，對比這2種標本在溶血三項結(jié)果上的差異。

從表1可知，新生兒的臍帶血與其靜脈血在進行游離抗體檢測時，3組的陽性率均無差異，直抗試驗在最后一組有統(tǒng)計學意義，而放散試驗在后2組的陽性率比較均有統(tǒng)計學意義。由于游離抗體試驗只能確定血清中存在與其紅細胞不配合的血型抗體，還不能證實其紅細胞被致敏，放散試驗是三項試驗中敏感度最高的一項試驗，是判斷新生兒溶血最有力的證據(jù)[9]，同時也是直抗試驗的放大試驗。因此這2項的陽性與否關系到HDN的診斷，及早采集標本進行檢測顯得尤為重要。

從表2可知，2類標本在比較血清學診斷HDN的結(jié)果中有92例相同，22例結(jié)果不同，其中同時診斷HDN陽性52例。這52例患兒中，發(fā)生高膽紅素血癥29例，其余23例患兒未出現(xiàn)黃疸或黃疸癥狀較輕未達到高膽紅素血癥的標準。由于HDN臨床癥狀的輕重取決于抗原性的強弱、個體的免疫反應、胎兒的代償能力和產(chǎn)前的干預措施等，所以可以出現(xiàn)血清學診斷陽性而無臨床表現(xiàn)的現(xiàn)象，這符合ABO-HDN的臨床特點。22例不同檢測結(jié)果主要表現(xiàn)為臍帶血檢測時陽性，而靜脈血為陰性。其中有2例在第6天出現(xiàn)高膽紅素血癥。分析其原因可能是在采集新生兒靜脈血時，由于采集難度較高，血量未采足，抗體量太少而導致結(jié)果假陰性；還有隨著出生時間的延長，IgG抗體與患兒紅細胞的結(jié)合及消耗，HDN的檢出率也會隨之下降。

綜上所述，我們在進行溶血三項測定時，一定要重視標本的采集因素，確保檢驗結(jié)果的準確性。對于有臨床表現(xiàn)而溶血三項試驗陰性者，就要考慮是否因為疾病的發(fā)展而導致溶血性抗體消耗以致檢測結(jié)果假陰性還是其他疾病導致的溶血病。筆者認為，不能以患兒出現(xiàn)病理性黃疸后再考慮篩查ABO-HDN，而應該在產(chǎn)前母體IgG抗體效價升高及母嬰血型不合時，盡早采集標本，盡快篩查HDN。臍帶血采血容易，檢測結(jié)果準確，陽性率高，能給HDN的早期診斷提供可靠依據(jù)，可作為診斷HDN的首選標本。一旦血清學檢測陽性，密切監(jiān)護病情，及早采取干預措施，以達到不發(fā)病或減輕癥狀的目的，真正實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。

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Clinicalvalueofumbilicalcordbloodfortestingthreeindexofneonatalhemolysis

SHENMeipingCHENShihua

(The First People's Hospital of Pinghu， Zhejiang 314200，China)

R722.18

B

1672-0024(2014)02-0048-03

沈美萍(1971-)，女，浙江平湖人，本科，副主任技師。研究方向：臨床檢驗與輸血檢驗

平湖市科技計劃項目(編號：2013-067)